SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2995—2011 总甘油测定标准试验方法 气相色谱法 Standard test method for determination of free and total glycerin in B-100 biodiesel methyl esters by gas chromatography 2011-09-09发布 2012-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2995—2011 前言 本标准根据GB/T1.1一2009的规则进行编写。 本标准等同采用美国试验与材料协会标准ASTMD6584-08《B-100 油和总甘油测定标准试验方法 去气相色谱法》。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局 本标准主要起草人：张海峰、李丹、谭智毅、叶庆赞、吴序锋、郑建国。 SN/T2995—2011 B-100生物柴油脂肪酸甲酯中游离甘油和 总甘油测定标准试验方法 气相色谱法 范围 本标准规定了B-100生物柴油脂肪酸甲酯中游离甘油和总甘油测定的标准试验方法。 本标准适用于用气相色谱法定量测定B-100生物柴油脂肪酸甲酯中的游离甘油和总甘油的含量。 本标准测定范围为：游离甘油为0.005%~0.05%（质量分数）：总甘油为0.05%~0.5%（质量分 数）。本标准不适用于从月桂油（如椰子油和棕榈仁油）中得到的植物油脂肪酸甲酯。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 2. 1 生物柴油biodiesel 由植物油或动物脂肪衍生化得到长链脂肪酸甲酯组成的燃料 2. 2 甘油酯bondedglycerin 由甘油单酯、甘油二酯、甘油三 组成的甘油酯 2. 3 总甘油total glycerin 游离甘油和甘油酯的总量。 3方法提要 用N-甲基-N-三甲基硅烷基-三氟乙酰胺（MSTFA）对样品进行硅烷化后.用气相色谱法进行检测。 采用两种内标物和四种标准物质进行校正。甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯分别用单油酸甘油酯、二油 酸甘油酯和三油酸甘油酯的线性校准曲线计算。对于单甘油酯、二甘油酯和三甘油酯采用平均换算因 子来计算样品中的甘油酯含量。 4仪器设备 4.1 色谱系统一气相色谱法的术语和相互关系 4.1.1气相色谱（GC) 系统具备表1所示的操作条件。 1 SN/T2995—2011 表1操作条件 进样口 冷柱头进样口 进样量 1 μL 柱升温程序 初始温度 50℃ 保持1min 速率1 15℃/min至180℃ 速率2 7℃/min至230℃ 速率3 30℃/min至380℃ 保持10min 检测器 类型 FID 温度 380℃ 载气 类型 氢气或氢气 50 ℃ 流速 3 mL/min 注：由于测试结果取决于所用仪器，因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用表内参数已被证明对测试是合 适的。 4.1.2 色谱柱 5%苯基二甲基聚硅氧烷交联键合柱。温度上限至少为400℃。柱长10m或15m，内径0.32mm， 膜厚0.1μm或等同或更好者。建议在进样口和分析柱之间安装一根（2～5)m长、0.53mm内径的保 留间隙，这样可以使用自动进样器，且可延长柱子的使用寿命。 4.2电子数据采集系统 4.2.1推荐采用具有可提供色谱数据的实时绘图和数显积分仪或计算机。通过计算机或电子积分仪 计算峰面积和保留时间。 4.2.2仪器设备必须具有多级内标校正计算功能，并能够计算每组数据的相关系数（产），用内标法进 行数据处理。 5试剂和材料 5.1试剂纯度：本测试均采 的情况下允许使用。 5.2正庚烷。 5.3N-甲基-N-(硅三甲基）三氟乙酰胺（MSTFA）。 5.4吡啶。 5.5载气：高纯度氢气、氨气或氮气。推荐采用分子筛或其他合适的吸附剂除去水分、氧气和烃类，采 用合适的压力以保证稳定的载气流速。 5.6微升注射器：100μL和250μL。 2 SN/T2995—2011 5.7 螺旋盖样品瓶：带有聚四氟乙烯（PTFE）瓶盖垫片，10mL。 6 仪器设备的准备 按照制造商或供应商的说明书安装仪器并老化柱子。 进行检漏。 7 标准贮备液和标准工作溶液 7. 1 标准贮备液的配制 按表2所示配制标准溶液。将标准品直接称至容量瓶中（精确到0.1mg），用吡啶定容。 准贮备液在冰箱中保存。 