ICS_13.310 A 92 GA 中华人民共和国公共安全行业标准 GA/T 188-1998 上海市技术疏督情报研究所 登记号QT994488 中毒检材中安定、利眠宁 的定性及定量分析方法 Methods of qualitative and quantitative analysis for diazapam and chlordiazepoxide in cases samples 1998-12-08发布 1999-03-01实施 中华人民共和国公安部发布 GA/T 188—1998 前 安定、利眠宁在中毒案件、事件中是较为常见的药物。1985年、1989年和1993年，公安部第二研究 所分别对中毒案件生物检材中安定、利眠宁的定性及定量分析方法进行了专门研究，选用的分析方法经 过了几年的办案运用和举办培训班的验证，在此基础上起草了“中毒检材中安定、利眠宁的定性及定量 分析方法”标准。本标准适用于中毒案件、事件中血、肝、胃、脑、胆汁、尿液以及其他现场所有物证中安 定、利眠宁药物的定性及定量分析。 本标准采用国际上先进的质量控制方法。为适应不同条件的各级实验室需要，本标准分别制定了 TLC、GC、HPLC的分析方法，以供选用。本标准的主要内容有方法原理；仪器、试剂种类；标准样品配 制；提取净化操作程序、分析步骤；计算方法及结果评价。 本标准的分析方法是，在1mL血液中加人5μg药物，安定和利眠宁药物回收率可达80%左右，定 量重复性好，可检测体内治疗量以上的药物。 本标准的附录A和附录B都是标准的附录。 本标准由中华人民共和国公安部提出。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：公安部第二研究所。 本标准主要起草人：李双庆、封世珍、王芳琳。 中华人民共和国公共安全行业标准 中毒检材中安定、利眠宁 GA/T 188-1998 的定性及定量分析方法 Methods of qualitative and quantitative analysis for diazapam and chlordiazepoxide in cases samples 1范围 本标准规定了安定、利眠宁药物引起中毒案件及事件有关检材进行分析检验的操作步骤、计算方法 及结果评价。 本标准适用于中毒后的生物检材及现场物证的定性及定量分析。 本标准需提供的检材为：中毒者的血、尿；中毒死亡者的血、肝、肾、脑、胃、胃内容物、肺、脾、胆汁等； 对怀疑注射进药者，还需提供注射部位肌肉；同时还需提供可疑含有药物的其他物证。 2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GA/T122—1995毒物分析名词术语 3定义 本标准采用GA/T122的定义。 第一篇气相色谱法(GC法） 4原理 本方法采用在生物检材中加人内标药物，经提取、净化后，用具有氮磷检测器(NPD)或火焰离子化 检测器(FID)的气相色谱仪测定其中药物。经与药物标准品对照，以保留时间RT或相对保留时间RRT 值作定性分析；并与平行操作提取的标准品比较，以峰面积或峰高值为依据，用内标法（或外标法)进行 定量分析。 5试剂 5.1乙醚、氟仿、无水乙醇、异丙醇。 5.2GDX403固相柱（GDX103柱）：40～60目，使用前用5mL甲醇淋洗，再用5mL蒸馏水淋洗使其 活化。 5.320%和1%氢氧化钠水液。 5.46mol/L、1%盐酸溶液。 中华人民共和国公安部1998-12-08批准 1999-03-01实施 1 查标准上建标网wwwiz321.net GA/T188-1998 5.5pH6溶液：6g磷酸二氢钠溶于450mL去离子水中，用1.0MNaOH调至pH6.0士0.1后定容至 500mL。 5.6碳酸钠。 5.7pH9.5缓冲液：1mol/L碳酸氢钠溶液用1mol/L碳酸钠水溶液调至pH值为9.5。 5.8单一药物标准储备液：精密称取安定、利眠宁药物标准品各50mg，分别装于50mL棕色容量瓶 中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，混匀，得每毫升含1.0mg的药物标准储备液，置一10℃冰箱中保 存，此储备液可使用0.5a。 5.9单一药物标准工作液：分别取单一药物储备液用乙醇稀释成0.50mg/mL、0.050mg/mL（NPD 用）的工作液，置4℃冰箱中保存，使用期限10d。 5.10内标物储备液：精密称取内标物SKFs25^50mg装于50mL棕色容量瓶中，用无水乙醇溶解并加 至刻度，混匀，得每毫升含1.0mg的内标物乙醇液，置一10℃冰箱中保存，此储备液可使用1a。 