ICS65.020.20 CCSB05 21 辽宁省地方标准 DB21/T4396—2026 花生种质抗旱性鉴定技术规程 Technicalspecificationfordroughtresistanceidentificationofpeanut germplasm 2026-01-07发布 2026-02-07实施 辽宁省市场监督管理局  发布DB21/T4396—2026 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：沈阳农业大学、辽宁省农业农村发展服务中心。 本文件主要起草人：于海秋、张鹤、王婧、赵新华、郭晓雷、刘喜波、唐亮、赵姝丽、邹畅、张红、 吴蔚、任婧瑶。 本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：024-23447862。 文件起草单位通讯地址：沈阳农业大学（沈阳市沈河区东陵路120号），联系电话：024-88487135。DB21/T4396—2026 1花生种质抗旱性鉴定技术规程 1范围 本文件规定了花生种质抗旱性鉴定原理、方法和综合评价。 本文件适用于花生种质苗期抗旱性评价及抗旱品种鉴定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T3543.4农作物种子检验规程第4部分播种质量发芽试验 GB4407.2经济作物种子第2部分：油料类 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4鉴定原理 通过利用高浓度聚乙二醇-6000溶液模拟自然干旱环境，对植株根系施加渗透胁迫后，测定相对植 株鲜重、叶片相对含水量、比叶重、离体叶片失水速率、伤害度、游离脯氨酸含量和萎蔫指数等一系列 能够表征花生种质抗旱能力的关键生化指标，并运用隶属函数法对其抗旱性进行综合评价。 5鉴定方法 5.1样品准备 选取成熟饱满、大小一致的种子样品600粒，充分混合均匀，用1%的次氯酸钠溶液浸泡消毒10min， 自来水冲洗3次，蒸馏水冲洗3次。种子质量应符合GB4407.2的规定。 5.2幼苗培养 将待测种子样品在25℃条件下浸种12h，均匀摆放至铺有双层湿润滤纸的培养皿中，置于人工气 候箱内，按照GB/T3543.4规定进行纸间（BP）发芽。在种子发芽3d后，选取塑料盆钵40盆，装等量蛭 石，每盆均匀播种5粒，种子芽朝下，播种深度3cm，置于人工气候室内培养，培养条件为：温度28℃ /23℃（昼/夜）、光周期16h/8h（昼/夜）、光照强度400µmol·m-2·s-1～600µmol·m-2·s-1、相对湿度 60%～70%。 5.3根系处理 盆栽样品幼苗生长至4叶期，分成对照组和干旱处理组，每组20盆，每盆保留3株。将所有幼苗从塑 料盆钵中完整取出，用蒸馏水冲洗根部，吸干表面水分。对照组幼苗的根系完全浸泡在蒸馏水中，干旱DB21/T4396—2026 2处理组幼苗的根系完全浸泡在20%聚乙二醇-6000溶液中，两组培养条件均同本文件5.2的规定。设3次重 复。 5.4指标测定 5.4.1相对植株鲜重 干旱处理24h后，选取对照组和干旱处理组长势一致的幼苗各5株，蒸馏水冲洗根部，吸水纸吸干 表面水分，称量植株鲜重,按照公式（1）计算相对植株鲜重。 RFW=FWt FWCK×100%················································(1) 式中： RFW—相对植株鲜重（%）； FWt—干旱处理组植株鲜重（g）； FWCK—对照组植株鲜重（g）。 5.4.2叶片相对含水量 干旱处理24h后，选取对照组和干旱处理组长势一致的幼苗各5株，剪取倒数第3片复叶，称量叶片 鲜重；然后，将叶片完全浸泡在蒸馏水中至恒重，称量叶片饱水重；最后，将叶片放入烘箱80℃烘干 至恒重，称量叶片干重。按照公式（2）计算叶片相对含水量。 RWC=FW1−DW FW0−DW×100%·············································(2) 式中： RWC—叶片相对含水量（%）； FW0—叶片饱水重（g）； FW1—叶片鲜重（g）； DW—叶片干重（g）。 5.4.3比叶重 采用打孔称重法测定。干旱处理24h后，选取对照组和干旱处理组长势一致的幼苗各5株，剪取倒 数第3片复叶，用直径为0.5cm的打孔器，避开主叶脉，打20个小圆片，称量鲜重。按照公式（3）计算 叶片比叶重。 