表 2 贮备液 化合物 质量/mg CAS号 容量瓶规格/mL 甘油 56-81-5 25 50 9-十八烯酸(z)-2,3-二羟基丙酯(单油酸甘油酯) 111-03-5 50 10 1,3-二(9-十八烯酸)甘油酯（二油酸甘油酯） 2465-32-9 50 10 (z)-9-十八烯酸-1,2,3-丙三基酯（三油酸甘油酯） 122-32-7 10 (S)-(-)-1,2,4-丁三醇(内标物1) 42890-76-6 25 25 三突酸甘油酯（内标物2) 621-71-6 80 10 7. 2 标准工作溶液 用微量注射器分别移取一定量的标准贮备液于10mL样品瓶中，配制表3所示的5个浓度的混合 标准工作溶液。 15 min 表3 标准溶液 单位为微升 标准溶液序号 1 2 4 5 甘油储备液 10 30 50 70 100 单油酸甘油酯储备液 20 50 100 150 200 二油酸甘油酯储备液 10 20 40 70 100 三油酸甘油酯储备液 10 20 40 70 100 丁三醇储备液 100 100 100 100 100 三癸酸甘油酯储备液 100 100 100 100 100 7. 3 色谱分析 若采用自动进样器，取一定量的标准工作溶液至玻璃样品瓶中并密封，进行分析。 7. 4 标准化 标准工作溶液的测定与样品的分析条件相同。在 SN/T2995—2011 行分析.得到色谱图和峰积分报告。按照式（1）和式（2）计算每种物质的响应值之比（rsp）和质量之比 (ami,). rsp,=(A;/A,) (1) 式中： rsp, A, 标准物质的峰面积； A, 内标的峰面积。 amt,=(W/w.) (2) 式中： amt, W. 标准物质的质量，单位为毫克（mg）： W. 内标的质量，单位为毫克（mg） 绘制每种标准物质的校正曲线，以 量之比作曲 7.5按照式（3）计算每种标准物质的相关系数 值应大于 等于0.99。若线性达不到上述要求， 重新校正或检查仪器的参数设置和硬件配置 (3) 式中； （4) .(5) 式中： 标准物质的相关系数； X,一质量比数据： 元一所有质量比数据的平均 Y——对应的响应值之比数据 3——所有响应值之比数据的平均！ 7.6校正因子 每种标准物质的校正因子按式（6）进行计算： -(6) 式中： Ax 标准物质的峰面积； A 内标物的峰面积： W.- 一标准物质的质量，单位为毫克（mg）； W一内标物的质量，单位为毫克（mg）； 校正曲线方程的斜率； ax 校正曲线方程的截距。 样品分析步骠 8.1 按表1中的参数设置仪器操作条件。称取样品约100mg（精确到0.1mg）至10ml.样品瓶中，分 别用微升注射器准确加人100ul.各种内标和MSTFA，盖上瓶盖并摇勾，在室温下静置15min～ 20min。样品瓶中加人约8mL正庚烷，摇匀。 SN/T2995—2011 8.2在冷柱头进样口注人1μl经衍生化反应后的样液进行分析得到色谱图和峰积分报告。 8.3色谱峰的定性确证：通过与标准物质的保留时间对照进行确证。通过相对保留时间来确证其他 峰，如表4所示。根据碳数（CN）不同.单甘油酯、二甘油酯、三甘油酯得到分离。 表4 相对保留时间 化合物 采用的内标物 相对保留时间 甘油 1 0.85 (S)-(-)-1,2.4-丁三醇（内标物1) 1.00 单棕榈酸甘油器 2 0.76 单油酸甘油酯、单亚油酸甘油酯、单亚麻酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯 2 0.83~0.86 三葵酸甘油酯 （内标物2） 1. 00 二脂肪酸甘油酯 2 1.05~1.09 三脂肪酸甘油酯 2 1.16~1.31 8.4单甘油酯由四个峰组成，相对于内标物三突酸甘油酯的相对保留时间（RRT）分别为0.76.0.83 0.86。碳数为24的一组甲酯峰，会出现在RRT为0.80~0.82，不计 人单甘油酯的计算。 8.5二甘油酯同样根据碳数不同进行分离，但由于分子中存在双键信 应置不同的缘故，峰与峰之间不能 达到基线分离.RRT从1.05~1.09的 ）个峰（CN为3436和38）为二甘油酯。三甘油酯同样按 碳数分离.用RRT为1.16~1.31的蜂（CN为52，54 进行计算。 计算和报告 9 9.1对色谱峰进行确证后，计算甘油、封油单脂、甘油 二酯和甘油三酯的峰面积。用校正曲线进行计 算，如下： a) 游离甘油质量分数的计算 G- ..(7) W 式中： G 样品中游离甘油的质量分 A. 甘油的峰面积： Aul 内标物1的蜂面积： Wa 内标物1的质量，单位为毫克（mg）； W 样品的质量，单位为毫克（mg）； 校正曲线方程的斜率； be 校正曲线方程的截距。 b) 各种甘油酯质量分数的计算： U Gl,= .-(8 ) 式中： Gl, 样品中各种甘油酯的质量百分数.%： Agli 各种甘油酯的峰面积，