ICS 65.020.20 LY B 61 中华人民共和国林业行业标准 LY/T2620—2016 西南桦无性系组培育苗技术规程 Technical regulation for Betula alnoides clones prapagation via tissue culture 2016-01-18 发布 2016-06-01实施 国家林业局 发布 LY/T 26202016 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由全国林木种子标准化技术委员会（SAC/TC115)归口。 本标准负责起草单位：中国林业科学研究院热带林业实验中心。 本标准主要起草人：谌红辉、蔡道雄、贾宏炎、王小宁、郭文福、刘志龙、农淑霞、蒙彩兰、马跃。 I LY/T2620-2016 西南桦无性系组培育苗技术规程 1范围 本标准规定了西南桦无性系组培育苗的外植体采集与处理、培养基配制、组培苗增殖与生根培养、 组培苗移裁、苗木管理与出圃等技术要求。 ，， 快繁。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6001育苗技术规程 LY/T1000 0容器育苗技术 LY/T1882 2林木组织培养育苗技术规程 LY/T1948 西南桦用材林培育技术规程 3术语和定义 LY/T1882界定的术语和定义适用于本文件。 4培养基配制 4.1培养基成分 外植体诱导培养基、增殖培养基与生根培养基见附录A。 4.2 母液配制 按照LY/T1882执行。 4.3 培养基配制 后再加人第二种母液，并加人定量的凝固剂与蔗糖，加水定容后充分搅拌溶解。 4.3.2将配制好的培养基溶液用不锈钢精锅加热至沸腾，使培养基完全溶解，然后用1.0mo1/L盐酸或 1.0mol/L氢氧化钠调整pH至5.8。 4.3.3培养基加热溶解后定量分装到高度为10cm15cm的透光玻璃培养瓶内，进行密封。 4.4培养基消毒 4.4.1) 将分装好的培养基放人灭菌锅内消毒。消毒过程严格按灭菌锅的使用技术规程操作，灭菌气压 采用0.11MPa，温度采用121C，消毒时间25min～30min。 1 LY/T2620—2016 4.5 培养基保存 培养基尽量现配现用。需要保存时，应放置在无尘、避光的室内进行常温保存，保存时间不超过 30 d。 5准备工作 5.1超净工作台准备 接种使用超净工作台，工作前应用75%的酒精将工作台擦拭一遍，然后启动工作台并开启紫外灯 消毒30min。关闭紫外灯15min后才能进行接种工作。 5.2 工具灭菌 用于接种的器皿先用消毒锅消毒，接种工具剪刀、镊子、医用手术刀片用置于超净台上的酒精灯、电 热消毒器消毒。将消毒干净的接种工具搁置在无菌的接种器血上，待冷却至常温方可使用。 5.3 环境灭菌 定期清洁超净工作台的初级过滤器。定期打扫、清理接种间，并定期开启紫外灯进行消毒。 6外植体采集、处理 6.1外植体采集 采集优树无性系嫁接苗萌发的嫩芽作为外植体，或采集优树基干部位萌发的嫩芽作外植体。作为 外植体的嫩芽应为生长健壮，无病虫害，半木质化。采集外植体的天气选择晴天。 6.2外植体处理 6.2.1外植体消毒前，用洗洁精洗净，然后用蒸馏水冲洗5min~8min。 无菌水冲洗4次~6次，每次3min~4min。 7外植体接种 将消毒后的外植体切成长2cm左右，含有1个～2个腋芽的枝段，接种在外植体的诱导培养基上。 外植体接种后进行暗培养5d～7d，转人光培养。培养室内的温度控制在23℃～28℃，光照强度为 15001x~30001x，光照时间8h/d～12h/d，培养时间40d～60d。 8增殖培养 8.1接种 8.1.1外植体经诱导萌发出嫩芽后，用剪刀剪取嫩芽接种到增殖培养基进行增殖培养，当培养材料萌 发出丛生芽后，用剪刀或刀片分离成单个小芽植入增殖培养基进行继代培养，继代培养周期40d～ 60 d. 2 LY/T2620—2016 分布均匀。 8.1.3每瓶培养材料接种完成后应将接种工具消毒1次。