以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 鲤春病毒血症检疫技术规范 Quarantine Protocol for the Infection with Spring Viraemia of Carp Virus 2025 -07-25发布 2026 -02-01 实施ICS 11.220 CCS B 41 中华人民共和国海关总署 发 布SN/T 1152 —2025 代替 SN/T 1152—2011以正式出版文本为准以正式出版文本为准 SN/T 1152—2025I前 言 本文件按照 GB/T 1.1— 2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 本文件代替 SN/T 1152— 2011《鲤春病毒血症检疫技术规范》 ，与 SN/T 1152— 2011 相比，除结构 调整和编辑性改动外，主要技术内容变化如下： ——修改了“实时荧光 RT-PCR”检测方法（见 9.3） ； ——增加了“逆转录重组酶介导链置换核酸扩增（RT-RAA） ”检测方法（见 9.4） ；——删除了“酶联免疫吸附试验（ELISA） ”方法； ——修改了“综合判定” （见第 10 章） 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位：深圳海关动植物检验检疫技术中心、深圳市检验检疫科学研究院、中华人民 共和国沈阳海关、中华人民共和国青岛海关、中华人民共和国烟台海关、深圳技术大学。 本文件主要起草人：吴江、孙洁、廖立珊、温智清、耿庆华、尹伟力、岳志芹、林彦星、王津 津、阮周曦、贾鹏、郑晓聪、朱鹏、刘荭。 本文件及其所替代文件的历次版本发布情况为：—— SN/T 1152— 2002 ；—— SN/T 1152— 2011。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1 SN/T 1152—2025鲤春病毒血症检疫技术规范 1 范围 本文件规定了鲤春病毒血症的采样制样、病毒分离、逆 转录聚合酶链式反应、实时荧光 逆 转录 聚合酶链式反应 、实时荧光逆 转录重组酶介导链置换核酸扩增 检测方法和综合判定方法。 本文件适用于鲤春病毒血症的诊断、检疫和疫情监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 18088 出入境动物检疫采样 GB 19489 实验室生物安全通用要求 GB/T 27401 实验室质量控制规范 动物检疫 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。CPE ：细胞病变效应（cytopathic effect）Ct 值：阈值循环数（cycle-threshold value）dNTPs ：脱氧核苷酸三磷酸（deoxynucleotide triphosphates）DEPC ：焦碳酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate）EPC ：鲤鱼上皮瘤细胞系（ epithelioma papulosum cyprini cell line） FHM ：胖头鱥肌肉细胞系（fathead monnow cell line）GCO ：草鱼性腺细胞系（grass carp ovary cell line）EDTA ：乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid）FBS ：胎牛血清（fetal bovine serum）SVC ：鲤春病毒血症（Spring Vireamia of Carp） （见附录 A）SVCV ：鲤春病毒血症病毒（Spring Vireamia of Carp Virus）T 值：阈值时间（Time threshold）PEG ：聚乙二醇（polyethyleneglycol） Taq：水生栖热菌（ Thermus aquaticus ）以正式出版文本为准2 SN/T 1152—2025RNA ：核糖核酸（ribonucleic acid） PCR ：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）AMV ：禽成髓细胞性白血病病毒（Avian Myeloblastosis Virus）RT-PCR ：逆转录聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction）RT-RAA ：逆转录重组酶介导链置换核酸扩增（reverse transcription recombinase-aid amplification） 5 仪器和设备 5.1 倒置显微镜。 