SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4280.1—2015 国境口岸红头丽蝇DNA条形码鉴定方法 DNA barcoding identification of Calliphora vicina Robineau-Desvoidy 1830 at the frontier port 行业标准信息服务平台 2015-05-26发布 2016-01-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4280.1—2015 前言 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国河北出入境检验检 疫局。 本部分主要起草人：邱德义、岳巧云、张宪臣、刘德星、聂维忠、陈健、魏晓雅、吴可量、胡佳。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4280.1—2015 国境口岸红头丽蝇DNA条形码鉴定方法 1范围 SN/T4280的本部分规定了红头丽蝇的DNA条形码鉴定程序和结果判定 本部分适用于对红头丽蝇的成虫（包括肢体不全的成虫），以及蛹、幼虫、卵等DNA条形码鉴定的 工作。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T1876医学媒介生物标本采集、制作及保存规程 SN/T2752.4卫生检疫人员的自我防护规范第4部分：实验室人员 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应（PCR)技术的应用 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 红头丽蝇CalliphoravicinaRobineau-Desvoidy，1830 丽蝇科，丽蝇属。因为腹部呈青色，俗名为“blueblowfly”或者“bluebottle”，因其颊部橙红色，所以 中文名为红头丽蝇，为重要的媒介生物和法医昆虫。 3.2 DNA条形码 DNAbarcode 生物体内能够代表该物种的、标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA片段。DNA条形 码已经成为物种鉴定的重要工具，在节肢动物尤其是昆虫中，一般是指线粒体COI（线粒体细胞色素C 氧化酶亚基I)上的658bp的标准片段。 3.3 DNA条形码鉴定技术DNAbarcodingidentificationtechnology 一种利用DNA条形码基因片段进行生物物种鉴定和系统进化关系研究的技术，建立在基因扩增 和序列比对的基础之上，它具有不受物种发育状态、性别及形态特征完整与否的限制、减少对形态分类 专家的依赖、不受主观因素影响、准确率高、借助互联网可以实现数据共享等特点。 3.4 空白对照blank control 从基因组DNA提取步骤开始至PCR扩增和PCR产物检测整个过程，没有加人任何医学媒介昆虫 组织的空白，与其他受试的昆虫平行进行操作以观察实验是否处于正常状态。空白对照应没有PCR产 物条带产生。 1 SN/T 4280.1—2015 3.5 阳性对照positivecontrol 在PCR扩增过程中，与受试样品平行进行的，在正常反应情况下，一定能产生PCR产物的DNA为 反应模板，用于观察整个反应体系和反应过程是否正常，阳性对照应有PCR产物带产生。 3.6 阴性对照 negativecontrol 观察整个反应体系是否正常，确认没有受到污染，阴性对照应没有PCR产物条带产生。 3.7 凭证标本 voucherspecimen 获取DNA条形码等分子数据的来源（母体）标本。凭证标本可以是不完整的标本，但与本标本的 DNA条形码数据等分子凭证必须是一一对应的关系。凭证标本的保存非常重要，必须有唯一性标识 如：标本编号、存放、鉴定以及采集等详细信息。 3.8 分子凭证 molecular voucher 与凭证标本相对应的基因组DNA、PCR产物、DNA条形码序列及峰图，做克隆还应包括含DNA 条形码片段的阳性转化子。分子凭证的保存非常重要，必须有唯一性的编号、存放等详细信息，以便于 日后查证。 4缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BOLD：生物条形码数据系统（barcodingoflifedatasystem） 注：网址：http://www.boldsystems.org。 5原理 得到长度约为658bp（不包含引物的序列）的DNA片段，跟BOLD数据库进行比对，根据序列的相似度 实现物种鉴定的目的。 6引物 HCO2198 35′-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3 7鉴定程序 7.1准备 实验室需具备的设备和试剂参见附录A，实验室生物安全应符合GB19489要求，人员防护应符合 SN/T2752.4的规定；PCR防污染措施遵照WS/T230执行。 2