ICS 65.020.0 1 CCS B 16 41 河南省 地方标准 DB41/T 3053—2025 玉米孢囊线虫 鉴定和监测技术规程 2025 - 12 - 04发布 2026 - 03 - 03实施 河南省市场监督管理局 发布 DB41/T 3053 —2025 I 目次 前 言 ................................ ................................ ........... II 1 范围 ................................ ................................ ................ 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ...... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ .......... 1 4 试剂和设备 ................................ ................................ .......... 1 5 鉴定方法 ................................ ................................ ............ 2 6 监测方法 ................................ ................................ ............ 2 7 调查记录 ................................ ................................ ............ 3 附录 A （资料性） 玉米孢囊线虫危害症状和形态学特征 ................................ 4 附录 B （资料性） 酸性品红染色方法 ................................ ................ 6 附录 C （规范性） 玉米孢囊线虫系统调查表 ................................ .......... 7 DB41/T 3053 —2025 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由河南省农业农村厅提出 。 本文件由河南省植物保护标准化技术委员会（ HN/TC 32 ）归口。 本文件起草单位：河南农业大学、河南省植物保护检疫站、中国农业科学院植物保护研究所。 本文件主要起草人：崔江宽、汤继华、彭红、李好海、彭德良、焦永吉、陈锋、彭焕、安世恒、蒋 士君、孙炳剑、周扬、孟颢光、张雪海。 DB41/T 3053 —2025 1 玉米孢囊线虫鉴定和监测技术规程 1 范围 本文件规定了玉米孢囊线虫鉴定和监测的试剂和设备、 鉴定方法、监测方法、调查记录等内容。 本文件适用于玉米孢囊线虫的 鉴定和监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 SN/T 1848 植物有害生物鉴定规范 SN/T 2757 植物线虫检测规范 NY/T 3533 小麦孢囊线虫鉴定和监测技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 玉米孢囊线虫 玉米孢囊线虫 （Heterodera zeae ）属于垫刃亚目异皮科异皮属，主要危害玉米等多种禾本科作物 和杂草的一类世界性重要植物寄生线虫。 阴门锥 位于孢囊尾部，包含会阴部及其有关内部结构，是孢囊线虫分类和鉴定的重要依据。 严重度 表示植株根系感染玉米孢囊线虫病的 严重程度。严重度用分级法表示， 一般根据玉米大喇叭口期根 部白雌虫数量将严重度分为 0～4级。 4 试剂和设备 主要试剂 高岭土、蔗糖、酸性品红、 TAF固定液、加拿大树胶、玉米孢囊线虫 SCAR-PCR引物、rTaq酶、PCR 扩增试剂盒等。 