ICS19.020;23.100.60 CCS J 77 HG 中华人民共和国化工行业标准 XX/T XXXXXXXXX 多孔分离膜模式微生物截留性能测试方法 Test method for determining model microorganism retention of porous separation membrane (点击此处添加与国际标准一致性程度的标识) （报批稿） （本草案完成时间：2024年5月7日） XXXX -XX-XX 发布 XXXX-XX-XX实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 XX/T XXXXX—XXXx 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国石油和化学工业联合会提出。 本文件由全国分离膜标准化技术委员会（SAC/TC382）归口。 本文件起草单位：北京碧水源科技股份有限公司、浙江开创环保科技股份有限公司、海南立昇净 水科技实业有限公司、中国人民大学、哈尔滨工业大学、山东招金膜天股份有限公司、广州王老吉大 健康产业有限公司、上海一鸣过滤技术有限公司、 天津膜天膜科技股份有限公司、广西碧清源环保投 资有限公司、南昌航空大学、 学水资源国家工程研究中心有限公司、上海城市水资源开 哈尔滨工业大 发利用国家工程中心有限公司， 重庆摩尔水处理设备有限公司、西藏碧水源环境科技有限责任公司 北京汇信盈节能环保技术有限公司、 深圳高性能医疗器械国家研究院有限公司、国药集团威奇达药业 有限公司、百林科生物检测（江苏）有限公司、 天津净必纯生物科技有限公司、中科沃川（苏州）新 材料科技有限公司、航膜科技发展集团有限公司 本文件主要起草人：郑祥、俞开昌、程荣、黄赋、陈清、梁恒、张伟政、方莎、郑荣波、吴昌飞、 朱圆圆、范宁、张勇、华河林、武睿、张平允、马兵、谢鹏、曾雄辉、贾伟、常华、高杰、梁义、朱 玉长、王瀚漪、胡俊辉、刘洋。 一 xXxX—XxXxX 1/XX 多孔分离膜模式微生物截留性能测试方法 1范围 本文件描述了多孔分离膜对模式微生物截留性能测试的原理、试剂或材料、仪器设备、试验步骤、 试验数据处理、试验报告。 本文件适用于中空纤维膜或平板膜的模式病毒截留性能测试，其他类型的膜可参照执行。 注：除非特别说明，本文件涉及的模式微生物特指模式病毒。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T28850恒温槽与恒温循环装置高温恒温槽 GB/T32710.8环境试验仪器及设备安全规范第8部分：生化培养箱 QB/T4877聚四氟乙烯管材 QB/T5000食品工业用螺动泵 YY/T1539医用洁净工作台 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 多孔分离膜porousseparationmembrane 具有多孔和开口结构的膜。 [来源：GB/T20103—2006，2.1.19，有修改 3. 2 错流膜过程crossflowmembraneprocess 压力推动给料平行于膜表面流动（切向流），而透过液垂直透过膜（垂直流）的分离过程。 注：反渗透、纳滤、超滤和微滤的分离过程中均属于错流膜过程。 L来源：GB/T20103—2006，2.2.9] 3. 3 病毒virus 无独立的代谢系统，只能在活的宿主细胞内复制的具有感染性的微小生物。 [来源：YY/T1497—2016，3.1] 3. 4 模式病毒modelvirus 作为方法学验证的特定病毒，在颗粒大小、形态结构等生物学特性方面具有病毒的共性。 3. 5 噬菌斑phaque （病毒学）理论上由单个活病毒感染、溶解性宿主细胞而形成的清晰可见区域。 L来源：YY/T14972016，3.4，有修改 2 XXXX—XXXxX 1/XX 3. 6 空斑形成单位plaque-formingunit PFU [来源：YY/T1497—2016，3.5] 3. 7 对数下降值logreductionvalue LRV 在规定条件下，被过滤液体原液的微生物数量与滤过液的微生物数量比的常用对数值。 [来源：GB/T342442017，3.1.5，有修改] 4试验原理 将浓度为（106～10°）PFU/mL的模式病毒原液以错流过滤方式通过已灭菌的待测多孔分离膜 分别测试多孔分离膜模式病毒原液和多孔分离膜滤过液中模式病毒浓度，多孔分离膜的模式病毒截留 性能用对数下降值（LRV）表示。 