ICS65.120 CCSB46 中华人民共和国国家标准 GB/T17481—2025 代替GB/T17481—2008 添加剂预混合饲料中氯化胆碱的测定 Determinationofcholinechlorideinfeedadditivepremix 2025-08-29发布 2026-03-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T17481—2008《预混料中氯化胆碱的测定》,与GB/T17481—2008相比,除结构 调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 增加了离子色谱法的检出限,更改了雷氏盐分光光度法的定量限(见第1章,2008年版的第1 章); b) 增加了标准系列溶液(见4.2.8); c) 更改了试样溶液的制备(见4.5.1,2008年版的3.5.1); d) 更改了离子色谱参考条件(见4.5.2,2008年版的3.5.2.1); e) 增加了定性和定量要求(见4.5.3.2和4.5.3.3); f) 更改了试验数据处理(见4.6和5.6,2008年版的3.6和4.6); g) 增加了雷氏盐甲醇溶液的有效期(见5.2.5); h) 更改了标准系列溶液制备(见5.5.3,2008年版的4.5.3.2); i) 更改了标准曲线绘制和试样测定(见5.5.4,2008年版的4.5.3.1)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。 本文件起草单位:四川威尔检测技术股份有限公司、国粮武汉科学研究设计院有限公司、全国畜牧 总站。 本文件主要起草人:杜雪莉、唐姣、粟胜兰、张凤枰、王博媛、周婕敏、陈玲、马慧芳、李明、雷宝良、 田海峰、王海燕、杜言、卢加文、宋军、杨发树、孙阳阳、何永超。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———1998年首次发布为GB/T17481—1998,2008年第一次修订; ———本次为第二次修订。 ⅠGB/T17481—2025 添加剂预混合饲料中氯化胆碱的测定 1 范围 本文件描述了添加剂预混合饲料中氯化胆碱的离子色谱和雷氏盐分光光度测定方法。 本文件适用于维生素预混合饲料和复合预混合饲料中氯化胆碱的测定。 本文件离子色谱法的检出限为20mg/kg、定量限为50mg/kg;雷氏盐分光光度法的定量限为 5000mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 离子色谱法 4.1 原理 试样中的氯化胆碱用水或三氯甲烷-甲醇溶液提取,阳离子交换色谱-电导检测器检测,外标法 定量。 4.2 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 4.2.1 水:GB/T6682,一级。 4.2.2 乙二胺四乙酸二钠(EDTA二钠)。 4.2.3 甲醇:色谱纯。 4.2.4 三氯甲烷-甲醇溶液:量取90mL三氯甲烷和900mL甲醇,混匀。 4.2.5 甲磺酸溶液(24mmol/L):称取2.304g甲磺酸于1000mL烧杯中,加水800mL,溶解,转移至 1000mL容量瓶中,用水定容,混匀。 4.2.6 标准储备溶液(2mg/mL):称取200mg(精确至0.1mg)氯化胆碱标准品(CAS号:67-48-1,纯 度不低于99.5%)于100mL容量瓶中,用水溶解、定容,混匀。2℃~8℃保存,有效期3个月。 4.2.7 标准中间溶液(100μg/mL):准确移取5mL标准储备溶液(4.2.6)于100mL容量瓶中,用水稀 释、定容,混匀。临用现配。 4.2.8 标准系列溶液:分别准确移取适量标准中间溶液(4.2.7),用水稀释、定容,混匀,制备成质量浓度 1GB/T17481—2025 分别为1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL的标准系列溶液。 临用现配。 4.2.9 净化柱:聚二乙烯基苯聚合物反相填料,1mL。 4.2.10 微孔滤膜:0.45μm,水系。 4.2.11 滤纸:定性,快速。 4.3 仪器设备 4.3.1 离子色谱仪:配电导检测器。 4.3.2 分析天平:精度0.1mg。 4.3.3 水浴锅。 4.3.4 超声清洗器。 4.3.5 涡旋混合器。 4.3.6 氮吹仪。 4.4 样品 按GB/T20195制备样品,至少200g,粉碎使其全部通过0.425mm孔径的试验筛,充分混匀,装入 密闭容器中,避光保存。 4.5 试验步骤 4.5.1 试样溶液制备 4.5.1.1 维生素预混合饲料 平行做两份试验。