SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2795—2011 进出口食品中二硝基苯胺类农药残留量 的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of dinitroaniline pesticide residues in foodstuffs for import and export- LC-MS/MS method 2011-02-25发布 2011-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2795—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：张建莹、谢丽琪、范放、叶刚、沈金灿、肖来龙、林黎、康海宁、欧阳珊。 SN/T2795—2011 进出口食品中二硝基苯胺类农药残留量 的检测方法液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了进出口食品中氟乐灵、二甲戊乐灵、氨磺乐灵、仲丁灵、氨基丙氟灵、氨基乙氟灵、磺乐 灵和异乐灵残留量的液相色谱-质谱7质谱测定和确证方法。 本标准适用于黄豆、大米、菠菜、生姜、苹果、西瓜、甘蓝、节瓜、茶叶、鸡蛋、猪肉和鸡肝中氟乐灵、二 甲戊乐灵、氨磺乐灵、仲丁灵、氨基丙氟灵、氨基乙氟灵、磺乐灵和异乐灵残留量的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必环可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 采用乙腈提取试样中残留的二硝基苯胺类农药，固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱检测和确 证，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2乙腈：色谱纯。 4.3正己烷：色谱纯。 4.4甲酸。 4.5丙酮：优级纯。 4.6氯化钠。 4.7乙腈十水溶液（1+1，含0.05%甲酸，体积分数）：量取500mL乙腈（4.2)与0.5mL甲酸（4.4)于 1L容量瓶中，用水定容至1L。 4.8正已烷-丙酮溶液（2+8，体积分数）：取20mL正已烷（4.3），加人80mL丙酮（4.5），混匀。 4.9标准物质：氟乐灵（CAS编号1582-09-8）、二甲戊乐灵（CAS编号40487-42-1）、氨磺乐灵（CAS编 号19044-88-3）、仲丁灵（CAS编号33629-47-9）、氨基丙氟灵（CAS编号29091-2)-2）、氨基乙氟灵（CAS 编号29091-05-2）、磺乐灵（CAS编号4726-14-1）、异乐灵（CAS编号33820-53-0），纯度均大于99%（相 关化学信息参见附录A）。 4.10标准储备溶液：分别准确称取适量的各种二硝基苯胺类标准物质（4.9），用丙酮（4.5)配制成浓度 为1000mg/L的标准储备溶液，-18℃以下避光保存。 4.11混合中间标准溶液：吸取适量的各标准储备溶液（4.10），用甲醇（4.1）稀释，氟乐灵浓度为 SN/T 2795—2011 5.0mg/L，其他7种药物浓度为1.0mg/L的混合中间标准溶液，0℃~4℃避光保存， 4.12基质混合标准工作溶液：吸取适量的混合中间标准溶液（4.11），用空白样品提取液配成氟乐灵浓 度为0μg/L、50.0μg/L、100μg/L、250μg/L、500μg/1.和1000μg/L，其他7种农药浓度为0μg/L、 10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L和200μg/L的基质混合标准工作溶液。当天配制。 4.13SupelcleanC18：6mL，500mg，或相当者。使用前用5mL乙睛活化，保持柱体混润。 4.14Envi-carb固相萃取柱：3mL，0.25g，或相当者。使用前用3mL正已烷-丙酮溶液（4.8)活化，保 持柱体湿润。 4.15OasisHLB，6mL，200mg，或相当者。使用前用5mL乙睛活化，保持柱体湿润。 4.16微孔滤膜：0.22μm，有机相型。 5仪器和设备 5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI)。 5.2E 固相萃取装置。 5.3氮吹浓缩仪。 5.4均质器。 5.5旋涡混匀器。 5.6离心机：转速不低于5000r/min。 5.7 分析天平：感量0.1mg和0.01g。 6试样制备与保存 6.1制备与保存 6.1.1黄豆、茶叶和大米 取代表性样品约500g，用粉碎机充分粉碎，混匀。试样均分为两份，装人洁净容器，密封，并标明标 记。常温下保存。 6.1.2蔬菜、水果、鸡蛋、猪肉及鸡肝 取代表性样品约500g，将其可食用部分（不可用水洗）切碎后，用捣碎机将样品加.工成浆状，混匀。 