中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 出口禽蛋及制品中大环内酯类 、 林可酰胺类药物残留量的测定 液相色谱 -质谱 /质谱法 Determination of macrolides and lincosamides residues in eggs and products for export—LC‑MS/MS methodICS 67.050 CCS C 53 2025 ‑12‑11发布 2026 ‑07‑01实施 中华人民共和国海关总署 　发 布 SN/T 5896—2025SN/T 5896—2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 ：杭州海关技术中心 、合肥海关技术中心 。 本文件主要起草人 ：侯建波、谢文、吴琼、韩芳、钱艳、宋伟、戴史熳、汪鹏、毛壬熠。 ⅠSN/T 5896—2025 出口禽蛋及制品中大环内酯类 、 林可酰胺类药物残留量的测定 液相色谱 -质谱 /质谱法 1 范围 本文件描述了禽蛋及制品中红霉素 、替米考星 、泰乐菌素 、泰妙菌素 、泰万菌素 、罗红霉素 、阿奇霉素 、 克拉霉素 、林可霉素和氯林可霉素残留量的液相色谱 -质谱 /质谱测定方法 。 本文件适用于鲜蛋 、松花蛋、蛋白粉中红霉素 、替米考星 、泰乐菌素 、泰妙菌素 、泰万菌素 、罗红霉素 、 阿奇霉素 、克拉霉素 、林可霉素和氯林可霉素残留量的定量测定和确证 ，其他蛋制品参照执行 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 。 4 方法提要 试样中大环内酯类和林可酰胺类药物采用 1%氨水乙腈提取 ，HLB（亲水 —疏水平衡 ）固相萃取柱净 化后，采用液相色谱 —质谱 /质谱法测定 ，红霉素、替米考星和林可霉素采用内标法定量 ，泰乐菌素 、泰妙菌 素、泰万菌素 、罗红霉素 、阿奇霉素 、克拉霉素和氯林可霉素采用外标法定量 。 5 试剂和材料 除非另有说明 ，所用试剂均为分析纯 ，水为 GB/T 6682规定的一级水 。 5.1 试剂 5.1.1 甲醇（CH 3OH） ：色谱纯。 5.1.2 甲酸（HCOOH ） ：色谱纯。 5.1.3 乙腈（CH 3CN） ：色谱纯。 5.1.4 氨水（NH 3·H2O） ：25%~ 28%。 1SN/T 5896—2025 5.2 试剂配制 5.2.1 甲醇 —水（30+70，体积比） ：30 mL甲醇（5.1.1）加入 70 mL超纯水，混匀。 5.2.2 乙腈 —水（20+80，体积比） ：20 mL乙腈（5.1.3）加入 80 mL超纯水，混匀。 5.2.3 1%氨水乙腈溶液 ：取4 mL氨水（5.1.4）于锥形瓶 ，加入 96 mL乙腈稀释 ，混匀。 5.2.4 0.15%甲酸水溶液 ：取1.5 mL甲酸（5.1.2）于1 000 mL容量瓶，加水稀释定容 ，混匀。 5.3 标准物质 5.3.1 大环内酯类和林可酰胺类药物标准物质 ：红霉素、替米考星 、泰乐菌素 、泰妙菌素 、泰万菌素 、罗红 霉素、阿奇霉素 、克拉霉素 、林可霉素和氯林可霉素的中文名称 、英文名称 、CAS号和分子式见附录 A，标 准物质纯度均大于或等于 91.2%。或具有有证标准物质证书的标准物质 。 5.3.2 同位素内标标准物质 ：红霉素 —D3、替米考星 —D3和林可霉素 —D3的中文名称 、英文名称 、CAS号和 分子式见附录 A，标准物质纯度均大于或等于 98%。或具有有证标准物质证书的标准物质 。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 标准储备液 （1.0 mg/mL） ：准确称取适量经折算的各大环内酯类和林可酰胺类药物标准物质 10 mg （5.3.1，折算后质量 ，精确至 0.000 1 g） ，分别用甲醇溶解 ，定容至 10 mL，配制成浓度为 1.0 mg/mL 标准 储备液。0 ℃~ 4 ℃下避光保存 ，有效期 3个月。 5.4.2 混合标准中间溶液 （10 μg/mL） ：分别准确移取 1.0 mg/mL 的标准储备液 （5.4.1）各1 mL，于100 mL 容量瓶中 ，甲醇定容至刻度 ，配制浓度为 10 μg/mL的混合标准中间溶液 。0 ℃~ 4 ℃下避光保存 ，有效期 1个月。 5.4.3 混合标准工作液 1（1 μg/mL） ：准确移取 1 mL的混合标准中间溶液 （5.4.2） ，移入 10 mL容量瓶， 用甲醇稀释并定容至刻度 ，配制浓度为 1 μg/mL的混合标准工作液 1。