SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T2995—2011 总甘油测定标准试验方法 气相色谱法 Standard test method for determination of free and total glycerin in B-100 biodiesel methyl esters by gas chromatography 2011-09-09发布 2012-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2995—2011 言 前 本标准根据GB/T1.1一2009的规则进行编写。 本标准等同采用美国试验与材料协会标准ASTMD6584-08《B-100生物柴油脂肪酸甲酯中游离甘 油和总甘油测定标准试验方法气相色谱法》。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：张海峰、李丹、谭智毅、叶庆赞、吴序锋、郑建国。 I SN/T2995—2011 B-100生物柴油脂肪酸甲酯中游离甘油和 总甘油测定标准试验方法 气相色谱法 1范围 本标准规定了B-100生物柴油脂肪酸甲酯中游离甘油和总甘油测定的标准试验方法。 本标准适用于用气相色谱法定量测定B-100 夜甲酯中的游离甘油和总甘油的含量。 本标准测定范围为：游离甘油为0.005%~0.05%（质量分数）：总甘油为0.05%~0.5%（质量分 数）。本标准不适用于从月桂油（如椰子油和棕榈仁油）中得到的植物油脂肪酸甲酯。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 2. 1 生物柴油biodiesel 由植物油或动物脂肪衍生化得到长链脂肪酸甲酯组成的燃料 2.2 甘油酯bondedglycerin 由甘油单酯、甘油二酯、甘油三酯分子 组成的甘油酯。 2.3 总甘油totalglycerin 游离甘油和甘油酯的总量。 3方法提要 用N-甲基-N-三甲基硅烷基-三氟乙酰胺（MSTFA）对样品进行硅烷化后，用气相色谱法进行检测。 采用两种内标物和四种标准物质进行校正。甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯分别用单油酸甘油酯、二油 酸甘油酯和三油酸甘油酯的线性校准曲线计算。对于单甘油酯、二甘油酯和三甘油酯采用平均换算因 子来计算样品中的甘油酯含量。 4仪器设备 4.1 色谱系统一气相色谱法的术语和相互关系 4.1.1气相色谱（GC) 系统具备表1所示的操作条件。 1 SN/T2995—2011 表1操作条件 进样口 冷柱头进样口 进样量 1 μL 柱升温程序 初始温度 50 ℃ 保持1min 速率1 15℃/min至180℃ 速率2 7℃/min至230℃ 速率3 30℃/min至380℃ 保持10min 检测器 类型 FID 温度 380℃ 载气 类型 氢气或氨气 50 ℃ 3 mL/min 注：由于测试结果取决于所用仪器，因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用表内参数已被证明对测试是合 适的。 4.1.2 色谱柱 5%苯基二甲基聚硅氧烷交联键合柱。温度上限至少为400℃。柱长10m或15m，内径0.32mm， 膜厚0.1μm或等同或更好者。建议在进样口和分析柱之间安装一根（2～5）m长、0.53mm内径的保 留间隙，这样可以使用自动进样器，且可延长柱子的使用寿命。 4.2电子数据采集系统 4.2.1推荐采用具有可提供色谱数据的实时绘图和数显积分仪或计算机。通过计算机或电子积分仪 计算峰面积和保留时间。 4.2.2仪器设备必须具有多级内标校正计算功能，并能够计算每组数据的相关系数（r²），用内标法进 行数据处理。 5试剂和材料 5.1试剂纯度：本测试均采用分析纯试剂。其他级别的试剂在查明具有足够纯度、不影响检测准确性 的情况下允许使用。 5.2正庚烷。 5.3N-甲基-N-(硅三甲基)三氟乙酰胺(MSTFA）。 5.4吡啶。 5.5载气：高纯度氢气、氨气或氮气。 推荐采用分子筛或其他合适的吸附剂除去水分、氧气和烃类，采 用合适的压力以保证稳定的载气流速。 5.6微升注射器：100μL和250μL。 2 SN/T2995—2011 5.7 螺旋盖样品瓶：带有聚四氟乙烯（PTFE)瓶盖垫片，10mL。 6 仪器设备的准备 按照制造商或供应商的说明书安装仪器并老化柱子。将柱子出口连接到FID检测器入口，对系统 进行检漏。若发现漏气，拧紧或更换装置后重新检漏。 