B 15 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T406-2000 脱毒草莓种苗病毒检测技术规程 Rules for virus detection of virus-free seedling strawberries 2000-09-22发布 2000-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T406—2000 前 为了有效地实施对脱毒草莓种苗质量检验和管理，规范脱毒种苗市场，促进脱毒技术的推广，实现 脱毒草莓种苗病毒检测的规范化、标准化，特制定本规程。本规程在参照国内外草莓病毒检测技术最新 研究进展的基础上，结合当前国内生产实际，力求达到快速、准确、可操作性强的检测要求。检测对象主 要选择生产上发生分布范围广、危害性大的病毒。检测方法主要采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测和指 示植物检测。 本规程内容包括脱毒草莓种苗病毒检测的适用范围、检测对象、抽样方法、检测方法和质量要求。 本标准的附录A是标准的附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准主要起草单位：农业部植物脱毒种苗质量监督检验测试中心（济南）、山东省植物保护总站。 本标准主要起草人：华崇钊、商明清、孙作文、李明立、徐鲁、杨勤民。 中华人民共和国农业行业标准 NY/T406—2000 脱毒草莓种苗病毒检测技术规程 Rules for virus detection of virus-free seedling strawberries 1范围 本标准规定了脱毒草莓种苗的病毒检测方法和操作规程。 本标准适用于脱毒草莓母本株、组培苗及脱毒草莓种苗的病毒检测。 2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 NY/T401一2000脱毒马铃薯种薯（苗)病毒检测技术规程 3定义 本标准采用下列定义。 3.1脱毒草莓母本株 由脱毒组培苗直接繁育并且不带本规程规定的检测对象、用于提供草莓匍匐茎繁殖苗的母株。 3.2脱毒草莓种苗 由脱毒草莓母本株繁育并符合本规程规定合格标准的种苗。 3.3病毒病株允许率 脱毒草莓母本株及种苗繁殖田中病毒病株的允许比率。 检测对象 草莓轻黄边病毒(Strawberrymildyellowedge-associatedvirus，SMYEV)； 草莓镶脉病毒（Strawberryveinbandingvirus，SVBV)； 草莓斑驳病毒（Strawberrymottlevirus，SMoV)； 草莓皱缩病毒（(Strawberrycrinklevirus，SCrV)； 5抽样 5.1脱毒草莓母本株抽样 每株均需检测。繁育季节从待检母本株选取幼嫩叶片作为检测样品。每年检测3次以上。 5.2组培苗的抽样 5.2.1脱毒核心材料：每株均须检测。 5.2.2扩繁组培苗：每扩繁一次随机抽取1%～2%检测。 5.3出圃种苗抽样 5.3.1采用分层取样或随机取样等方法抽取样品，抽样数量见表1。 中华人民共和国农业部2000-09-22批准 2000-12-01实施 1 NY/T406—2000 表1草莓种苗抽样数量标准表 种苗总数量，株 抽样最低数量，株 抽样百分率，% ≤10 000 6~10 100 3~5 >10 000 注：不足抽样最低数量的全部作为混合样品。 5.3.2将第一次抽取的样品混合后进行二次抽样，随机抽取10%的混合样品检测。 6检测方法 6.1双抗体夹心酶联免疫吸附检测法 用于检测草莓轻黄边病毒、草莓镶脉病毒。 检测方法按NY/T401一2000中附录A的方法执行。 6.2指示植物检测法 用于检测草莓斑驳病毒、草莓皱缩病毒、草莓镶脉病毒和草莓轻黄边病毒，检测草莓病毒的指示植 物及症状见表2。 检测方法见附录A。 表2检测草莓病毒的指示植物及症状 病毒种类 指示植物 指示植物症状 草莓斑驳病毒 EMC UC5 叶片斑驳 UC5 草莓皱缩病毒 叶片皱缩 UC10 UC6 呈镶脉症状 草莓镶脉病毒 UC5 叶片反转 UC4 叶片枯死，整株死亡 草荐轻黄边病毒 UC5 叶片边缘逐断变成浅黄 质量要求 只要酶联免疫检测或指示植物检测呈阳性反应的均为带毒株。 脱毒草莓母本株：病毒病株允许率是0。 脱毒草莓种苗：病毒病株允许率≤5.0%。 NY/T406—2000 附录A (标准的附录) 指示植物检测法 A1繁育指示植物 采用欧洲草莓（Fragariavesca）及兰莓（Fragariavirginiana）中的易感品种（见表2），在防虫条件 下将指示植物和待检样品分别栽植在花盆中，不断去掉指示植物的匍匐茎，使叶柄加粗，当叶柄直径达 到2mm左右时嫁接。 A2嫁接 小叶嫁接法：以待检样品成熟叶片（只留中间小叶下半部）为接穗，将指示植物剪去中间小叶作为砧 木，劈接后置于20～25℃、光照充足的条件下。每个待检样品同时用两种指示植物进行鉴定，每个待检 样品各嫁按3株指示植物，每株指示植物嫁接2～3个待检小叶，并设阴性对照和阳性对照。 A3管理 将整株盆栽指示植物罩上塑料袋保湿，每隔2～3天换一次气，10天左右去掉塑料袋，并开始分期 分批去掉指示植物的成熟未嫁接叶片，以促进幼叶的发生。连续观察症状30～50关，记录指示植物症 状。 A4阳性判断 根据指示植物症状，确定病毒有无及种类。在所有嫁接的指示植物中只要有一株表现典型症状，该 样品即为阳性。 NY/T 406—2000 中华人民共和国农业 行业标准 脱毒草莓种苗病毒检测技术规程 NY/T406—2000 * 中国标出版社出版 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 电 话：68522112 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 新华书店北京发行所发行各地新华书店经售 版权专有不得翻印 开本880×12301/16 印张1/2 字数7千字 2000年12月第一版2000年12月第～次印刷 印数1-800 * 标目429—49 NY/T 406—2000 中华人民共和国农业 行业标准 脱毒草莓种苗病毒检测技术规程 NY/T406—2000 * 中国标出版社出版 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 电 话：68522112 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 新华书店北京发行所发行各地新华书店经售 版权专有不得翻印 开本880×12301/16 印张1/2 字数7千字 2000年12月第一版2000年12月第～次印刷 印数1-800 * 标目429—49