接种完成后，应在培养器血上做好相关的标 记工作。 8.1.4从外植体诱导分化开始，继代培养不超过40代，保持遗传相对稳定性。 8.2培养条件 培养室内的温度控制在23℃～28℃，光照强度为15001x～3000lx，光照时间8h/d～12h/d。 9生根培养 选择2cm～3cm的茎芽接种在生根培养基中进行生根培养，生根苗只保留1个苗芽，多余的苗芽 应切除。生根培养的温度、光照强度和光照时间同8.2，生根培养时间40d～50d。 10炼苗 当苗高生长至3cm～4cm、不定根长1cm～2cm后可进行炼苗。炼苗温度控制在20℃～30℃， 晴天盖上一层70%遮光率的遮阴网，炼苗10d～12d后，打开培养器皿盖炼苗2d～3d。 11苗木移栽与管理 11.1基质 育苗基质采用制松树皮与炭化锯末按1：3比例配制，或采用黄心土与火烧土按9：1比例配制， 均添加0.3%磷肥或复合肥。 11.2容器 容器规格为直径5.0cm～6.0cm，高度10.0cm～12.0cm，无纺布与薄膜均可。移裁前基质用 0.3%高锰酸钾喷洒消毒不少于24h。 11.3移栽 11.3.1当苗高生长至4.0cm～5.0cm，不少于2条根时，可进行移栽。移裁时小心将苗从瓶中取出洗 净基部培养基。移栽动作要轻，避免损伤根茎。 11.3.2移栽在林地简易苗圃、专用苗圃或温室进行，对苗圃的要求参见GB/T6001和LY/T1000。 11.3.3移苗时间在3月至4月、9月至11月进行，避开5月至8月的高温季节。在露天苗圃移裁，应 选择风小、光照弱的天气进行。 11.4管理 11.4.1移裁后用遮光70%的遮阴网覆盖遮阴，采用喷雾方式保湿，白天10min～15min喷1次，晚上 30min～40min喷1次，每次喷雾3s～5s，保持相对湿度80%～90%。露天苗圃雨天不用淋水。 11.4.2苗木度过缓苗期长出新叶后，每隔10d～15d定期喷施或淋施1次0.05%～0.1%的尿素或复 合肥溶液。 11.4.3病虫害防治遵照GB/T6001的要求执行。 11.4.4出圃前1个月进行移袋、断根、控水、增强光照等措施处理，提高苗木抗性。 3 LY/T2620—2016 12 苗木出圃 12.1 质量评价与分级方法 按照LY/T1948的要求执行。 12.2 包装与运输 按照GB/T6001的要求执行。 13 技术管理档案 按照GB/T6001的要求执行。 4 LY/T2620—2016 附录A （规范性附录） 西南桦快繁培养基配方 西南桦快繁培养基配方见表A.1。 表A.1 西南桦快繁培养基配方 外植体诱导培养基 继代增殖培养基 生根培养基 母液名称 药品名称 mg/L mg/L mg/L KNO: 096 1 900 096 NH,NO: 825 1 650 825 大量元素 KH,PO, 85 170 85 CaClz·2H20 165 440 165 185 370 185 MgSO,·7H20 MnSO,· 4H20 22.3 22.3 22.3 ZnSO.·7H,0 8.65 8.65 8.65 H,BO: 6.2 6.2 6.2 NazMo0,·2H,0 0.25 0.25 0.25 微量元素 KI 0.83 0.83 0.83 CusO, · 5H20 0.025 0.025 0.025 CoCl² · 6H,0 0.025 0.025 0.025 FeSO,·7H20 27.8 27.8 27.8 铁盐 Na2 EDTA 37.2 37.2 37.3 氨基乙酸 2 1 1 0.1 0.1 0.1 盐酸硫胺素 有机质 盐酸吡哆醇 0.5 0.5 0.5 烟酸 0.5 0.5 0.5 肌醇 100 50 50 糖 蔗糖 20000 20 000 20000 6-BA 1.5 1.0 0.1 植物生长 IBA - 0.2 2.0 调节剂 NAA 0.1 0.1 1.0 凝固剂 卡拉胶 7 000 7 000 7 000 注：FeSO，·7H.0应先与Na?EDTA配制成络合物，然后才与其他溶液混合。 5