SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4141—2015 畜及畜产品中糖皮质激素残留量 检测方法酶联免疫法 Determination of glucocorticoid residues in livestock and livestock products—Enzyme-linked immunosorbent assay 行业标准信息服务平台 2015-02-09发布 2015-09-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4141—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：韩伟、王赢、袁辰刚、朱坚。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4141—2015 畜及畜产品中糖皮质激素残留量 检测方法酶联免疫法 1范围 本标准规定了畜及畜产品中地塞米松、泼尼松龙、氟地塞米松、异氟泼尼龙、倍他米松、去炎松和氟 米龙等糖皮质激素残留量的抽样、制样和酶联免疫测定方法。 氟地塞米松、异氟泼尼龙、倍他米松、去炎松和氟米龙等糖皮质激素残留量的筛选检验。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3 试样的缩分和保存 3.1试样缩分 3.1.1组织样品：从全部样品（包括牛奶）中取有代表性样品，去除脂肪、充分绞碎、混匀，用四分法缩分 出不少于500g试样。 3.1.2动物尿样：从饲养现场收集动物尿液，充分混匀、澄清后，装入清洁密闭容器，试样不少于 50 mL。 3.2样品容器 样品应装于合适的清洁干燥容器中，以保持样品的完整性和可追溯性。可采用聚乙烯塑料容器，玻 璃容器等情性材料容器（不允许使用橡胶容器）盛装样品，然后再放入较大的干净容器中密封装运。 3.3样品封识 应在每个样品容器的外表贴上标签，标签上注明样品名、样品编号、生产批号、抽样日期、抽样地点、 堆位、抽样人员，并由抽样人员或官方人员加封。 3.4样品保存 3.4.1抽样后样品应立即在一18℃以下冷冻保存，05℃条件下48h内送达实验室。 3.4.2在抽样和制样过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 4测定方法 4.1原理 本方法的测定基础是竞争性酶联免疫反应。微孔板上包被有绵羊抗兔IgG的抗体，加入特异性抗 1 SN/T4141—2015 体（兔抗地塞米松抗体）、酶标记泼尼松龙、地塞米松标准品或样品提取液后，特异性抗体与包被的绵羊 抗兔IgG抗体结合，同时游离糖皮质激素和酶标记泼尼松龙竞争性的与特异性抗体结合。通过洗涤除 去未结合的糖皮质激素的酶标记泼尼松龙，然后加入底物显色，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得 出试样中糖皮质激素的含量。 4.2 试剂和材料 除去另外说明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.2.1糖皮质激素酶联免疫测定试剂盒：应能满足本方法测定低限要求，参见附录A和附录B。 4.2.2 乙酸乙酯。 4.2.3 正已烷。 4.2.4甲醇。 4.2.5 0.1mol/L氢氧化钠溶液。 4.2.6 半对数坐标纸。 4.2.7 地塞米松标准品。 4.3 仪器和设备 4.3.1 酶标仪。 4.3.2 均质器。 4.3.3 离心机。 4.3.4 氮气挥发器。 4.3.5 振荡器。 4.3.6 微量加样器：10μL100μL，20μL～200μL。 4.3.7 微量多通道加样器：10uL~100μL。 4.45 分析步骤 4.4.1提取 4.4.1.1 组织样品（肌肉，肝脏，肾等） 称取组织试料2g士0.05g于50mL离心管中，加乙酸乙酯15mL，旋涡混合，15℃3000g离心 10min，移取乙酸乙酯层。于离心残渣中加0.1mol/L氢氧化钠溶液10mL，混匀，加乙酸乙酯15mL， 旋涡振荡15min，移取乙酸乙酯层。合并两次提取液后，吹蒸干（置40℃氮气流中），用2mL样品稀释 缓冲液溶解供测定用。最后样品稀释倍数为1.0。 4.4.1.2牛奶 取牛奶试料2mL士0.05mL于50mL离心管中，加乙酸乙酯20mL，旋涡混合15min，15℃3000g 离心10min，移取乙酸乙酯层，置40℃氮气流中吹干，用2mL样品稀释缓冲液，振荡溶解供测定用 最后样品稀释倍数为1.0。 4.4.1.3动物尿样 取待测动物尿样2mL，15℃3000g离心10min，取0.5mL澄清尿液，用样品稀释缓冲液稀释至 1mL，混合均匀供测定用。最后样品稀释倍数为2.0。 2