7 标准贮备液和标准工作溶液 7.1标准贮备液的配制 按表2所示配制标准溶液。将标准品直接称至容量瓶中（精确到0.1mg），用吡啶定容。配好的标 准贮备液在冰箱中保存。 表2 贮备液 化合物 CAS号 质量/mg 容量瓶规格/mL 甘油 56-81-5 25 50 9-十八烯酸(z)-2,3-二羟基丙酯（单油酸甘油酯） 111-03-5 50 10 1,3-二(9-十八烯酸)甘油酯（二油酸甘油酯） 2465-32-9 50 10 (z)-9-十八烯酸-1,2,3-丙三基酯（三油酸甘油酯） 122-32-7 50 10 (S)-(-)-1,2,4-丁三醇（内标物1) 42890-76-6 25 25 三奚酸甘油酯（内标物2) 621-71-6 80 10 7. 2 2标准工作溶液 用微量注射器分别移取一定量的标准贮备液于10mL样品瓶中，配制表3所示的5个浓度的混合 标准工作溶液。向每个标准工作溶液中加入100μL的MSTFA，盖上瓶盖摇匀，在室温下静置 15min～20min。最后向每个样品瓶中加入约8mL正庚烷，摇匀。 表3 标准溶液 单位为微升 标准溶液序号 1 2 3 4 5 甘油储备液 10 30 50 70 100 单油酸甘油酯储备液 20 50 100 150 200 二油酸甘油酯储备液 10 20 70 100 *0 三油酸甘油酯储备液 10 20 40 70 100 丁三醇储备液 100 100 100 100 100 三癸酸甘油酯储备液 100 100 100 100 100 7.3 色谱分析 若采用自动进样器，取-一定量的标准工作溶液至玻璃样品瓶中并密封，进行分析。 7. 4 标准化 标准工作溶液的测定与样品的分析条件相同。在冷柱头进样口注人1uL混合标准工作溶液后进 3 SN/T2995—2011 行分析，得到色谱图和峰积分报告。按照式（1）和式（2）计算每种物质的响应值之比（rsp）和质量之比 (amt,). rsp,=(A/A,) (1) 式中： rsp 物质的响应值之比； A 标准物质的峰面积； A, 内标的峰面积。 amt,=(W,/W,) -(2) 式中： amt 物质的质量之比； W. 标准物质的质量，单位为毫克（mg） W. 内标的质量，单位为毫克（mg） 绘制每种标准物质的校正曲线，以响应值之比对质量之比作曲 7.5按照式（3）计算每种标准物质的相关系数 值应大于或等于0.99。若线性达不到上述要求， 重新校正或检查仪器的参数设置和硬件配置 ·(3) 式中： ..(4) ..(5) 式中： 标准物质的相关系数； 一质量比数据； 所有质量比数据的平均 Y一一对应的响应值之比数据： 一所有响应值之比数据 y 的平 7.6校正因子 每种标准物质的校正因子按式（6）进行计算： 会-[（]+ ...(6) 式中： A, 标准物质的峰面积： A 内标物的峰面积； Wx 标准物质的质量，单位为毫克（mg）； W. 内标物的质量，单位为毫克（mg）； ax 校正曲线方程的斜率； bx 校正曲线方程的截距。 8 样品分析步骤 8.1按表1中的参数设置仪器操作条件。称取样品约100mg（精确到0.1mg）至10mL样品瓶中，分 20min。样品瓶中加人约8mL正庚烷，摇匀。 4 SN/T2995—2011 8.2在冷柱头进样口注入1L经衍生化反应后的样液进行分析，得到色谱图和峰积分报告。 8.3色谱峰的定性确证：通过与标准物质的保留时间对照进行确证。通过相对保留时间来确证其他 峰，如表4所示。根据碳数（CN)不同，单甘油酯、二甘油酯、三甘油酯得到分离。 表4 相对保留时间 化合物 采用的内标物 相对保留时间 甘油 1 0.85 (S)-(-)-12,4-丁三醇（内标物1) 1.00 2 0.76 2 0.83~0.86 1.00 2 1.05~1.09 2 1.16~1.31 寸间（RRT）分别为0.76，0.83~ 单甘油酯的计算。 置不同的缘故，峰与峰之间不能 为二甘油酯。三甘油酯同样按 碳数分离，用RRT为1.16~1.31的峰（CN为52，54 进行计算。 9计算和报告 9.1对色谱峰进行确证后，计算甘油、油单酯、甘油 二酯和甘油三脂的峰面积。用校正曲线进行计 算，如下： 游离甘油质量分数的计算 G-(W)[()-6) ..(7) W 式中： G 样品中游离甘油的质量分 A. 甘油的峰面积； Aial 内标物1的峰面积； Wal 内标物1的质量，单位为毫克（mg）； W 样品的质量，单位为毫克（mg）； ag 校正曲线方程的斜率： be 校正曲线方程的截距。 b) 各种甘油酯质量分数的计算： Gl;= ..(8) 式中： Gl 样品中各种甘油酯的质量百分数，%； Agll 各种甘油酯的峰面积； 5