QB ICS59.140.30 分类号：Y46 备案号：32266-2011 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T 4199-2011 皮革 防霉性能测试方法 Leather-Test methodfor antimould 2011-06-15发布 2011-10-01实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 QB/T4199-2011 前 言 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国皮革工业标准化技术委员会（SAC/TC252）归口。 本标准起草单位：国家皮革质量监督检验中心（浙江）、浙江盛汇化工有限公司。 本标准主要起草人：黄新霞、姜德云、王海明、马贺伟。 建筑321---标准查询下载网 v i z321. net QB/T 4199--2011 皮革防霉性能测试方法 1范围 本标准规定了皮革的防霉性能测试方法。 本标准适用于各种半成品革、皮革。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T4789.15食品卫生微生物学检验霉菌和酵母计数 GB/T6682分析试验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，ISO3696:1987，MOD） QB/T2707皮革物理和机械试验试样的准备和调节（QB/T2707-2005，ISO2419:2002，MOD） 3原理 将霉菌接种于待测样品上，在规定条件下培养一定时间后，观察样品表面霉菌生长情况，然后判断 样品的防霉性能。 4设备和材料 4.1恒温培养箱，可控温度（25土1）℃。 4.2冰箱，可控温度0℃5℃。 4.3生物安全柜，二级。 4.4光学显微镜，放大倍数5倍～50倍。 4.5压力蒸汽灭菌器，5L。 4.6离心机，2000r/min，能控制温度至-5℃。 4.7振荡器，振荡频率50r/min~150r/min。 4.8电子天平，精度0.01g。 4.9培养皿，三分格，直径100mm。 4.10模刀，圆形，内直径25mm。 4.11 医用胶带。 5样品的制备 5.1对照样品 按附录A进行制备，阴性对照样品、阳性对照样品各两个。测试前将对照样品从冰箱中取出，解冻 至室温。 一阴性对照样品，编号.A； 阳性对照样品，编号B。 5.2测试样品 测试样品，编号C。用模刀（4.10）切取三个样品，其中两个为测试样品，另一个为备用样品，按 QB/T2707进行空气调节。 1 QB/T4199-2011 6 培养基和试剂 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的三级水。 6.1格林氏溶液 按表1规定进行配制。 表1格林氏溶液的组分 组 分 用 量 水（新煮沸后冷却至室温） 1000mL NaCl 6.5g~7.5g KCI 0.09g~0.14g CaCl2 0.11g~0.12g NaHCO; 0.20g~0.22g 6.2培养基的配制 6.2.1 孟加拉红培养基 按表2规定进行配制，加热溶解后，用0.1mol/LNaOH溶液调节pH至7.0～7.2，分装后置于压力蒸汽 灭菌器（4.5）内，121℃灭菌15min。 孟加拉红培养基组分 表2 组分 用 量 水（新煮沸后冷却至室温） 900mL 1/3000孟加拉红溶液 100mL 蛋白陈 5.0g 葡萄糖 10.0g 琼脂 20.0g 氯霉素 0.1g KH,PO4 1.0g MgS047H20 0.5g 6.2.2斜面培养基 取蛋白陈10.0g，牛肉膏3.0g，氯化钠5.0g，琼脂20.0g，加入1000mL蒸馏水，加热溶解并搅拌，煮 沸1min，加入到直径15mm的试管中（不超过体积的1/5），置于压力蒸汽灭菌器内，121℃灭菌15min， 冷却至60℃时，摆斜面。 6.3润湿剂 选择N-甲基乙磺酸、吐温80、二辛磺化丁二酸钠三种试剂中的任意一种，制成含0.05%润湿剂的 水溶液，调节pH至6.0～6.5，置于压力蒸汽灭菌器内，115℃灭菌30min。 7检测用菌种的准备 7.12 检测用菌种 检测用菌种见表3，防霉性能测试应在具有生物安全防护的霉菌实验室进行。 