ICS 79. 020 LY B 60 中华人民共和国林业行业标准 LY/T12842012 代替LY/T1284-1998 木材防腐剂对软腐菌毒性实验室试验方法 Method of laboratory test for toxicity of wood preservatives to soft-rot fungus 2012-02-23发布 2012-07-01实施 国家林业局 发布 LY/T1284—2012 前言 本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任， 本标准代替LY/T1284一1998《木材防腐剂对腐朽菌毒性实验室试验方法》。本标准与 LY/T1284一1998相比主要技术内容变化如下： 参照GB/T13942.1-2009《木材耐久性能 第1部分：天然耐腐性实验室试验方法》增加“具 螺纹盖的广口圆盖瓶”作为可选择的培养瓶（见4.7)。 修改试样受试菌侵染培养时间“6周”为“8周”。 修改“测定试验前后的试样全干质量时的烘箱温度为（103土2)℃”（见7.5和7.12，1998版 8.5和8.11)。 本标准由全国木材标准化技术委员会（SAC/TC41)提出并归口。 本标准起草单位：中国林业科学研究院木材工业研究所、国家人造板与木竹制品质量监督检验中 心、广东省林业科学研究院。 本标准主要起草人：杨忠、周明、蒋明亮、马星霞、吕斌、付跃进、何雪香。 本标准所替代标准的历次版本发布情况为： LY/T1284—1998。 I LY/T1284—2012 木材防腐剂对软腐菌毒性实验室试验方法 1范围 本标准规定了在实验室条件下，通过测定经防腐剂处理的木材受软腐菌侵染后造成的木材质量损 失，确定该防腐剂毒性的试验方法。 本标准适用于测定木材防腐剂对软腐菌的毒性极限。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T13942.1木材耐久性能第1部分：天然耐腐性实验室试验方法 GB/T14091木材防腐术语 3术语和定义 GB/T14091界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 质量损失百分率 weightlosspercentage 在室内毒性试验中，经防腐剂处理的木材受腐朽菌侵染后的质量损失百分率。 3.2 防腐剂载药量 preservative retention 每立方米处理木材所吸收的防腐剂的有效成分的千克数。 3.3 防腐剂毒性极限值 toxic limitofpreservatives 防腐剂有效抑制腐朽菌腐朽木材的最低载药量。 4试验设备 4.1蒸汽高压灭菌器：设计压力0.25MPa，设计温度138℃。 4.2接种室（箱)或超净工作台。 4.3培菌室或恒温恒湿培养箱：温度（30士0.5)℃，相对湿度75%85%。 4.4鼓风干燥箱：温度(103士2)℃。 4.5分析天平：感量为0.001g。 4.6真空泵：相对真空度-0.09MPa。 4.7培养瓶：500mL广口三角瓶或具螺纹盖的广口圆盖瓶（最小容积250mL，口径最小32mm，螺纹 盖可进行灭菌）。 4.8防腐剂浸注试样装置，见图1。 1 LY/T1284—2012 9 10 一橡皮管； 橡皮塞； 玻璃管； 8 一真空干操器； 2- 锥形瓶； 9 玻璃烧杯； 防腐剂溶液； 10- 压试样玻璃重物； 一真空泵接管； 11- 一试样。 6-—旋塞； 图1真空浸注装置 5试验材料 5.1试材 供试验用树种为毛白杨（PopulustomentosaCarr.）或枫香（LiguidambarformosanaHance），共 23株，胸径200mm300mm，每株在胸高部位向上截取长1m的试材-段。 5.2试样 试样均等取自2～3株试材段横截面边材均匀分布处。各面均应平整，不允许有可见的缺陷。尺寸为 5mm×25mm（宽面是弦切或径切面）×50mm（顺纹方向）的边部材至少6块（均等取自2～3株原木）。 5.3滤纸 中速定性滤纸。 6试菌 球毛壳菌（ChaetomiumglobosumKunzeexFr.）。 7试验步骤 7.1培养基制备 7.1.1麦芽糖（汁)试管斜面培养基的配制：在500mL细口三角瓶（或烧杯）内加人麦芽糖液（波美度 2 LY/T1284—2012 为1.03)100mL、琼脂1.5%～2.0%（质量体积比），在水浴锅中加热，使琼脂溶化，分别倒入5支试管 内（每支倒人量约5cm高度），塞棉花塞，试管口包防水纸，置于蒸汽灭菌器中（表压力0.1MPa，温度 121℃），灭菌30min后，热取出试管，斜放在无菌室内，冷却凝固成斜面培养基后备用。 