EJ 中华人民共和国核行业标准 EJ/T 950-95 人绒毛膜促性腺激素放射免疫 分析试剂盒 1995-07-05发布 1995-11-01实施 中国核工业总公司 发布 中华人民共和国核行业标准 人绒毛膜促性腺激素放射免疫 EJ/T 950-95 分析试剂盒 主题内容与适用范 本标准规定了人绒毛膜促性腺激素（简称HCG)放射免疫分析试剂盒的技术条件、检验 方法等。 本标准适用于以免疫沉淀剂为分离剂的HCG放射免疫分析试剂盒。 引用标准 GB11806放射性物质安全运输规定 EJ/T804放射性同位素产品代号 3产品代号及试剂盒的组成 3.1产品代号 应根据EJ/T804的规定编写相应产品代号，HCG放射免疫分析试剂盒的代号为： RIA 25 14 包装规格代码 分离剂类别代码 产品代码： 类别代码 核素质量数代码 ~元素代号 放射免疫分析试剂盒代号 3.2试剂盒的组成及主要试剂特性 试剂盒的主要组成为： 1251-HCG; a. 中国核工业总公司1995-07-05批准 1995-11-01实施 1 EJ/T 95095 HCG标准品； b. 抗HCG抗体； d.分离剂。 3.3主要试剂特性 主要试剂特性为： · 1251-HCG a. 比活度：66.5~133GBqμmol-1；放射化学纯度：大于90% b.HCG标准品 应用国家标准品标定，标定值与国家标准品的标示值偏差应不大于土10%。 抗HCG抗体 c. 亲和常数K≥1×101°L·mol-1 试剂盒技术指标 4.1灵敏度 最小检出值不大于40mIU/mL。 4.2非特异结合率（NSB） 应不大于5%。 4.3·最大结合率（B。） 应大于40%。 4.4精密度 用样品测定值的变异系数（CV）表示。 批内CV应不大于8%（n≥10)； 批间CV应不大于12%（n≥10) 4.5准确度 在一次测定中，低、中高三个剂量的质控血清测定值均应在允许范围(区士2SD.)内。 4.6回收率（R） 应在90%~110%之间。 4.7相关系数r和有效剂量值ED 剂量响应曲线的相关系数r的绝对值应不小于0.99。有效剂量ED75、ED50、ED25（即 结合率分别为75%、50%、25%时对应的剂量值)应在可测范围内，其变化均应在（X士2SD )范围内。 4.8测量范围 推荐在40～1600IU·L-1之间。 4.9有效期 在2～8℃条件下贮存。自生产之日起，有效期不少于42d。 2 EJ/T950-95 检验方法 按附录A(补充件)实验程序操作，也可以按其它等效实验程序操作。 5.1灵敏度的测定 按实验程序操作，做标准曲线，求出零标准管结合率(B。)的平均值及标准偏差SD(n≥ 10)。用平均值减两倍标准偏差所得结合率在标准曲线上相应的剂量值即为试剂盒的灵敏 度。 5.2NSB的测定 取两支放免试管，分别加入与测定样品和抗血清相同体积的温育液及1251-HCG，然后按 实验程序操作。NSB按公式(1)计算。 NSB={(C,-C)/(C,-C)JX100% (1) 式中C.非特异管计数率，计数/min, Cp—仪器本底计数率，计数/min; C,一总放射性管计数率，计数/min。 5.3＇B。的测定 按实验程序操作，B。按公式(2)计算。 B=[(C-C,)/(C,-C,)JX100% (2) 式中：C。—零标准管计数率，计数/min。 5.4精密度的测定 精密度用样品测定值的变异系数CV表示。按实验程序操作，CV按公式（3)计算。 CV=(SD/X)X100% (3) 式中：SD—n(n≥10)次测定HCG值的标准差，IU·L-1； X——n(n≥10)次测定HCG的均值,IU·L-1。 5.5准确度的测定 按实验程序操作，用低、中高三个剂量的质量控制血清测定结果计算SD。 5.6R的测定 在已知HCG含量的血样中加入一定量的HCG，然后测定血样中总HCG含量。按实验 程序操作，R按公式（4)计算。 R=[(D,-D)/D.JX100% (4) 式中：D,血样中测得的总HCG值，IU·L-, D——血样中已知的HCG含量,IU·L-1; D.—血样中加入的HCG量，IU·L-1。 