ICS13.300 CCSA80 中华人民共和国国家标准 GB/T21754—2025 代替GB/T21754—2008 化学品 28天(亚急性) 吸入毒性试验方法 Chemicals—Testmethodof28day(subacute)inhalationtoxicity 2025-08-29发布 2025-12-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T21754—2008《化学品28天/14天重复剂量吸入毒性试验方法》,与GB/T 21754—2008相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: ———更改了“范围”(见第1章,2008年版的第1章); ———更改了“术语和定义”“缩略语”(见第3章、第4章,2008年版的第2章); ———更改了“试验方法”,增加“剂量探索试验”(见第6章,2008年版的第4章); ———更改了“试验方法”,更改了颗粒气溶胶质量中值空气动力学直径(MMAD)和几何标准差 (GSD)的要求(见第6章,6.7,2008年版的4.4.2); ———更改了“试验方法”,增加了支气管肺泡灌洗液及肺负荷的检测分析和肺组织病理学检查(见第 6章,6.8,2008年版的4.4.1); ———增加了“附录A试验方案”(见附录A)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。 本文件起草单位:中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所、广东省职业病防治院、宁德市标 准化协会。 本文件主要起草人:刘莉莉、谢植伟、曾丽海、陆丰荣、李斌、陈宵、肖经纬、张意、鱼涛、林立伟。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2008年首次发布为GB/T21754—2008; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T21754—2025 化学品 28天(亚急性) 吸入毒性试验方法 1 范围 本文件描述了化学品28天(亚急性)吸入毒性的试验方法。 本文件适用于化学品的28天(亚急性)吸入毒性试验。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB14925 实验动物 环境及设施 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 气溶胶 aerosol 固态颗粒或液态微滴悬浮于气体中形成的悬浮体。 3.2 粉尘 dust 由单一物质或混合物形成的能悬浮在空气中的固体颗粒。 3.3 雾 mist 由2μm~100μm大小不等的单一物质或混合物的液滴悬浮在空气中所形成的状态。 3.4 蒸气 vapour 在常温和常压下呈液态或固态的单一物质或混合物所形成的气体状态。 3.5 浓度 concentration 在吸入毒性试验中,实验动物吸入的空气中受试物的浓度。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BAL:支气管肺泡灌洗(bronchoalveolarlavage) BALF:支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid) GSD:几何标准差(geometricstandarddeviation) 1GB/T21754—2025 LOAEL:观察到有害作用最低剂量水平(lowestobservedadverseeffectlevel) MMAD:质量中值空气动力学直径(massmedianaerodynamicdiameter) NOAEL:未观察到有害作用剂量水平(noobservedadverseeffectlevel) PEO:暴露后观察(post-exposureobservations) 5 试验基本原则 5.1 不同染毒组的动物(每组雌、雄各5只)分别在28天内,每天暴露6h,吸入不同浓度的受试物。对 照组动物除无受试物染毒外,其他处置均与试验组完全一样。在染毒期间,每天观察动物,监测毒性效 应。染毒结束后24h内处死存活的动物,并作大体解剖、BALF分析和组织病理学检查,一般左肺用于 组织病理学检查,右肺用于BALF分析。当相关信息表明吸入受试物颗粒可溶性差,可能在肺部沉积 并滞留时,进行肺负荷的测量。 5.2 28天(亚急性)吸入毒性试验提供重复剂量吸入染毒后的毒性效应资料,并能表明是否需要进一 步的较长期试验,同时为较长期试验的剂量选择提供资料,为定量吸入风险评估提供可靠的数据。 