称取试样1g~2g(含氯化胆碱0.01g~0.2g,精确至0.1mg),置于100mL容 量瓶中,加约60mL水,摇匀,置于70℃水浴中20min,超声10min,取出,冷却至室温,用水定容 (V),摇匀,过滤。取8mL滤液,过预先用5mL甲醇(4.2.3)、15mL水活化的净化柱(4.2.9),弃去前 3mL滤出液,收集净化液,过微孔滤膜(4.2.10),待测。 4.5.1.2 复合预混合饲料 平行做两份试验。称取试样1g~2g(精确至0.1mg),置于100mL容量瓶中,加入1g~2gED- TA二钠、60mL三氯甲烷-甲醇溶液(4.2.4),摇匀,超声提取30min,每10min摇匀1次,取出,冷却至 室温,用三氯甲烷-甲醇溶液(4.2.4)定容(V),摇匀,过滤。准确移取8mL滤液于离心管中,40℃氮气 吹至近干,准确加入8mL水,涡旋混匀,过预先用5mL甲醇(4.2.3)、15mL水活化的净化柱 (4.2.9),弃去前3mL滤出液,收集净化液,过微孔滤膜(4.2.10),待测。 4.5.2 离子色谱参考条件 离子色谱参考条件如下: a) 色谱柱:弱酸型阳离子交换柱,柱长250mm,内径4mm,粒径8.5μm,或性能相当者; b) 保护柱:弱酸型阳离子交换柱,柱长50mm,内径4mm,粒径8.5μm,或性能相当者; c) 柱温:30℃; d) 淋洗液:甲磺酸溶液(4.2.5),或与离子色谱仪适配的淋洗液; e) 流速:1.0mL/min; f) 进样量:25μL。 2GB/T17481—2025 4.5.3 测定 4.5.3.1 标准溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下,分别取标准系列溶液(4.2.8)和试样溶液(4.5.1)上机测定。氯化胆碱标准溶 液的离子色谱图见附录A。 4.5.3.2 定性 以保留时间定性,试样溶液中氯化胆碱保留时间应与标准系列溶液(质量浓度相当)中氯化胆碱的 保留时间一致。 4.5.3.3 定量 以氯化胆碱的质量浓度为横坐标、色谱峰面积(响应值)为纵坐标,绘制标准曲线,其相关系数应不 低于0.99。试样溶液中氯化胆碱的质量浓度应在标准曲线的线性范围内。如超出范围,应将试样溶液 用水稀释后重新测定。单点校准定量时,试样溶液中待测物的质量浓度与标准溶液的质量浓度相差不 超过30%。目标峰与相邻峰之间的分离度应大于1.5。 4.6 试验数据处理 试样中氯化胆碱的含量w,多点校准按公式(1)计算,单点校准按公式(2)计算,数值以毫克每千克 (mg/kg)表示。 w=ρ×V×1000 m×1000×f …………………………(1) 式中: ρ ———从标准曲线查得的试样溶液中氯化胆碱的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V———试样溶液体积,单位为毫升(mL); 1000———换算系数; m———试样质量,单位为克(g); f———超出标准曲线线性范围的试样溶液稀释倍数。 w=A×ρS×V×1000 AS×m×1000×f …………………………(2) 式中: A ———试样溶液中氯化胆碱色谱峰面积; ρS———标准溶液氯化胆碱质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V———试样溶液体积,单位为毫升(mL); 1000———换算系数; AS———标准溶液中氯化胆碱色谱峰面积; m———试样质量,单位为克(g); f———试样溶液稀释倍数。 测定结果以平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字。 4.7 精密度 在重复性条件下,两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10%。 3GB/T17481—2025 5 雷氏盐分光光度法 5.1 原理 试样中的氯化胆碱用三氯甲烷-甲醇溶液提取,蒸干溶剂后用水溶解,再在低温下加入雷氏盐生成 结晶,过滤,获得的结晶物用丙酮溶解,在525nm波长下测定吸光度,与标准系列溶液比较定量。 5.2 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 5.2.1 水:GB/T6682,二级。 5.2.2 甲醇。 5.2.3 丙酮。 5.2.4 三氯甲烷-甲醇溶液:量取90mL三氯甲烷和900mL甲醇,混匀。 5.2.5 雷氏盐(二氨基四硫代氰酸铬铵,[NH4Cr(NH3)2(SCN)4])甲醇溶液(40g/L):称取4g雷氏 盐,用甲醇溶解、定容至100mL,混匀,2℃~8℃保存,有效期48h。 5.2.6 标准储备溶液(1mg/mL):称取100mg(精确至0.1mg)氯化胆碱标准品(CA