EJ 中华人民共和国核行业标准 EJ/T952-95 20022826 甲胎蛋白放射免疫分析试剂盒 1995-07-05发布 1995-11-01实施 中国核工业总公司 发布 中华人民共和国核行业标准 EJ/T952-95 甲胎蛋白放射免疫分析试剂盒 1主题内容与适用范围 本标准规定了甲胎蛋白（以下简称AFP)放射免疫分析试剂盒的技术条件及检验方法 等。 本标准适用于固相微球二抗法的AFP放射免疫分析试剂盒。也适用于其它免疫沉淀剂 为分离剂的AFP放射免疫分析测定盒。 2引用标准 GB11806放射性物质安全运输规定 EJ/T804放射性同位素产品代号 3·产品代号及试剂盒的组成 3.1产品代号 根据EJ/T804规定编写产品代号。 AFP放射免疫分析试剂盒的代号为：RIAI125701X 3.2试剂盒的组成及主要试剂特性 3.2.1试剂盒组成 试剂盒的主要组成如下： 1251-AFP; a. b. AFP标准品； c. 抗AFP抗体， d. 温育液； e. 固相第二抗体。 3.2.2 主要试剂特性 主要试剂特性如下， a. 标记抗原 比活度，不小于1.85MBq·g~"， 放射化学纯度：不小于90%。 bAFP标准品： 应用国家标准品标定，标准品的标定值与国家标准品的标示值偏差不超过士10%。 c：抗AFP抗体 中国核工业总公司 1995-07-05批准 1995-11-01实施 E3/T 952-95 亲合常数：K≥1×101Lmol-1， 交叉反应：与IgG交叉反应小于2×10-5,与白蛋白交叉反应小于2X10-s。 4 技术指标 41灵敏度 最小检出值不大于3μg·L~1 4.2非特异结合率(NSB) 不大于5%。 4.3最大结合率(B。) 应大于40%。 4.4精密度 用变异系数(CV)表示。 批内CV不大于8%（n≥10）， 批间CV不大于12%（n≥10)。 4.5准确度 在一次测定中，低、中、高三个剂量的质量控制血清测定值，均应在允许范围(又士2SD) 内。 4.6回收率(R) 应在90%~110%之间。 4.7相关系数(r)和有效剂量值(ED) 剂量响应曲线的相关系数r的绝对值不小于0.99。 有效剂量ED25、ED50、ED75（即结合率分别为25%、50%、75%时的对应剂量值）均应 在剂量响应曲线范围内，其变化均应在(X士2SD)范围内。 4.8测定范围 推荐在3～400μg·L~1之间。 4.9有效期 在2～8℃条件下贮存，从生产日期计算，有效期为56d。 5检验方法 按附录A(补充件)实验程序操作，也可以用其它等效方法。 5.1灵敏度的测定 求出零管结合率(B。)的标准差SD(n≥10),以零管结合率的均值减去2SD·所得结合率 的相应剂量值，即为试剂盒的灵敏度。 5.2NSB的测定 取两支放免试管，分别加入与测定样品相同体积的AFP零标准血清（或温育液）和 125I-AFP及与抗AFP抗体相同体积的温育液操作。NSB按公式(1)计算。 EJ/T·952:-95 NSB = [(C, - C)/(C, - C)I× 100% (1) 式中：C.——非特异管计数率，计数/min，"?>. C,-仪器本底计数率，计数/min， C总放射性管计数率，计数/min。 5.3B。的测定 B按公式(2)计算： B。=[(C。-C,)/(C,-C)J× 100% (e) 式中：C。—零标准管计数率,计数/min。 5.4精密度的测定 精密度用样品测定值的变异系数表示。CV按公式(3)计算。 CV(SD/X)×100% (3) 式中;SD--n次测定AFP值的标准差； X—n(n≥10)次测定AFP的均值。 5.5准确度的测定 用低、中、高三个剂量的质量控制血清测定值计算SD。 5.6R的测定 在已知AFP含量的血样中加入一定量的AFP，然后测定血样中总AFP含量。R按公 式(4)计算。 R =-[(D, - D)/D.J × 100% ·(4) 式中：D,—血样中测得的总AFP值，μg·L-1, D—血样中已知的AFP值，g·L1, D,—血样中加入的AFP值，μgL-1。 