ICSICS 01.040.65 CCS B 04 团 体 标 准 T/ NAIA068-2021 藜麦中齐墩果酸含量的测定 高效液相色谱法 Determination of oleanolic acid in quinoa by High performance Liquid chromatography 2021-08-20发布 2021-08-30实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 发布TB 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 前言 本文件按照 GB/T1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准的结构与编写规则》给出的规则编 写。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件主要起草单位 ：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、宁夏农林科学院、宁夏回族自 治区粮油产品质量检测中心 、宁夏智联检测科学技术研究所 （有限公司 ）、宁夏化学分析测试协会 。 本文件主要起草人 ：王芳、王彩艳、李冬、杨春霞、李彩虹、牛艳、赵子丹、吴燕、张艳、王 晓菁、张春娥、闫玥、开建荣、赵永锋、王勇、田建文、单巧玲、张小飞、杨利娟。 全国团体标准信息平台 藜麦中齐墩果酸含量的测定 高效液相色谱法 1　范围 本文件规定了藜麦中齐墩果酸含量的测定方法 高效液相色谱法。 本文件适用于藜麦中齐墩果酸含量的测定。 2　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅所注日期的版本适用于 本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3　术语和定义 本文件没有界定的术语和定义。 4　方法原理 齐墩果酸在甲醇 -盐酸溶液超声水解的方法下转化成齐墩果酸苷元，用高效液相色谱 -紫外检测 器测定，以保留时间定性，外标法定量，以齐墩果酸苷元的含量来定量藜麦中齐墩果酸的含量。 5　试剂 除非另有规定外，在分析中仅使用， GB/T 6682规定的一级水。 5.1 甲醇（ CH 3OH）：色谱纯。 5.2 盐酸（ HCl）：分析纯。 5.3 乙酸铵（ CH 3COONH 4）：优级纯。 5.4 盐酸溶液（ 3mol/L）：量取 250mL盐酸，用水稀释定容 至1000mL，混匀。 5.5 乙酸铵溶液 （0.1mol/L）：称取 7.7g乙酸铵，加水溶解， 定容至 1000mL，混匀， 经0.45µ m 微孔滤膜过滤后使用。 5.6 标准品：齐墩果酸（ C30H48O3，CAS：508-02-1），纯度≥ 98%。 5.7 标准溶液配制：准确称取 10mg（精确至 0.1 mg）齐墩果酸标准品，用甲醇溶解定容至 10mL， 即为1000mg/L的标准储备液。于 -18℃冰箱中贮存。临用前将溶液回温至室温。 6　仪器与设备 6.1　高效液相色谱仪（ HPLC）：配紫外检测器。 6.2　分析天平： 感量为 0.01mg和0.1mg。 6.3　电热恒温水浴锅： 0℃～100℃。 6.4　数控超声波提取器。 6.5 有机相微孔滤膜： 0.45µm。 6.6 高速万能粉碎机： 10000r/min 。 7　试样制备与提取 全国团体标准信息平台 藜麦样品经高速万能粉碎机粉碎成细粉末状， 准确称取 0.5g（精确至 0.1mg）于250mL磨口锥 形瓶中，加入甲醇溶液 80mL，3mol/L盐酸溶液 20mL，混匀密封瓶口 ，超声提取 20min（期间振摇 2-3 次），置于沸水浴中冷凝回流水解 1.5h，取出冷却 ，过滤提取液 ，吸取滤液经 0.45µm有机相滤膜过 滤，待测。 8 仪器参考条件 8.1 色谱柱： C18色谱柱（ 250mm×4.6mm ，5μm），或性能相当者。 8.2 流动相： 0.1mol/ L乙酸铵 -甲醇（ 15+85，V/V）。 8.3 检测波长： 215nm。 8.4 柱温： 30℃。 8.5 流速： 1.0mL/min 。 8.6 进样量： 10μL。 9 标准曲线的制作 准确吸取 标准溶液 0、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mL，分别定容至 10mL，配制成 标准系列 0 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的标准工作液 ，在色谱条件下进样检测 ， 分别以质量浓度 X（mg/L）为横坐标， 以响应值 Y（峰面积）为纵坐标，绘制标准曲线。 10 试样溶液的测定 将待测液注入高效液相色谱仪中 ，以保留时间定性 ，测定相应的峰面积 。根据标准曲线回归方 程计算得到待测液中齐墩果酸的浓度。 11 结果计算 试样中齐墩果酸含量按式（ 1）计算： …………………………(1) 式中： X—试样中齐墩果酸的含量，单位为毫克每千克（ mg/kg）； C—待测液中齐墩果酸的浓度，单位为毫克每升（ mg/L）； V—制备试样的体积，单位为毫升（ mL）； m—试样质量，单位为克（ g）。 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示 ，结果保留三位有效数字 。 12 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 20%。 10001000XmVC 全国团体标准信息平台 附　录　 A （规范性附录） 齐墩果酸标准溶液色谱图 齐墩果酸标准溶液色谱图见图 A.1 图A.1 齐墩果酸标准溶液色谱图（ 100mg/L） 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 min0.000.250.500.751.00mV(x100) Detector A Ch1:215nm 齐墩果酸 全国团体标准信息平台