ICS11.220 CCSB41 中华人民共和国国家标准 GB/T22332—2025 代替GB/T22332—2008 鸭病毒性肠炎诊断技术 Diagnostictechniquesforduckvirusenteritis 2025-08-29发布 2026-03-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 引言 Ⅳ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 缩略语 1 …………………………………………………………………………………………………… 5 临床诊断 2 ………………………………………………………………………………………………… 6 样品采集、保存与处理 3 …………………………………………………………………………………… 7 病毒分离鉴定 3 …………………………………………………………………………………………… 8 中和试验(固定病毒-稀释血清法) 5 ……………………………………………………………………… 9 直接免疫荧光 6 …………………………………………………………………………………………… 10 间接ELISA 7 …………………………………………………………………………………………… 11 PCR 9 …………………………………………………………………………………………………… 12 疫苗株与野毒株鉴别PCR 11 …………………………………………………………………………… 13 荧光定量PCR 12 ………………………………………………………………………………………… 14 综合判定 13 ……………………………………………………………………………………………… 附录A(规范性) 溶液配制 14 ……………………………………………………………………………… 附录B(资料性) 原代细胞制备方法 16 …………………………………………………………………… 附录C(资料性) 组织培养半数感染量(TCID50)测定方法(Reed-Muench法) 17 ……………………… 附录D(资料性) 中和试验加样示意图 18 ………………………………………………………………… 附录E(资料性) PCR及荧光定量PCR结果图 19 ……………………………………………………… ⅠGB/T22332—2025 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T22332—2008《鸭病毒性肠炎诊断技术》,与GB/T22332—2008相比,除结构调 整和编辑性改动外,主要技术变化如下: ———增加了缩略语(见第4章); ———更改了临床诊断的相关要求(见第5章,2008年版的第2章); ———更改了样品采集、保存与处理的相关要求(见第6章,2008年版的第3章); ———更改了病毒分离鉴定的相关要求(见第7章,2008年版的第3章); ———增加了中和试验(见第8章); ———增加了直接免疫荧光法(见第9章); ———增加了间接ELISA方法(见第10章); ———更改了PCR方法的相关要求(见第11章,2008年版的第4章); ———增加了疫苗株与野毒株鉴别PCR方法(见第12章); ———增加了荧光定量PCR方法(包含疫苗株与野毒株鉴别诊断方法)(见第13章); ———增加了诊断结果的综合判定(见第14章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。 本文件起草单位:中国动物卫生与流行病学中心、浙江省农业科学院、山东省农业科学院家禽研究 所、华南农业大学、山东中新食品集团有限公司。 本文件主要起草人:蒋文明、刘朔、陈柳、张存、李玉峰、云涛、崔雪志、王静静、叶伟成、于晓慧、李阳、 郭宵峰、刘华雷。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2008年首次发布为GB/T22332—2008; ———本次为第一次修订。 ⅢGB/T22332—2025 引 言 鸭病毒性肠炎(Duckvirusenteritis,DVE),又称鸭瘟(Duckplague),是由疱疹病毒科甲型疱疹病 毒亚科马立克病毒属鸭疱疹病毒1型引起的鸭、鹅和天鹅(雁形目)的一种急性、热性、接触性传染病。 