5试剂或材料 5.1模式病毒 模式病毒选用MS2噬菌体或f2噬菌体，MS2噬菌体的宿主菌株为大肠埃希菌（ATCC15597），f2 噬菌体的宿主菌株为大肠埃希菌（E.coli285）。 5.2试剂 主要试剂如下： 试验用水，应符合GB/T6682中规定的二级水要求； 无菌水，将试验用水放入压力蒸汽灭菌器中，121℃土0.5℃保持30min制得，置于无菌环 境（如超净工作台）中保存； 乙醇，质量分数为75%； 模式病毒原液，应按附录B.6的规定配置。 6仪器设备 仪器设备如下： a) 多孔分离膜组件与模式病毒截留试验装置，应符合图A.1~图A.3的规定： b) 生化培养箱，应符合GB/T32710.8的规定，温度20C~60C； 超净工作台，应符合YY/T1539的规定，洁净等级不低于ISO5； c) d) 压力蒸汽灭菌器，灭菌温度为121C±0.5C； (a 恒温槽：应符合GB/T28850的规定，体积为2L±0.5L，温度5℃C～25℃C。 7试验步骤 7.1膜样品制备 7.1.1预处理 将膜样品用试验用水漂洗3次，浸泡于试验用水中24h后用75%乙醇浸泡15min，再用无菌水漂 洗3次。 7.1.2中空纤维膜组件 3 xXxX—xxxxX 1/XX 取若干根膜丝，按图A.1装入聚四氟乙烯管中，两端用阀门连接，用AB环氧树脂胶水密封，构成 膜组件，其中膜（丝）有效长度20cm土0.5cm，膜丝有效面积25cm²土5cm²。 7.1.3平板膜组器 截取直径不小于5cm的圆形膜片，按图A.2装入平板膜膜池中，螺丝旋紧膜池，其中膜有效面积为 20cm²±5cm²。 7.2消毒和清洗 消毒和清洗步骤如下： a) 将待测的中空纤维膜组件或平板膜组器安装到图A.3中的测试组件（6）中； b) 向恒温槽（1）内加入不少于500mL的乙醇； 打开进水阀门（3）、回流阀门（8）、出水阀门（10）、出水阀门（11）和蟠动泵（2）， c) 调节进水阀门（3），使压力表（5）读数为0.02MPa～0.10MPa，消毒管路，稳定运行5 min后，排空试验装置内的乙醇； d) 向恒温槽（1）内加入不少于1000mL的无菌水； 打开进水阀门（3）、回流阀门（8）、出水阀门（10）、出水阀门（11）和蠕动泵（2）， e) 调节进水阀门（3），使压力表（5）读数为0.02MPa～0.10MPa，清洗管路，然后排空试验 装置内的无菌水。 7.3空白试验 俄留试验前应进行空白试验，测试步骤如下： 按图A.3连接好测试装置，完全打开进水阀门（3）、回流阀门（8）和出水阀门（10），关闭 出水阀门（11）； b) 向恒温槽（1）加入500mL无菌水，调节恒温槽（1）测试液温度为25°C±0.5C； 启动蠕动泵（2），使恒温槽（1）的无菌水通过膜组件（6），并且回流至恒温槽（1）； d) 若为中空纤维膜，调节进水阀门（3）和回流阀门（8），使压力表（5）读数为0.05MPa，调 节蠕动泵（2），使膜组件（6）膜面流速不低于0.25m/s；若为平板膜，调节进水阀门（3） 和回流阀门（8），使压力表（5）读数为0.10MPa，流量计（4）读数为40L/h； e) 待装置稳定运行40min后，关闭出水阀门（10），完全打开出水阀门（11），使用无菌烧杯 （12）收集滤过液5mL； G 按B.5的规定分别测试多孔分离膜原液和滤过液中模式病毒浓度，并按下列规定进行处理： · 装置运行前，若恒温槽液体中液体检出模式病毒，则说明无菌水被污染，应重新取用 。装置运行后，若滤过液检出模式病毒，则说明管路未消毒彻底，应检查污染原因，按照 7.2重新消毒和清洗后进行空白试验； ·若无上述情况，则可进行下一步骤。 7.4多孔分离膜模式病毒截留试验 多孔分离膜模式病毒截留试验测试步骤如下： a) 同7.3中a)的规定； 向恒温槽（1）加入500mL模式病毒原液，调节恒温槽（1）测试液温度为25℃土0.5℃； b) 启动蠕动泵（2），使恒温槽（1）的模式病毒原液通过膜组件（6），并且回流至恒温槽 9 (1) ; d) 同7.3中d)的规定； e) 同7.3中e)的规定； 按B.5的规定分别测试多孔分离膜原液模式病毒浓度No与滤过液模式病毒浓度N。 8试验数据处理 多孔分离膜模式病毒截留性能的对数下降值按公式（1）计算： LRV=lgNo-lgN"" ° (1) xXxX—XxXxX 1/XX 式中： LRV一对数下降值； No—原液模式病毒浓度，单位为空斑每亳升（PFU/mL）； N 滤过液模式病毒浓度，单位为空斑每毫升（PFU/mL）。 9 试验报告 试验报告应包括下列内容： 膜厂家、膜材质； a) 膜类型和技术参数： b) 中空纤维膜，记录测试膜丝数量、膜丝长度、膜丝内径和膜丝外径 . 平板膜，记