2 建筑321---标准查询下载网 ww i z321. net QB/T4199-2011 表3检测用的菌种 序号 菌种名称 菌种编号 ATCC10836, 1 黄曲霉（Aspergllus flavus） 黑曲霉（Aspergillus niger） ATCC 6275 2 ATCC 48559: 3 大毛霉（Mucormucedo） 4 产黄青霉（Penicilliumchrysogenum） ATCC 9179 5 ATCC16025 桔灰青霉（Penicilliumaurantiogriseum） 6 变幻青霉（Penicilliumvariabile） ATCC 32333 ATCC 10525 7 马氏拟青霉（Paecilomycesmarquandi） 8 绿色木霉（Trichodermaviride） IFO 31137 “根据产品的使用要求，可选用其他菌种作为检测菌种，但选用的菌种应具有相应的标准菌种合格证明。 7.2菌种培养和保藏 准备8个斜面培养基（6.2.2），将8类菌种分别单独接种，放入恒温培养箱（4.1），在温度(25土1)℃ 下培养7d～14d后，于2℃～10℃下储藏（不应超过三个月），作为保藏菌。 7.3孢子悬液的制备 7.3.1在培养好的菌种（7.2）中加入10mL含有0.05%湿润剂的水溶液（6.3）。 7.3.2用灭菌接种针轻轻刮取培养物的表面，使孢子成游离状态，轻轻摇动孢子悬液，使其分散开， 然后将悬液轻轻倒入含有玻璃珠的锥形瓶中。 7.3.3将装有孢子悬液的锥形瓶放在振荡器（4:7）中，振荡2h～3h，使孢子群完全分散开；然后用纱 布过滤以除去菌丝，得到孢子悬液。 按GB/T4789.15的规定，用生理盐水调节混合孢子悬浮液密度，利用血球计数板计数，使悬浮液中 孢子浓度为（5士0.2）×10°cfu。 7.3.4重复7.3.1～7.3.3，将8种霉菌分别制成孢子悬液，然后将8种孢子悬液混合在一起，充分振荡 使其均匀分散，得到混合霉菌孢子悬液。 混合霉菌孢子悬液应当天使用，若不在当天使用，应于0℃～10℃下贮存，4日内使用。 7.4霉菌活性控制 7.4.1无菌培养皿中注入孟加拉红培养基（6.2.1），厚度3mm～6mm，凝固后待用（48h内使用）。 7.4.2剪取直径25mm的圆形无菌滤纸，铺在已凝固的培养基上，用装有新制备的混合霉菌孢子悬液 （7.3.4）的喷雾器，将孢子悬液充分均匀地喷在培养基和滤纸上。在温度28℃、相对湿度90%的条件 下培养7d，滤纸上明显有菌生长，否则应重新制备混合霉菌孢子悬液。 8样品测试 8.1取两个三分格培养皿（4.9)，在每个培养皿的三分格外壁分别贴好A、B、C标签，A为阴性对照 样品，B为阳性对照样品，C为测试样品，平行测定。 8.2将滤纸折叠好，剪去尖角后放入培养血中，用移液管移取少量无菌水使滤纸润湿。 8.3将两组样品分别放入两个培养皿中对应的分格内，粒面（使用面）向上。 注：如果样品表面霉菌生长不明显，但样品的边缘霉菌生长明显，则测试样品的另一个面的防霉性能，并在试验报 告中注明。 3 QB/T4199-2011 8.4从冰箱中取出混合霉菌孢子悬液（7.3.4），温度平衡至室温后，移取约1mL的混合霉菌孢子悬液 放入1mL离心试管中，在温度10℃～15℃、转速2000r/min条件下，离心处理20min。 注：混合霉菌孢子悬液的移取量由离心管的体积决定，通常移取1mL。 8.5用无菌移液器小心移除上层清液，加入0.25mL格林氏溶液（6.1）稀释、混匀霉菌孢子。 8.6在培养皿中每个样品的中央部位各加入10uL的混合霉菌孢子悬液（8.5），然后用医用胶带（4.11） 密封培养血，防止污染。 8.7将培养皿置于（25土2）℃、饱和湿度的培养箱中，连续培养28d。 9等级评价 9.1检查 每隔7d用50倍光学显微镜（4.4）检查霉菌生长情况，检查4次（检查时间共28d）。第一次检查时 如果发现阴性测试样品A上无霉菌生长，则该次测试无效，应重新用孢子接种，然后再培养。 9.2等级判定 根据对照样品、测试样品的霉菌生长情况进行判定，应符合表4规定。 表4等级判定 样品测试表面霉菌生长情况 等级 等级说明 阴性对照样品A 阳性对照样品B 测试样品C 1级 霉菌生长明显 无霉菌生长 无霉菌生长 具有防霉性 2级 霉菌生长明显 无霉菌生长 霉菌生长明显，面积≤1/3 防霉性较差 3级 霉菌生长明显 无霉菌生长 霉菌生长明显，面积>1/3 无防霉性 无效重做 样品A表面无霉菌生长，或样品B表面有霉菌生长，或两个平行样品的等级之差超过1 检查时，如果测试结果达到3级，可随时停止测试。 10试验报告 试验报告应包含以下内容： a）本标准编号； b）样品名称、编号、类型、厂家（或商标）； c）试验条件； d）样品的防霉菌等级； e）试验中出现的异常现象； f）实测方法与本标准的不同之处； g）试验人员、日期。 建筑321---标准查询下载网 vwi z321. net QB/T4199-2011 附录A （规范性附录） 对照样品的制备 A.1阴性对照样品的制备 A.1.1选用生黄牛皮，按照常规制革工艺加工至皮革，加工过程所采用的化工材料均不含杀菌剂及防 霉剂成分。 A.1.2用模刀（4.10）取样，样品经40W紫外灯照射30min后密封，冷冻保存备