5.7剂量响应曲线的绘制及r、ED值的计算 各标准剂量点的放射性结合率B(习惯用B/B。表示)按公式(5)计算： B= [(C, - C.)/(C。-C,)] × 100% 式中;C,各标准剂最点的放射性计数率,计数/min。 以各标准剂量点的B为纵坐标，以各相应的标准剂量点的浓度为横坐标，绘制剂量响 应曲线，并求出r、ED值。 3 EJ/T 952-95 6.检验规则 产品的质量检验分为型式检验和出厂检验两项。 61# 型式检验 产品投产前及投产后工艺流程改变、原料变更，均按第4章技术要求中规定的内容检 验。 6:2出厂检验 6.2.1全检项目 · 试剂盒组份、包装及标志等。 6.2.2抽检项目 NSB、B。剂量响应曲线及质量控制血清测定值。 6.2.3抽检方式 抽检采取随机取样方式。100盒以下抽取1盒，101～300盒抽取2盒，301~500盒抽取 3盒，501盒以上抽取4盒。 6.2.4抽检结果判断 如果检验结果有一项指标不符合本标准规定的技术要求时，应重新以两倍的数量随机 取样进行复检。经复检仍有一项指标不符合本标准规定的技术要求时，则本批试剂盒判为不 合格。 6.2.5 检验证书 产品应有检验合格证书，见附录B（参考件）。 7标志、包装、运输和贮存 7.1标志 包括试剂盒封面标志，放射性试剂瓶标志，试剂标志。 7.1.1试剂盒封面标志 试剂盒封面标志内容包括： 生产厂家， a. 产品名称 b. c. 注册商标； d. 产品代号： 产品批号， e. f. 批准文号， 注意事项； g. h. 有效期。 7.1.2 放射性试剂瓶标志 放射性试剂瓶标志内容包括： 名称； a. EJ/T 952-95 b.批号; 放射性活度， 测量日期； 放射性标志。 e. 7.1.3 试剂瓶标志 试剂瓶标志内容包括： a. 名称； 批号； c. 浓度； d.贮存条件； e. 有效期。 7.2.包装和运输 7.2.1包装 包装必须保证运输及防护安全，应符合GB11806豁免运输包装规定。 包装盒内必须附有产品使用说明书。说明书内容包括： 生产厂家； a. b. 产品名称； 产品代号； c. 批准文号； d. 产品批号； e. f. 适用范围； 方法原理； g. h. 试剂盒的组成及其试剂配制； i. 操作程序； 小. 结果计算； k. 质量指标； 注意事项； m. 有效期； 参考文献。 n. 7.2.2运输 运输应符合GB11806的规定。 7.3贮存 试剂盒应贮存于2~8℃ 5 EJ/T-952-95 附录A 甲胎蛋白放射免疫分析方法 (补充件） A1方法提要 甲胎蛋白是一种特殊球蛋白，由单一的多肽链组成。其分子量约68000。 本方法采用竞争放射免疫分析法，即待测血清或组织中的AFP和1"I-AFP与有限量的 AFP抗体在适宜条件下进行竞争性结合反应。一部分125I-AFP与抗体结合，而另一部分则 游离状态。1"1-AFP与抗体结合的比例决定于待测样品或标准中未标记AFP的量。抗原 抗体复合物用固相微球二抗作分离剂沉淀下来，测定其放射性计数率：用不同浓度的标准， 获得剂量响应曲线。从剂量响应曲线上查出被测样品中AFP的含量。 A2仪器及设备 I计数器、微量加样器、放免试管、负压泵、离心机、值温水浴锅和一般生物化学实验室 仪器设备。 A3实验程序 实验程序包括： 按说明书要求配制有关试剂， a. 试管编号。1,2为总放射性管(T);3,4为NSB管;5,6为零标准管；7~18为标准 b. 管；标准管后依次为质量控制血清及样品管； c。操作顺序，按表A1实验顺序进行操作，逐步加入相应的试剂。溶液量以μL表示。 A4结果计算 各管沉淀物的放射性计数率减去NSB的放射性计数率，标准管按公式(5)计算，样品 管的结合率B(B/B。)计算见下式。 B(B/B) =[(C,-C.)/(C。-C,)]× 100% (A1) 式中：C,—待测样品管沉淀物的放射性计数率，计数/min。 以各标准管的B(B/B。%)为纵坐标，AFP标准剂量点的浓度为横坐标，绘制剂量响应 曲线。根据待测样品的B，在剂量响应曲线上查得样品AFP含量（见图A1)。