5.7剂量响应曲线的绘制及r、ED值的计算 按实验程序操作。各标准剂量点的放射性结合率B(习惯用B/B。表示），按公式（5)计 算: B=[(C,-C,)/(C。-C,)JX100% .. (5) 式中：C, 一各标准剂量点的放射性计数率，计数/min。 8 EJ/T950—95 以各标准剂量点的B为纵坐标，以各相应的标准剂量点的浓度为横坐标，绘制剂量响 应曲线并计算得出ED75、ED50、ED25的值。 检验规则 6.1型式检验 产品投产前及投产后工艺流程改变，原料更换，均须按本标准技术要求5.1～5.7中规 定的内容检验。 6.2出厂检验 6.2.1全检方式与全检项目 对出厂的每一个试剂盒均用目视法检查其组分、包装及标志。 6.2.2抽检 6.2.2.1抽检项目 NSB、B。剂量响应曲线及质量控制血清测定值。 6.2.2.2、抽检方式 采取随机取样方式。发货量为1~100盒时抽1盒；101～300盒时抽2盒；301～500盒 时抽3盒；501盒以上时抽4盒。 6.2.2.3抽检结果判断 以本标准规定的技术要求作为判断依据。所检各项指标全部符合要求时判为合格；若有 一项不符合要求，应重新以原来的两倍的数量抽样复检，复检中有一项指标不合格，则整批 试剂盒判为不合格。 6.2.3检验证书 产品应有检验合格证书，见附录B（参考件）。 标志，包装、运输和贮存 7.1，标志 包括试剂盒封面标志、放射性试剂瓶标志、试剂瓶标志 7.1.1· 试剂盒封面标志包括： 生产厂家； b. 产品名称； 注册商标； c. d. 产品代号； e. 产品批号； 批准文号： 注意事项； h. 有效期。 7.1.2 放射性试剂瓶标志包括： 名称； a. 4 EJ/T950-95 批号； c. 放射性活度； 测量日期； d. e. 放射性标志。 7.1.3试剂瓶标志包括： 名称； a. b. 批号； c. 浓度； d．贮存条件； e. 有效期。 7. 2 包装和运输 7. 2. 1 包装 包装盒内必须附有产品使用说明书。说明书内容包括： 生产厂家； a. b. 产品名称； c. 产品代号； d. 批准文号； e. 产品批号； f. 适用范围； g: 方法原理； 试剂盒的组成及试剂配制； h. i. 操作程序； i. 结果计算； k. 技术指标； 1. 注意事项； m.: 有效期； 参考文献。 n. 包装必须保证运输及防护安全，应符合GB11806豁免运输包装规定。 7.2.2运输 运输应符合GB11806的规定。 7.3贮存 试剂盒应贮存于2～8℃条件下。 5 EJ/T 950~~95 附录A 放射免疫法测血清HCG浓度 (补充件) A1·原理 HCG和135I-HCG与限量抗HCG抗体进行竞争免疫反应，125I-HCG与抗HCG抗体的 量越多，1251-HCG和抗HCG抗体的结合量越少。加入分离剂，使125I-HCG和抗HCG抗体的 结合物沉淀出来，弃上清液，通过测定沉淀的放射性计数率即可得知HCG的加入量。 5. 2 A2 仪器设备 微量加样器、恒温水浴箱、免疫试管、冰箱、离心机、负压泵及125I放免测量仪等。 A3 实验程序 A3.1按说明书要求配制有关试剂。 A3.2试管编号。1,2为总放射性(T)管；3,4为非特异管（NSB）管；5,6.为零标准管；7~ 18为标准管；标准管编号以后为质量控制血清及样品管。 A3.3操作顺序，按表A1实验顺序进行操作，逐步加入相应的试剂。溶液量以μL表示。 表A1HCG测定操作程序表 试剂编号 操作程序 T(1,2) NSB(3,4) 零标准(5,6) 标准（7~18) 样品 蒸馏水 100 100(零标准) 100 标准品.. 100 - 待测血清样品 100 1251-HCG 100 100 100. 100 100 抗HCG抗体 100 100 100 37℃温育2h 免疫分离剂 1000 1000 1000 1000 摇匀，离心（3500r/min），20min弃上清液（T管除外）。测量T管和各管放射性计数率。 A4结果计算 各管放射性结合物计数率减去NSB管放射性计数率，算出标准管或样品管的B。 标准管按式（5）计算。样品管按式（A1)计算。 6