SLW=FW/[π0.5 22 ×20]············································(3) 式中： SLW—比叶重（g∙cm-2）； FW—叶片鲜重（g）。 5.4.4离体叶片失水速率 干旱处理24h后，选取对照组和干旱处理组长势一致的幼苗各5株，剪取第3片复叶，称量叶片鲜重； 然后,于室内避光自然风干,2h后称量叶片风干重；最后，于烘箱中80℃烘干至恒重，称量叶片干重。 按照公式（4）计算离体叶片失水速率。 RWL=（FW1−FW2）/DW·········································(4)DB21/T4396—2026 3式中： RWL—离体叶片失水速率（mg∙g-1∙min-1）； FW1—叶片鲜重（g）； FW2—叶片风干重（g）； DW—叶片干重（g）。 5.4.5伤害度 干旱处理24h后，选取对照组和干旱处理组长势一致的幼苗各5株，剪取倒数第3片复叶，用直径为 0.5cm的打孔器，避开主叶脉，打20个小圆片，于5mL蒸馏水中浸泡5h后，用电导仪测定初始电导值； 然后沸水浴15min，冷却至室温后，测定终电导值。按照公式（5）计算相对电导率，按照公式（6）计 算伤害度。 L=K1 K2×100%····················································(5) 式中： L—相对电导率（%）； K1—初始电导值； K2—终电导值。 I=Lt−Lck 1−Lck×100%··················································(6) 式中： I—伤害度（%）； Lt—干旱处理组的相对电导率（%）； Lck—对照组的相对电导率（%）。 5.4.6游离脯氨酸含量 5.4.6.1制定回归方程 用分析天平精确称取脯氨酸25.0mg，倒入小烧杯中，少量蒸馏水溶解，然后倒入250mL容量瓶， 加蒸馏水定容至刻度，作为标准溶液（脯氨酸含量为100μg/mL）；取50mL容量瓶6个，分别装入脯氨 酸标准溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL和3.0mL，用蒸馏水定容至刻度并摇匀，脯氨酸 浓度分别为1μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL、5μg/mL和6μg/mL。取具塞试管6支，分别吸取各 浓度的脯氨酸标准溶液2mL，再加入冰醋酸2mL和酸性茚三酮溶液2mL，每管在沸水浴中加热30min。 室温冷却后，各试管加入甲苯4mL，震荡30s，静置片刻，至色素全部转移到甲苯层，用移液器将各管 上层脯氨酸甲苯溶液吸至比色皿中，以甲苯溶液为空白对照，于520nm波长处比色。根据吸光值和脯氨 酸浓度制定回归方程。 5.4.6.2测定方法 干旱处理24h后，选取对照组和干旱处理组长势一致的幼苗各5株，剪取倒数第3片复叶，称取0.5g 并剪碎，置于试管中。然后向试管中加入3%的磺基水杨酸溶液5mL，加塞在沸水浴中提取10min（提取 过程中要经常摇动）。室温冷却后，吸取2mL提取液至另一具塞试管中，加入冰醋酸2mL和酸性茚三酮 溶液2mL，在沸水浴中加热30min。再次室温冷却后，加入甲苯4mL，震荡30s，静置片刻，萃取红色 甲苯层。用移液器将上层脯氨酸甲苯溶液吸至比色皿中，以甲苯溶液为空白对照，测定520nm波长的吸DB21/T4396—2026 4光值。根据回归方程计算测定液中脯氨酸的含量（μg/mL），根据公式（7）计算样品中游离脯氨酸含量 的百分数。 PC%=2.5Y FW×106×100%·············································(7) 式中： PC—样品中游离脯氨酸含量的百分数（%）； Y—测定液中脯氨酸的含量（μg/mL）； FW—叶片鲜重（g）。 5.4.7萎蔫指数 干旱处理24h后，选取对照组和干旱处理组长势一致的幼苗各5株，采用目测法，对照萎蔫指数等 级划分标准评定等级，若萎蔫程度介于两级之间，则为半级。萎蔫指数等级划分标准见表1。 表1萎蔫指数等级划分标准 等级 划分标准 0 花生叶片自然伸展，叶色鲜亮且有光泽，茎秆坚挺 1 叶片开始出现失水反应，叶色无光泽，顶一叶、二叶略微下垂 2 植株继续失水，叶片皱缩下垂幅度增大 3 部分叶片干硬、卷曲 4 所有叶片均下垂、皱缩，叶片变黄 5 叶片完全失水干硬，植株死亡 6抗旱性综合评价 6.1计算平均隶属函数值 根据测定的相对植株鲜重、叶片相对含水量、比叶重、离体叶片失水速率、伤害度、游离脯氨酸含 量和萎