ICS 65. 160 YC X 87. 备案号：25971--2009 中华人民共和国烟草行业标准 YC/T 288--2009 烟草及烟草制品 多元酸（草酸、苹果酸 和柠檬酸)的测定 气相色谱法 Tobacco and tobacco products--Determination of polyacids (oxalic acid, malic acid and citric acid)-Gas chromatography method 2009-03-30发布 2009-05-01实施 发布 国家烟草专卖局 中华人民共和国烟草 行业标准 烟草及烟草制品 多元酸（草酸、苹果酸 和柠檬酸)的测定 气相色谱法 YC/T288—2009 * 中国标准出版社出版发行 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 网址www.spc.net.cn 电话：68523946 68517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销 * 开本880×12301/16印张0.5 字数9千字 2009年4月第一版2009年4月第一次印刷 * 书号：155066·2-19718 如有印装差错由本社发行中心调换 版权专有侵权必究 举报电话：（010)68533533 YC/T288—2009 前 言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会（SAC/TC144/SC1)归口。 本标准起草单位：中国烟草总公司郑州烟草研究院、广东中烟工业有限责任公司。 本标准主要起草人：谢复炜、王冰、沈光林、夏巧玲、王昇、纪庆升、郭吉兆。 I YC/T288—2009 烟草及烟草制品多元酸（草酸、苹果酸 和柠檬酸）的测定气相色谱法 1范围 本标准规定了烟草及烟草制品中三种多元酸（草酸、苹果酸和柠檬酸）的气相色谱测定方法。 本标准适用于烟草及烟草制品中三种多元酸（草酸、苹果酸和柠檬酸）的测定。 本方法测定烟草及烟草制品中草酸的定量限为0.11mg/g、苹果酸的定量限为0.47mg/g、柠檬酸 的定量限为0.11mg/g。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 3原理 用5%硫酸-甲醇(体积分数)溶液回流样品，使其中的多元酸与甲醇充分反应生成相应的甲酯，然 后用二氯甲烷萃取，萃取液经无水硫酸钠干燥后，通过气相色谱检测其中三种多元酸类化合物的含量。 4试剂 除特别要求以外，均应使用分析纯级试剂，水应为蒸馏水或同等纯度的水。 4.1甲醇，色谱纯。 4.2浓硫酸，分析纯。 4.3二氯甲烷，色谱纯。 4.4草酸，纯度>99.8%。 4.5苹果酸，纯度>99.5%。 4.6柠檬酸，纯度>99.5%。 4.7已二酸，纯度>99.8%。 4.8衍生化溶液：制备5%(体积分数)的硫酸（4.2)甲醇(4.1)溶液。 4.9内标溶液：称量1g已二酸（4.7)，精确至0.1mg，置于50mL烧杯中，加人30mL甲醇（4.1)完全 溶解，转移到50mL的容量瓶中，加入甲醇（4.1)定容至刻度。 注：内标溶液置于一10℃贮存，有效期为1个月。 4.10多元酸标准溶液：称量0.6g草酸（4.4)、3g苹果酸（4.5)、1g柠檬酸（4.6)，准确至0.1mg，置于 刻度。 注：标准溶液置于一10℃贮存，有效期为1个月。 5仪器 常用实验仪器以及下述各项。 5.1分析天平，精确至0.1mg。 1 YC/T288—2009 5.2水浴锅。 5.3气相色谱仪，配置有氢火焰检测器，进样口应具有分流进样方式。进样口、柱箱、检测器应分别配 有独立可控制的加热单元。 6分析步骤 6.1试样制备 按YC/T31制备试样，并测定水分含量。 6.2样品萃取 称取约1g样品，准确至0.1mg，置于100mL平底烧瓶内，准确加人40mL5%硫酸-甲醇（体积分 三次，合并萃取液，加人3.5g无水硫酸钠干燥过夜。取适量上层澄清萃取液进行气相色谱分析。 6.3气相色谱条件 按照仪器说明书对气相色谱仪进行操作。较适合的色谱条件如下： 推荐色谱柱：DB-5MS，30mX0.25mmX0.25μm； 预柱：空白毛细管柱，2m×0.25mm； 进样口：280℃； 检测器：FID，280℃； 载气：氮气（纯度99.999%）； 柱流量：2.0mL/min，恒流； 进样量：1μL； 分流比：5：1； 程序升温：45℃保持2min，以6℃/min的升温速率升至280℃，保持20min； 分析时间约为40min。 6.4标准曲线的制作及样品多元酸含量的测定 分别取多元酸标准溶液（4.10)125μL、250μL、500μL、1mL、2mL、5mL于100mL平底烧瓶中，各 2h，冷却至室温。取回流液10mL于100mL分液漏斗中，加人20mL蒸馏水混匀，每次用10mL二氯 甲烷萃取，萃取三次，合并萃取液，加人3.5g无水硫酸钠干燥过夜。取适量萃取液进行气相色谱分析 （多元酸标样色谱图参见附录A中图A.1）。以各多元酸相应面积与内标相应面积之比为横坐标，以各 多元酸浓度与内标浓度之比为纵坐标绘制标准曲线。对校正数据进行线性回归（R²>0.99)，然后测定 烟草样品，并根据样品中多元酸的峰面积计算每一烟草样品中三种多元酸的含量。每个试样应平行测 定两次（典型烟草样品中多元酸色谱图参见附录A中图A.2）。 7结果计算与表述 以干基计的三种多元酸的含量按式(1)计算得出： "As ...(1) mx(1-w) 式中： w—试样中多元酸的含量，单位为毫克每克(mg/g)； ki——标准工作曲线的斜率； A—各有机酸的峰面积； 2 YC/T288—2009 A。—内标物的峰面积； B; 标准工作曲线的截距； ms- 内标物的质量，单位为毫克（mg）； 试样的质量，单位为克（g）)； 试样中的水分含量，%。 W1- 以两次测定的平均值作为测定结果，结果精确至0.1mg/g。 8 精密度、回收率 本方法的精密度、回收率结果见表1。 表1： 方法精密度、回收率结果 低浓度 中浓度 高浓度 平均回收率/ 变异系数/ 多元酸 加人量/ 回收率/ 加入量/ 回收率/ 加入量/ 回收率/ % % mg % mg % % mg 草酸 2.263 98.8 9. 051 99. 9 36.203 101.2 99. 9 1. 9 苹果酸 14.192 96.7 56.766 97.5 227.064 97. 4 97. 5 1. 3 柠檬酸 2. 090 98. 9 8.360 98. 4 33. 441 96.1 98. 4 1. 4 9 检测报告 检测报告应包括以下内容： 样品的唯一性资料； 一参照本标准所使用的试验方法； 检测结果，包括各单次测定结果及其平均值； 一与本标准规定的分析步骤的差异； 在检测中观察到的异常现象； 检测日期； 检测人员。 YC/T288--2009 附录A （资料性附录） 色谱图示例 A.1多元酸标准溶液色谱图，见图A.1。 响应值， 苹果胶 100 80 柠橡酸 60 草酸 内标(已二酸) 40 20七 5 10 15 20 25 30 35 t/min 图A.1 多元酸标准溶液色谱图 A.2样品溶液分析色谱图示例见图A.2。 响应值 100 草果酸 80 草酸 60 内标(己二酸) 40 柠橡酸 20 10 15 20 25 30 35 5 t/min 图A.2典型烟草样品中多元酸色谱图 版权专有侵权必究 * 书号：155066·2-19718 YC/T288-2009