5.11内标物工作液：取内标物储备液用无水乙醇稀释成0.50mg/mL、0.050mg/mL的工作液，置 4℃冰箱中保存，使用期限10d。 5.12混合药物标准工作液：分别取单一药物1.0mg/mL的储备液装于同一个棕色容量瓶中，加无水 乙醇稀释至含各药物及内标物各0.050mg/mL的工作液，置4℃C冰箱中保存。以上配制的标准工作液 只适用于NPD检测器。如果选用FID检测器分析，标准工作液浓度应增加1020倍。使用期限10d。 6仪器及器材 6.1气相色谱仪：具有氮磷检测器或火焰离子化检测器的气相色谱仪，并配有色谱数据处理机。 6.2振荡器。 6.3水浴锅（或加热块）。 6.4快速液体混合器。 6.5微量注射器：10μL、100μL。 7操作方法 7.1定性分析 7.1.1提取与净化 7.1.1.1液一液萃取法 取检材血2mL（或尿5mL，胃内容物、胃、肝各2g）装于15mL具塞试管中，加入内标物工作液 100μL（0.05mg/mL）（如用FID检测器进行分析，应添加0.5mg/mL的药物标准液100μL），混匀。另 取一份相应的空白脏器作空白对照。 在所有样品中加0.5mLpH9.5的缓冲液混匀；加7mL乙醚振荡提取5min，离心5min。分出乙 醚装于小烧杯中，检材再用7mL乙醚提取5min，离心5min（2000r/min），乙醛液合并于烧杯中，在 50℃水浴上将乙醚挥干，立即取出。共用8mL1%盐酸分3次溶解，依次经滤纸过滤到10mL具塞试管 中。在试管中加人2mL石油醚，振荡3min，离心5min。用吸管吸出石油醚并弃去。盐酸液用固体碳 酸钠约0.3g调节pH为8左右，再加0.5mLpH9.5缓冲液，混勾。加2.0mL氯仿振提5min，离心 5min，用吸管吸出上层碱液并弃去，底层氟仿液转移至另一个干净的尖底试管中，置80℃水浴挥干。提 取物用100μL乙醇溶解，供分析。 7.1.1.2液一固萃取法 7.1.1.2.1血、尿等液体样品：取血1.0mL、尿10mL，各加内标物工作液50μL（0.05mg/mL），加 pH6的溶液10mL，混勾并同时做空白对照。所制备的样品液通过活化好的固相柱，使流速为 1~2mL/min。样品液流完后用5mL蒸馏水洗涤，最后抽干柱中残留水份，用4~6mL氮仿/异丙醇 （8：2)洗脱，在6070℃下挥干洗脱液，用50～100μL甲醇溶解，供GC/NPD分析。 2 查标准上建标网wwiz321.net GA/T188—1998 7.1.1.2.2胃、肝等固体样品：取绞碎的固体检材12g，加内标物10μg，用10mLpH6的溶液振提 1～2h，离心，滤纸过滤，得样品液。 胃、肝等固体脏器也可用水解法：取1~2g检材，加内标200μL（(0.05mg/mL），加6mol/L盐酸 右，得样品液。 以上样品液按7.1.1.2.1过固相柱的方法及步骤进行。 液一固萃取法应同时做空白对照。 7.1.2气相色谱分析参考条件 a）填充色谱柱 色谱柱：玻璃柱2m×2mm(i.d）； 固定液及担体：2%OV-17涂于100~200目ChromosorbWHP上； 检测器：氮磷检测器(NPD)或火焰离子化检测器(FID)； 温度：柱温240℃、汽化室280℃、检测器280℃； 载气（N2)：30mL/min、氢气（H)：3.5mL/min、Air：100mL/min。 b）毛细管色谐柱 色谱柱：BP-1弹性石英毛细柱，25mX0.25mm； 检测器：氮磷检测或火焰离子化检测器； 温度：240℃(1min） 载气（N2）：2.5mL/min、Air：100mL/min、氢气（Hz）：3.5mL/min、尾吹（Nz）：25mL/min。 7.1.3检测方法 7.1.3.1进样 将检材和对照样品提取液1～3μL注人前述条件的色谱柱，每个样品进样2～3次并同时注人混合 药物标准工作液和内标工作液。 7.1.3.2记录 分别记录各样品中药物及内标物的保留时间（RT)，并记录添加于检材中内标物及等量内标物工作 液在相同条件下的峰面积值。 7.1.3.3计算 计算各药物标准品及检材中各药物保留时间（RT)平均值，以内标RT为1，计算各药物RRT平均 值。 计算内标物的回收率： 检材中内标物峰面积平均值 内标物回收率（%）= 7.2定量分析 7.2.1提取与净化 精密量取血液1～2mL，称取绞碎的肝组织等1～2g各2份，置于15mL具塞试管中。另取相应的 空白脏器添加待测药物各2~10μg（如果选用FID检测器进行分析，应添加0.50mg/mL的药物标准 100μL)。在检材及空白添加样品中各加入内标物2～10μg，若选用FID检测器分析，应加100μL 0.50mg/mL的标准液。以下操作选7.1.1中的种方法进行。 7.2.2分析条件同7.1.2。 7.2.3测定方法 7.2.3.1进样