病原鸭疱疹病毒1型又称鸭肠炎病毒(Duckenteritisvirus,DEV)、鸭瘟病毒(Duckplaguevirus,DPV) 和DVE病毒(DVEV)。本病以高热,血管损伤致使组织、体腔出血,消化道黏膜的疹性损害,淋巴器官 病变和实质器官退行性变化为特征。本病传播迅速,发病率和病死率都很高,严重威胁养鸭业的发 展,对野生水禽存在潜在威胁。尚未见其他禽类、哺乳动物或人类感染的报道。病原只有一个血清 型,不同毒株在致病性上存在差异。目前,主要依靠弱毒活疫苗进行防控。 本病诊断综合考虑临床诊断、病原学诊断、血清学诊断和分子生物学诊断等方法。作为疱疹病毒科 的DEV,其基因组容易发生重组与变异,因此,在鉴别诊断的时候参考多个靶基因对疫苗株与野毒株进 行区分。 ⅣGB/T22332—2025 鸭病毒性肠炎诊断技术 1 范围 本文件描述了鸭病毒性肠炎临床诊断和病毒分离鉴定、中和试验、直接免疫荧光、间接酶联免疫吸 附试验(ELISA)、聚合酶链式反应(PCR)、疫苗株与野毒株鉴别诊断PCR、荧光定量PCR等实验室诊 断方法。 本文件适用于鸭病毒性肠炎的诊断、检测、监测和流行病学调查。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CAM:绒毛尿囊膜(ChorioallantoicMembrane) CEF:鸡胚成纤维细胞(ChickenEmbryoFibroblastCell) CPE:细胞病变(CytopathicEffect) DEF:鸭胚成纤维细胞(DuckEmbryoFibroblastCell) DEK:鸭胚肾细胞(DuckEmbryoKidneyCell) DEV:鸭肠炎病毒(DuckEnteritisVirus) DPV:鸭瘟病毒(DuckPlagueVirus) DVE:鸭病毒性肠炎(DuckVirusEnteritis) ELISA:酶联免疫吸附试验(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay) PBS:磷酸盐缓冲液(PhosphateBufferSaline) PBST:磷酸盐吐温缓冲液(PhosphateBufferSalinewithTween-20) PCR:聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction) SPF:无特定病原(SpecificPathogenFree) TAE:三羟甲基氨基甲烷-乙酸-乙二胺四乙酸(TrihydroxymethylAminomethane-aceticAcid-eth- yleneDiaminetetraAceticAcid) TCID50:组织细胞半数感染量(MedianTissueCultureInfectiveDose) 1GB/T22332—2025 5 临床诊断 5.1 流行病学 5.1.1 自然条件下可感染鸭、鹅和天鹅以及所有雁形目鸭科成员。 5.1.2 雏鸭至成年种鸭均可感染发病。1月龄以上多发,成年鸭和产蛋母鸭发病死亡较重,一年四季均 可发生。 5.1.3 自然感染的潜伏期一般为3d~4d。 5.1.4 主要通过消化道感染,交配、眼结膜和呼吸道也可传染。 5.2 临床症状 5.2.1 鸭群突然出现持续性高死亡率,病初体温升高(43℃以上),呈稽留热。 5.2.2 病鸭精神萎顿,采食减少或停食,饮欲增加,头颈缩起,羽毛松乱,两翅下垂,共济失调。 5.2.3 病鸭头和颈部肿胀,眼角膜浑浊、流泪、怕光,流鼻液,眼睑水肿、常粘连或被干酪样分泌物覆 盖,体表有散在出血斑。 5.2.4 病鸭下痢,水样腹泻,排出草绿色或灰白色稀粪。 5.2.5 成年鸭死亡时膘情良好,死亡公鸭阴茎脱垂明显。 5.2.6 产蛋鸭群在死亡高峰期产蛋明显下降。 5.2.7 2周龄~7周龄商品鸭表现脱水、消瘦,喙发蓝,结膜炎、流泪、鼻腔有渗出物和泄殖腔有血染。 5.2.8 自然条件下鹅感染DEV,临床症状与鸭相似。 5.3 病理变化 5.3.1 剖检变化 5.3.1.1 病鸭头颈部皮下有不同程度的炎性水肿或黄色胶冻样物。 5.3.1.2 病鸭口腔黏膜出血、坏死,有黄色假膜附着。 5.3.1.3 食道条索状出血。 5.3.1.4 肠黏膜充血出血,以十二指肠和直肠最为严重。 5.3.1.5 发病鸭肝脏有点状出血和灰白坏死点交替出现。 5.3.1.6