SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3924—2014 出口贝类中大肠菌群、粪大肠菌群 检测方法 Test method for the enumeration of coliform and fecal coliform in shellfish for export 行业标准信息服务平台 2014-04-09发布 2014-11-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3924—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局 本标准主要起草人：陈彬、郑晶、陈俊玉、陈舒奕、薛芝敏、黄晓蓉、郑麟毅、董健、林杰、彭华毅。 行业标准信息服务平台 SN/T 3924—2014 出口贝类中大肠菌群、粪大肠菌群 检测方法 1范围 本标准规定了贝类中大肠菌群、粪大肠菌群计数方法。 本标准适用于双壳贝类、生鲜去壳贝肉、生鲜去壳冷冻贝肉和半壳冷冻贝类中大肠菌群、粪大肠菌 群计数。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T4789.20食品卫生微生物检验水产食品检验 GB17378.3海洋监测规范第3部分：样品采集、赠存与运输 SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则 SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 大肠菌群coliforms 需氧及兼性厌氧，能在36℃48h分解乳糖产酸产气的一群革兰氏阴性无芽孢杆菌。 3.2 粪大肠菌群fecalcoliforms 需氧及兼性厌氧，能在44.5℃士0.5℃，24h发酵乳糖产酸产气的一群革兰氏阴性无芽孢杆菌，该 菌又可称耐热大肠菌群（thermotolerantcoliformorganisms）。 4检验方法 4.1原理 最可能近似值（MPN)法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培 养后，根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出大肠菌群、粪大肠菌 群在待测样品中的最大可能数。 4.2培养基和试剂 4.2.1月桂基硫酸盐胰蛋白陈(LST)肉汤：见附录A中A.2。 4.2.2乳糖（LB)肉汤：见A.3。 1 SN/T 3924—2014 4.2.3 煌绿乳糖胆盐（BGLB)肉汤：见A,4。 4.2.4大肠杆菌（EC)肉汤：见A.5。 4.2.5 磷酸盐缓冲液：见A.6。 4.2.6 0.5%蛋白陈水：见A.7。 4.2.7 无菌1mol/LNaOH:见A.8。 4.2.8 3无菌1mol/LHCl:见A.9。 4.3设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： a）恒温培养箱：35℃士1℃； b）冰箱:2℃~5℃； c) 恒温水浴箱：44.5℃土0.2℃； d) 天平：感量0.1g； 均质器； 振荡器； g） 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头； h）无菌锥形瓶：容量500mL； i) 无菌培养Ⅲ：直径90mm； j) pH计或pH比色管或精密pH试纸。 4.4样品的采集 样品的采集及处理按GB17378.3以及GB/T4789.20的规定执行。 4.5样品的制备 称取200g贝肉及壳瓣内液体，放入盛有200mL磷酸盐缓冲液或0.5%蛋白陈水的无菌均质杯内， 8000r/min~10000r/min均质1min~2min，或放入盛有200mL磷酸盐缓冲液或0.5%蛋白陈水的 2min内即用磷酸盐缓冲液或0.5%蛋白陈水进行系列样品稀释。 4.6样品的稀释 4.6.1样品匀液的pH应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节。 4.6.2用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：2样品匀液1mL,沿管壁缓缓注人9mL磷酸盐缓冲液 无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：20的样品匀液。 4.6.3根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释 1次，换用1支1mL无菌吸管或移液器吸头。从制备样品匀液至样品稀释完毕，全过程不得超过 15 min。 4.7大肠菌群MPN法的测定 4.7.1初发酵试验 从4.6.3中选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液，每个稀释度均接种5管月桂基硫酸盐胰蛋白陈 (LST）肉汤或乳糖（LB）肉汤，每管接种2mL（接种量超过1mL，使用双料LST肉汤或LB肉汤）， 2