主要设备 20目、100目和500目标准筛网，体视显微镜（ 10～100倍）和生物显微镜（ 40～1 000倍），台式低 速离心机（最大转速 6 000 r/min ），常规PCR仪、电泳仪和凝胶成像仪。 DB41/T 3053 —2025 2 5 鉴定方法 样品采集 观察玉米等作物地上部 是否出现黄化、矮化，叶色暗淡，叶边缘焦黄等症状；根部是否有晶莹的白 色粒状物，根系生长发育不良 。（危害症状参见附录 A）。采集有上述症状，生长异常的 植株根系和根 际土壤样品带回实验室，进行室内线虫种类鉴定。 形态学鉴定 5.2.1 孢囊和二龄幼虫分离 样品中孢囊的分离采用蔗糖简易离心法，二龄幼虫 的分离采用浅盘法。分离方法参考 NY/T 3533 的 处理方法。 5.2.2 拍照测量 参照SN/T 2757 的方法制作玻片， 在体视显微镜下观察孢囊、二龄幼虫、雌虫和雄虫等玉米孢囊线 虫不同虫态的形态特征，拍照，并在每张图上加对应比例尺。 5.2.3 鉴定依据 以孢囊和雌虫的形态学特征作为玉米孢囊线虫鉴定的主要依据， 二龄幼虫和雄虫作为鉴定的辅助依 据。具体描述详见附录 A。 分子生物学鉴定 将分离获得的孢囊和 二龄幼虫，进行 SCAR-PCR检测，根据凝胶电泳特异性条带结果进行玉米孢囊线 虫的辅助鉴定。 结果判定 参照SN/T 1848 鉴定规范， 依据形态学鉴定和分子生物学鉴定的结果判定是否为玉米孢囊线虫。 6 监测方法 系统调查 参照SN/T 1848 和SN/T 2757 规范，系统 调查玉米孢囊线虫 的田间孢囊数量、卵量、白雌虫和发育进 度。 调查点设定 选择代表性的玉米田 2～3块，每块不少于 1亩，作为玉米孢囊线虫病系统调查固定监测点。宜设立 监测观测圃，配置温度、降水量、湿度等气象因子的观测设备。 6.2.1 孢囊及卵量调查 在玉米播种和收获期，采用“ Z”字形取样法，选 5个点位，每点采集 5个小样，每个小样取不少于 200 mL的5 cm～15 cm 根际土壤， 将所取土样充分混合后取 1 kg左右装入样品袋， 注明采样时间、 地点等， 带回室内摊开自然风干。称取 200 g风干土样，分离土壤中孢囊（见附录 C），在体视显微镜下计数。随DB41/T 3053 —2025 3 机挑取、挤破 10个孢囊，制备悬浮液，计算每克土样中的卵量 ，评估风险指数。调查结果记入附录 C中 的表C.1。 6.2.2 风险指数 根据玉米播种和收获期每克土壤中玉米孢囊线虫的卵量， 评估田间玉米孢囊线虫病的发生风险指数， 共分为4级： 0级：无风险； 1级：低风险，每克土壤中的卵量为 1～10粒； 2级：中等风险，每克土壤中的卵量为 11～20粒； 3级：高等风险，每克土壤中的卵量大于 20粒。 6.2.3 根内线虫发育进度调查 夏玉米出苗后至抽雄期（春玉米从拔节期至抽雄期）每隔 10 d取样一次，在玉米灌浆期、乳熟期和 成熟期各取样 1次，每次挖取 5株玉米。将所采玉米根剪下后漂洗干净，采用酸性品红法染色（详细步骤 参见附录 B），在体视显微镜下观察根内幼虫的发育进度。调查结果记入附录 C中的表C.2。 6.2.4 白雌虫调查 在玉米大喇叭口期 至抽雄期，采用 5点取样法，每点挖取玉米 3～5株，轻轻抖去根部泥土， 记录单 株白雌虫数，调查严重度并计算病情指数。调查结果记入附录 C中的表C.3。 6.2.5 严重度分级 根据玉米大喇叭口期根部白雌虫的数量进行分级。分级标准为： 0级：无孢囊； 1级：极轻微感染（ 1～10个白雌虫 /株）； 2级：轻微感染（ 11～20个白雌虫 /株）； 3级：中度感染（ 21～40个白雌虫 /株）； 4级：严重感染（单株白雌虫在 40个以上）。 6.2.6 病情指数 病情指数计算公式如下： 𝐼=∑(ⅆ𝑗×𝑙𝑖) 𝑃×𝐷×100 式中： 𝐼 —— 病情指数； ⅆ𝑗 —— 严重度级值； 𝑙𝑖 —— 各级病株数，单位为株； 𝑃 —— 调查总株数，单位为株； 𝐷 —— 严重度最高级别值。 7 调查记录 详细记录调查方法和鉴定过程，并存档。 DB41/T 3053 —2025 4 附录 A （资料性） 玉米孢囊线虫危害症状和形态学特征 A.1 玉米孢囊线虫危害症状 玉米孢囊线虫为植物根部的定居型半内寄生线虫，大多数卵都保留在孢囊内。玉米孢囊线虫危害玉 米根部，导致根部产生病变，影响玉米植株的正常生长和发育，进而影响玉米的产量和 品质