5.2 组织研磨器。 5.3 生化培养箱。 5.4 光学显微镜。 5.5 PCR 扩增仪。 5.6 荧光定量 PCR 仪。 5.7 恒温荧光检测仪。 5.8 水平电泳仪。 5.9 凝胶成像仪。 5.10 低温冰箱。 5.11 低温冷冻离心机。 5.12 生物安全柜。 5.13 高压灭菌锅。 6 试剂和材料 6.1 水：符合 GB/T 6682 中一级水的规格。 6.2 SVCV 参考株：世界动物卫生组织参考实验室保存，毒株编号：SVCV20040978。 6.3 鱼类细胞系：EPC、FHM 或 GCO。 6.4 细胞培养液 1 ：见附录 B.1。 6.5 细胞培养液 2 ：见附录 B.2。 6.6 胰酶消化液：见附录 B.3。 6.7 Taq DNA 聚合酶：生化试剂，-20 ℃保存。 6.8 dNTPs ：含 dCTP、dGTP、dATP、dTTP 各 10 mmol/L 的混合物，-20 ℃保存。 6.9 PCR 反应缓冲液：生化试剂，无 Mg2+，-20 ℃保存。 6.10 AMV 逆转录酶：生化试剂，-20 ℃保存。 6.11 RT-PCR 用引物，浓度为 10 µmol/L，用于扩增 SVCV G 蛋白基因片段。引物 F1 和引物 R2 是 第一轮 PCR 引物，目的产物大小为 714 bp ；引物 F1 和引物 R4 是第二轮 PCR 引物，目的产物大小为 606 bp。序列如下： ——引物 SVCV F1 ：5’-TCTTGGAGCCAAATAGCTCARRTC-3’ ；——引物 SVCV R2 ：5’-AGATGGTATGGACCCCAATACATHACNCAY-3’ ； ——引物 SVCV R4 ：5’-CTGGGGTTTCCNCCTCAAAGYTGY-3’ 。 6.12 实时荧光 RT-PCR 用引物和探针，浓度为 10 µmol/L。检测时可任选一对，序列如下： ——第一套实时荧光 RT-PCR 的引物和探针序列，用于检测 SVCV 的 N 蛋白基因片段。 a）引物 SVCV qF1 ：5’-CATGGTATTCTGACGTRGACAA-3’ ；b）引物 SVCV qR1 ：5’-CCATAGGTRTGTTTTATCCATTTGC-3’ ；以正式出版文本为准3 SN/T 1152—2025c）探针 SVCV qP1 ：5’-FAM-ACGGATGACATGCTCATGATGGCAAA-BHQ1-3’ 。 ——第二套实时荧光 RT-PCR 的引物和探针序列，用于检测 SVCV 的 L 蛋白基因片段。a）引物 SVCV qF2 ：5’-CAATGGGAATGAGTGCTTCT-3’ ；b）引物 SVCV qR2 ：5’-TGATTTGGTTTTGAATTGTRTC-3’ ；c）探针 SVCV qP2 ：5’-FAM-AGACAGAGGTRAAAGGACATCTGAT-BHQ1-3’ 。 6.13 实时荧光 RT-RAA 用引物和探针，浓度为 10 µmol/L，用于检测 SVCV 的 L 蛋白基因片段。序 列如下： ——引物 SVCV-RAA-F ：5’-GGCAAGATTCAGACCAGAACACATACCTAA-3’ ； ——引物 SVCV-RAA-R ：5’-CTCAAGAATCGTGGGAAGAAAGGTTCAATA-3’ ；—— 探针 SVCV-RAA-P：5’-GTTGAAGACAGAGGTGAAAGGACATC［FAM-DT］ ［THF］A［BHQ- DT］TAGAACAGCAGACACAATT-C3 Spacer-3’ 。 6.14 无水乙醇：分析纯，使用前预冷至 -20 ℃。 6.15 TBE 电泳缓冲液：见附录 B.4。 7 临床症状及病理变化 患病鱼体色发黑，呼吸困难，运动失调（侧游，顺水漂流或游动异常） 。腹部膨大，眼球突出， 肛门红肿，皮肤和鳃渗血。剖检可见全身出血水肿及腹水。消化道出血，腹腔内积有浆液性或带血的腹水。心、肾、鳔、肌肉等器官或组织呈现出血性炎症，以鳔内壁最常见；肌肉因出血而呈暗红色。 8 采样和制样 8.1 采样 样品优先采集活的、发病的和濒死的鱼，采样数量按照 GB/T 18088 规定执行。体长小于 4 cm 的 取整条；体长 4 cm~6 cm 的鱼苗取所有内脏，包括脑和肾；体长大于 6 cm 的鱼优先取肾、脾和脑， 成熟雌鱼取其卵巢液。 样品应尽快送到实验室，有条件尽可能保持鱼的存活；鱼组织需置于 4 ℃下冷藏，24 h 内送达实 验室。实验室检测条件应符合