6 试验方法 6.1 受试物 6.1.1 受试物的形态可以是气体、蒸气、气溶胶或它们的混合物,主要取决于受试物的物理化学性质、 选定的浓度,以及在处理和使用受试物时最可能存在的物理形态。吸湿性和化学反应性受试物应在干 燥空气条件下进行试验。注意避免造成爆炸的浓度。 6.1.2 染毒时,受试物应在空气中保持一定浓度,必要时加入适当的赋形剂(首选水)。赋形剂本身无 毒性,不与受试物发生反应,也不影响受试物吸收。 6.1.3 需经过机械处理才能达到所需粒径分布的受试物,在处理过程中不能分解或改变受试物成分。 如机械处理改变了受试物的组成,应通过适当的分析方法进行验证。同时需采用适当的预防措施避免 受试物受到污染。 6.1.4 试验前,如无受试物相关信息,应对受试物进行理化分析,包括其纯度,已识别的污染物和杂质 的特性和浓度。试验中应使用同一批次受试物。受试物样本在能保持其纯度、同质性、稳定性的条件下 保存。 6.2 动物选择 6.2.1 动物品系的选择 使用健康成年的动物和实验室常用品系。首选大鼠,如需选用其他种属需说明理由。 6.2.2 动物准备 在试验开始时,动物为8周龄~9周龄,体重差异不超过同性别平均体重的±20%。雌性动物是未 妊娠和未生产的。动物随机分组,并具有唯一性标识。开始试验前动物至少在实验设施内适应和检疫 观察5天。 6.2.3 饲养条件 实验动物的饲养条件按照GB14925要求,动物房的室温控制在23℃±3℃,相对湿度30%~ 70%。试验前后每个浓度组动物按性别和浓度分笼饲养,每笼动物数以不干扰动物个体活动及观察反 2GB/T21754—2025 应为宜。当动物通过口鼻部暴露染毒时,需适应染毒装置一段时间。全身暴露于气溶胶的动物在染毒 期间单笼饲养,以避免动物从同伴的毛发误食受试物气溶胶。喂饲常规动物饲料,动物自由饮水(暴露 期间除外)。采用人工照明,光照周期为昼12h~14h,夜12h~10h。 6.3 染毒装置 根据受试物的物理特性和试验目的选择染毒装置,装置内严格控制和监测气流,O2浓度不低于 19%,CO2浓度不高于1%,受试物均匀分布。染毒装置内温度为23℃±3℃,相对湿度为30%~ 70%。首选经口鼻部暴露,特别是在测试液体、固体气溶胶或可凝结成为气溶胶的蒸气时。如采用全身 暴露方式染毒,需说明理由,并且动物的总体积不超过染毒柜容积的5%。 6.4 限量浓度 最大浓度选择的理由:a)最大可及浓度;b)最坏程度的人体暴露水平;c)保持足够的O2供应;d)动 物福利。若没有限量浓度的数据基础时,气体、蒸气、气溶胶的限定浓度分别为体积分数2×10-2、 20mg/L和5mg/L。如果要使用更高的浓度,则需说明理由。限量浓度应引起明显的毒性效应,但不 应产生严重不适或影响动物寿命。 6.5 剂量探索试验 6.5.1 剂量探索试验能为主试验提供浓度选择的依据、受试物的分析方法、颗粒大小分布以及在肺部 的溶解度等信息。 6.5.2 剂量探索试验由一个或多个浓度水平和一个阴性对照组组成。每个浓度水平的雌性和雄性动 物不超过5只。剂量探索试验常持续5天~14天,当受试物是难溶性颗粒时,可超过14天。如设有 PEO,则需增加动物数量。 6.6 主试验 6.6.1 剂量水平与动物分组 6.6.1.1 主试验一般有3个浓度组和一个阴性对照组和/或一个赋形剂对照组。在设计主试验时,需要 考虑受试物的不同物理状态(如气体、蒸气、气溶胶等)以及它们在体内的潜在情况(如是否会在肺部沉 积并滞留)。根据剂量探索试验的结果和其他可用的相关信息来决定主试验的试验设计和暴露水平,以 确保试验的科学性和合理性。 6.6.1.2 每个试验组至少包括10只动物(雌、雄各5只)。每周暴露5天(或7天),每天暴露6h,有特 殊要求时,也可延长或缩短染毒时间,但应说明理由。整个试验持续28天。当受试物可能在肺部沉积 并滞留时,应同时设置一个附加组,使用雄性动物5只(与雌性相比,雄性有更高的分钟通气量,因此可 能有更高的肺部负荷)与主试验同时暴露,并在主试验的暴露后观察(PEO-1)进行肺部负荷测量,以提 供有关滞留剂量的信息。如果剂量探索试验表明一种性别对受试物更敏感,可以对不同性别的动物施 加不同的浓度水平。 6.6.1.3 一般情况下,动物暴露染毒期间应禁食,以避免食物影响受试物的吸入或减少动物误食受试物 气溶胶。在全身暴露染毒期间,可为动物提供饮水,以确保它们的水分摄入和整体健康。 6.6.2 浓度选择理由 主试验的浓度设置可根据剂量探索试验确定。低浓度不应出现任何毒性反应;高浓度应在引起明 显的毒性反应前提下不造成动物死亡;中浓度与低浓度和高浓度均有适当的间隔,以产生不同程度的毒 性反应。 3GB/T21754—2025 6.6.3 中期解剖 如在主试验的暴露期间计划进行中期解剖,则在每个暴露水平应增加计划解剖的