SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4179—2015 水仙退化病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Narcissus degeneration virus 行业标准信息服务平台 2015-02-09发布 2015-09-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4179—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：林石明、沈建国、廖富荣、方志鹏、吴媛、陈青、陈红运、黄蓬英。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4179—2015 水仙退化病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了水仙退化病毒血清学、分子生物学检疫鉴定方法。 本标准适用于石蒜科等寄主植物中水仙退化病毒的检疫鉴定。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样 3水仙退化病毒基本信息 中文名称：水仙退化病毒 学名：Narcissusdegenerationvirus 缩写：NDV 属于马铃薯Y病毒科（Potyviridae），马铃薯Y病毒属（Potyuirus）成员。 传播途径：种球传播、机械传播。 NDV的其他信息参见附录A。 4 方法原理 水仙退化病毒的血清学、分子生物学特性是制定本检疫鉴定方法的主要依据。 5 仪器设备及用具 电子天平(1/1000 g）、高速冷冻离心机、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、凝胶成像分析系统、pH计、 各种量程的可调移液器（1000μL、200μL、100μL、20μL10μL、2μL）、PCR反应管、无RNaseEppen- dorf离心管（1.5mL）、研钵、微波炉、磁力搅拌器、恒温水浴锅、高压灭菌锅、低温冰箱和超低温冰箱等。 6 检测与鉴定 6.1抽样检查 按照SN/T2122给出的方法进行抽样、取样。 6.2 捕获抗原酶联免疫吸附测试（PTA-ELISA） 按附录B给出的方法进行PTA-ELISA检测。用已知病毒分离物作阳性对照，健康植物组织作阴 性对照，样品提取缓冲液作空白对照。 1 SN/T 4179—2015 6.3 3RT-PCR检测 按附录C给出的方法进行RT-PCR检测。用已知病毒分离物作阳性对照，健康植物组织作阴性对 照，并设置空白对照。 6.4 4序列测定与分析 成）。把测定的核苷酸序列（或翻译后的氨基酸序列)与已知的NDV相应序列进行比对。 注：序列比对可利用NCBI网站上的BLAST软件进行，网址为http：//www.ncbi,nlm.nih.gov/BLAST/。 7结果判定 7.1当PTA-ELISA和RT-PCR检测结果均为阳性时，则判定为检出水仙退化病毒（NDV） 7.2 2当RT-PCR检测结果为阳性、测定的序列为NDV序列时，则判定为检出水仙退化病毒（NDV)。 注：根据国际病毒分类委员会（ICTV)第9次分类报告中马铃薯Y病毒科病毒种类的分类标准，其中关于基因组 76%；并且聚合蛋白的剪切位点不相同。 8结果记录 记录样品信息及各项检测数据，包括样品来源、种类，检测时间、地点、方法和结果等，以及检测人员 签字。血清学检测结果保留吸光值的数据，分子生物学检测结果保留电泳照片及测序峰图等。 9 样品保存 阳性的样品应妥善保存在低温或超低温冰箱中，并做好登记和标识，以备复核。 行业标准信息服务平台 2