15min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1000mL，加葡萄糖20g，琼脂15g，溶化后分装在3个500mL 细口三角瓶内，在水浴锅中加热，使琼脂溶化，分别倒入试管，以下操作步骤同7.1.1。 养瓶内，装人硝酸铵（NH,NO)0.3g，磷酸氢二钾（KzHPO,)0.2g，磷酸二氢钾（KHzPO.)0.25g，硫 防水纸（如使用广口圆盖瓶则盖螺纹盖），置于灭菌器中（条件同7.1.1)，灭菌30min后，置于无菌室中 冷却后接种。 圆盖瓶。同7.1.1法制备的马铃薯滤液100mL，加葡萄糖2g，琼脂1.5g，装入培养瓶内，如使用广口 三角瓶则塞棉塞并包防水纸（如使用广口圆盖瓶则盖螺纹盖），置于蒸汽灭菌器中（条件同7.1.1)灭菌 30min后，取出置于无菌室中冷却后接种。 7.2孢子悬浮液的制备 操作的全过程应在无菌条件下进行。球毛壳菌接种在多支麦芽糖（汁）试管斜面培养基上，在室温 下培养3周，然后在斜面中滴入0.5mL无菌蒸馏水，再用灭菌金属接种针，把斜面上的孢子铲下，再加 无菌水把斜面覆盖，用力摇动孢子块（也可加进无菌玻璃珠振荡），使其散碎成孢子悬浮液，倒人灭菌培 养血中，待接种用。 7.3滤纸灭菌处理 取6张滤纸，包防水纸，在蒸汽灭菌器中灭菌30min，在无菌接种室冷却后用作接种。 7.4滤纸接种 操作的全过程应在无菌条件下进行。把孢子悬浮液倒人灭菌培养皿中，将1张灭菌滤纸迅速在培 养皿中浸一下，立即放人广口三角瓶或具螺纹盖的广口圆盖瓶的培养基表面上，然后把接种的培养瓶置 与对照试样放在长满菌的滤纸上，受试菌侵染。 7.5试样称重 试验一种防腐剂的试样取36块（选择5个梯度浓度，每个浓度6块，对照6块），每块编号后放人温 度(103土2)℃烘箱中烘至恒重，每块称重（m)（精确到0.001g）。： 7.6试样浸渍处理（见图1) 每一个浓度的6块试样，在真空干燥器中真空（相对真空度一0.09MPa)浸注处理30min（6块对 照试样用溶剂处理），用灭菌吸水纸吸去每个试样表面浮液，立即称重（m2）（精确至0.001g）。 7.7试样中防腐剂载药量(R)的计算 木材防腐剂载药量按式(1)计算： LY/T1284—2012 (1) V m=m-m ....(2) 式中： R—i 试样中防腐剂的载药量，单位为干克每立方米（kg/m*）； m-试样吸收防腐溶液质量，单位为克(g)； C处理试样的防腐液浓度(质量分数)，%； V试样体积，单位为立方厘米（cm"）； ml——试样浸注前质量，单位为克(g)； m2—实验浸注后质量，单位为克(g)。 7.8防腐剂处理试样含水率的调整 7.8.1水溶性防腐剂处理试样含水率的调整 处理试样放在灭菌培养皿中，散盖置于无菌室内，如是水溶性防腐剂处理的试样，可气干至含水率 80%～85%时（事先做好含水率的预测试验），即可进行试菌毒性试验。 7.8.2油类或有机溶剂型防腐剂处理试样含水率的调整 油类或有机溶剂型药剂处理的试样，在进行对软腐菌的毒性试验前，应先把溶剂挥发掉。把处理试 样竖立、相互分开放在室温下气干72h，再放在通风烘箱中，在50℃条件烘17h。然后把每个浓度处 理的试样，装入玻璃管内（玻璃管两端用纱布包好），放在蒸汽灭菌器中，在常压下蒸约30min，使试样 的含水率达到80%～85%时（如果含水率达不到要求，可以预先试验将备用试样放人无菌水中浸泡一 段时间，然后，再进行蒸汽灭菌），在无菌条件下冷却后，即可进行试菌毒性试验。 7.9防腐处理试样的流失试验 7.9.1水溶性防腐剂处理试样的流失试验 采用蒸馏水烧杯浸泡法。试样用梯度浓度防腐液真空浸注处理（见7.6），每个浓度处理6块，充分 气干，把同一浓度处理试样放在一个2000mL烧杯内（试样用玻璃重物压住），倒人蒸馏水（水量为试样 体积总数的3倍），在室温条件下浸没在水中32h后，取出放在通风干燥箱（有风扇）内，在50℃保持 4h，然后把每个浓度的试样分别装入玻璃管内（玻璃管两端用纱布包好），在蒸汽灭菌器中常压下蒸约 30min，使含水率达到80%～85%，在无菌室冷却后，即可进行试菌毒性试验。 7.9.2油类或有机溶剂型防腐剂处理试样的流失试验 防腐剂处理试样先进行挥发试验。把处理试样竖立、相互分开放在室温下气干72h，再放在通风 烘箱中，在50℃条件下烘17h。然后，再进行流失试验（见7.9.1），即可进行试菌毒性试验。 7.10试样接种与受菌侵染后的培养 在无菌条件下，把每块防腐剂处理的试样与未处理的对照试样（含水率达80%～85%)均在孢子悬 浮液中迅速浸一下，立即放人广口三角瓶中已长满菌的滤纸上，每瓶内放2块（见图2），若用具螺纹盖 的广口圆盖瓶，则每瓶内放一块（见图2)，然后置于温度（30士0.5）℃、