现配现用 。 5.4.4 混合标准工作液 2（100 ng/mL）：准确移取 1 mL的混合标准工作液 1（5.4.3），移入 10 mL容量 瓶，用甲醇稀释并定容至刻度 ，配制浓度为 100 ng/mL的混合标准工作液 2，现配现用 。 5.4.5 同位素内标储备液 （1.0 mg/mL） ：准确称取适量经折算的大环内酯类和林可酰胺类药物同位素 内 标标准物质 10 mg（5.3.2，精确至 0.000 1 g） ，分别用甲醇溶解 ，定容至 10 mL，配制成浓度为 1.0 mg/mL 的同位素内标储备液 。0 ℃~ 4 ℃下避光保存 ，有效期 3个月。 5.4.6 同位素内标混合标准中间溶液 （10 μg/mL）：分别准确移取 1.0 mg/mL 的同位素内标储备液 （5.4.5）各1 mL，于100 mL容量瓶中 ，甲醇定容至刻度 ，配制浓度为 10 μg/mL的同位素内标混合标准中 间溶液，0 ℃~ 4 ℃下避光保存 ，有效期 1个月。 5.4.7 同位素内标混合标准工作液 1（1 μg/mL）：准确移取 1 mL的同位素内标混合标准中间溶液 （5.4.6） ，移入 10 mL容量瓶，用甲醇稀释并定容至刻度 ，配制浓度为 1 μg/mL的同位素内标混合标准工 作液 1，现配现用 。 5.4.8 同位素内标混合标准工作液 2（100 ng/mL）：准确移取 1 mL的同位素内标混合标准工作液 1 （5.4.7） ，移入 10 mL容量瓶，用甲醇稀释并定容至刻度 ，配制浓度为 100 ng/mL的同位素内标混合标准 工作液 2，现配现用 。 5.4.9 空白基质溶液 ：将不含各大环内酯类和林可酰胺类药物的空白样品 ，按照 8.1和8.2前处理后得 到的溶液 。 5.4.10 标准工作溶液 ：根据需要用空白基质溶液 （5.4.9）将混合标准工作液 1（5.4.3）和混合标准工作液 2（5.4.4）稀释成为 0 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、150 ng/mL和300 ng/mL大环 内酯类和林可酰胺类的混合标准工作溶液 ，同位素内标浓度均为 20 ng/mL，临用现配 。 2SN/T 5896—2025 5.5 材料 5.5.1 HLB固相萃取柱 ：500 mg，6 mL或性能相当者 ，使用前依次用 5 mL甲醇和 10 mL水活化。 5.5.2 微孔滤膜 ：0.22 μm，有机相。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱 —质谱 /质谱仪：配电喷雾离子源 （ESI） 。 6.2 分析天平 ：感量为 0.01 g，感量为 0.000 1 g。 6.3 组织捣碎机 。 6.4 具塞离心管 ：15 mL和50 mL。 6.5 涡旋振荡器 。 6.6 固相萃取装置 。 6.7 离心机：最大转速不低于 4 000 r/min。 6.8 高速离心机 ：最大转速不低于 15 000 r/min。 6.9 容量瓶：10 mL，50 mL，100 mL，1 000 mL。 6.10 旋转蒸发仪 。 6.11 氮吹仪。 7 试样制备与保存 7.1 总体要求 在制样的操作过程中 ，应防止样品受到污染或发生药物残留含量的变化 。 7.2 鲜蛋及松花蛋 取代表性样品可食部分约 500 g，充分捣碎均匀 ，将试样均分成两份 ，分别装入洁净样品瓶内 ，密封， 并标明标记 。一份作为试验样 ，另一份在 -18 ℃以下避光保存 。 7.3 蛋白粉 取代表性样品约 100 g，将其搅拌均匀 ，将试样均分成两份 ，分别装入洁净样品瓶内 ，密封，并标明标 记。一份作为试验样 ，另一份在室温下避光保存 。 8 分析步骤 8.1 提取 8.1.1 鲜蛋及松花蛋 称取 5 g试样（精确至 0.01 g） ，置于 50 mL具塞离心管中 ，加入 1 μg/mL同位素内标混合标准工作液 1（5.4.7）0.1 mL，加入 20 mL 1%氨水乙腈溶液 （5.2.3） ，1 500 r/min涡旋 2 min，以3 000 r/min离心 3 min， 上清液转移至 50 mL容量瓶中 。再加入 20 mL 1%氨水乙腈溶液 （5.2.3）重复提取一次 ，合并提取液并定 容至 50 mL，混匀。准确移取 10 mL提取液于浓缩瓶 ，在40 ℃以下减压浓缩至近干 ，加10 mL水溶解残渣 ， 待净化。 3SN/T 5896—2025 8.1.2 蛋白粉 称取 1 g试样（精确至 0.01 g） ，置于 50 mL具塞离心管中 ，加入