SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4235—2015 猪戊型肝炎检疫技术规范 Quarantine protocol for swine hepatitis E 行业标准信息服务平台 2015-05-26发布 2016-01-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4235—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫 局、中华人民共和国北京出人境检验检疫局、上海市动物疫病预防控制中心。 本标准主要起草人：鱼海琼、张强、乔彩霞、罗长保、赵吟、蔡先全、刘佩红、周锦萍、李树清、吴晓薇。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4235—2015 猪戊型肝炎检疫技术规范 1范围 本标准规定了猪戊型肝炎的临床诊断、酶联免疫吸附试验、实时荧光聚合酶链式反应检测技术。 本标准适用于猪戊型肝炎的诊断和流行病学调查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T18088出入境动物检疫采样 GB/T19489 9实验室生物安全通用要求 3 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 HEV:戊型肝炎病毒 BSA：牛血清白蛋白 HRP：辣根过氧化物酶 OD值：光密度值 ELISA：酶联免疫吸附试验 荧光RT-PCR：实时荧光聚合酶链式反应 行业标准信息服务平台 4试剂 4.1 HEV阳性对照血清。 4.2 HEV阴性对照血清。 4.3 HEV抗原。 4.4 牛血清白蛋白。 4.5 HRP标记的兔抗猪IgG。 4.6 0.01mol/LPBS缓冲液。 4.7 抗原稀释液（见附录A）。 4.8 洗涤液（见附录A）。 4.9 吐温-20。 4.10 封闭液（见附录A）。 4.11 显色剂（见附录A）。 4.12 终止液（见附录A）。 4.13 TRIZOL。 4.14 三氯甲烷。 1 SN/T 4235—2015 4.15 异丙醇：-20℃预冷。 4.16 0.1%DEPC水。 4.17 75%乙醇。 4.18 RNA酶抑制剂（40U/μL)。 4.19 TagDNA聚合酶（5U/μL）及相应10X缓冲液。 4.20 M-MLV反转录酶（200U/uL）及相应5×反转录反应缓冲液。 4.21 dNTP(2.5 mmol/L)。 4.22 MgCl,(25 mmol/L)。 5设备 5.1 二级生物安全柜。 5.2 高压灭菌锅。 5.3 3微量移液器。 5.4酶标仪。 5.5洗板机。 5.6高速冷冻离心机。 5.7 荧光PCR仪。 9 临床诊断 6.1 流行病学 戊型肝炎的流行病学特点与甲肝相似，参见B.1。 6.2 2临床症状及病理变化 猪自身感染HEV临床症状并不明显，参见B.2。 6.3 初步诊断 根据临床症状、病理变化和流行病学可以作出初步判断，进一步诊断应采集样品进行实验室检测。 准信息服务平 该病原属人畜共患病原，涉及病原的检测应在二级生物安全实验室进行，样品保存和废弃物处理应按照 GB/T19489生物安全要求进行。 7实验室检测 7.1 酶联免疫吸附试验（间接ELISA） 7.1.1原理 96孔微量板的奇数列包被有戊型肝炎病毒衣壳蛋白重组抗原，偶数列则未包被。检测样品和对照 样品加人到反应孔内，每个样至少加平行的两孔（一个奇数孔和一个偶数孔）。如果血清中存在特异性 抗体，会形成抗原-抗体复合物。洗板后，加人HRP标记的酶结合物，该酶标结合物与HEV抗原抗体 复合物结合，形成抗原-抗体-酶复合物。洗去过剩的酶结合物，加人底物液，样品中特异性抗体的数量 就会在奇数、偶数孔间出现颜色差异：如果存在抗体，加人终止液后蓝色液体会变成黄色；如果没有抗 体，则无色。 2