试样均分为两份，装人洁净容器，密封，并标明标记。于18℃以下冷冻存放。 6.2制样要求 在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 7分析步骤 7.1提取 7.1.1黄豆、大米、茶叶、鸡蛋、猪肉及鸡肝 称取约5g（精确至0.01g）样品于50mL具塞离心管中，加人5mL水，混匀后放置1h。然后加人 移至25mL容量瓶中。残渣再用10mL乙腈溶液重复提取一次，合并提取液，并用乙睛定容至25mL。 取5.0mL提取液于15mL离心管中，40℃以下用氮气吹至2.0mL左右，待净化。 2 SN/T2795—2011 7.1.2蔬菜、水果 高速均质提取3min，于5000r/min离心5min，将乙睛层转移至25mL容量瓶中。残渣再用10mL 乙腈重复提取一次，合并提取液，并用乙腈定容至25mL。 7.2净化 7.2.1黄豆、大米、猪肉 吸取全部浓缩提取液（7.1.1)于SupelcleanCis固相萃取柱（4.13）中，以约1.5mL/min的流速使 样液全部通过固相萃取柱，再用5mL乙腈淋洗并抽干固相萃取柱，收集全部流出液于1.5mL离心管 中，40℃以下用氮气吹至近干，残渣用乙腈十水溶液（47)定容至1.0mL。旋涡混勾后，过微孔滤膜 （4.16），供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.2.2蔬菜、水果 精确吸取5mL提取液（7.1.2)5.0mL于15mL离心管中，40℃以下用氮气吹至近干，用2.0mL 正已烷-丙酮溶液（4.8)溶解，转入Envi-carb固相萃取柱（4.14）中，以约1.5mL/min的流速使样液全 部通过固相萃取柱，再用3mL正已烷-丙酮溶液（4.8）淋洗并抽干固相萃取柱，收集全部流出液于 15mL离心管中，40℃以下用氮气吹至近干，残渣用乙腈十水溶液（4.7)定容至1.0mL。旋涡混匀后， 过微孔滤膜供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.2.3茶叶、鸡蛋及鸡肝 吸取茶叶、鸡蛋及鸡肝浓缩提取液(7.1.1)于OasisHI.B固相萃取柱（4.15)中，以约1.5mL/min 的流速使样液全部通过固相萃取柱，再用5mL乙腈淋洗并抽干固相萃取柱，收集全部流出液于15mL 离心管中，40℃以下用氮气吹至近干，用2.0mL正已烷-丙酮溶液（4.8)溶解，转入Envi-carb固相萃取 柱中，以约1.5mL/min的流速使样液全部通过固相萃取柱，再用3mL正已烷-丙酮溶液（4.8）淋洗并 抽干固相萃取柱，收集全部流出液于15mL离心管中，40℃以下用氮气吹至近干，残渣用乙腈十水溶液 （4.7)定容至1.0mL。旋涡混匀后，过微孔滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 7.3.1.1色谱柱：Cls色谱柱，50mm×2.1mm（内径），1.7μm，或相当者。 2柱温：40℃。 7.3.1.2 7.3.1.3 进样量：10μL。 7. 3. 1. 4 流动相、流速及梯度洗脱条件见表1。 表1流动相、流速及梯度洗脱条件 时间 流速 0.05%甲酸-5mmol/L乙酸胺-水溶液 甲醇 min mL/min % % 0 0.30 50 50 5, 0 0. 30 20 80 8.0 0. 30 0 100 9. 5 0.30 50 50 3 SN/T 2795---2011 7.3.2质谱条件 7.3.2.1离子化模式：电喷雾离子源。 7.3.2.2扫描方式：正离子扫描。 7.3.2.3检测方式：多反应监测(MRM)。 7.3.2.4分辨率：单位分辨率。 7.3.2.5其他参考质谱条件：参见附录B。 7.3.3液相色谱-串联质谱测定 7.3.3.1定性测定 每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间， 与基质标准溶液的保留时间偏差在去2.5%之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基 质混合标准工作溶液中对应的定性离字的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为 样品中存在对应的待测物。 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 ~20 10 >2 允许的最大偏差/% ±20 ..25 #30 ±50 7.3.3.2定量测定 在仪器最佳工作条件下，对基质混合标工作溶液进样，以峰面积为纵坐标，基质混合标准工作溶 液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准土作曲綫对样品进行定盘》样品溶液中待测物的响应值均 应在测定方法的线性范围内，如果超出线性响应范围，应用空自基质溶液进行适当稀释。在上述液相色 谱-质谱条件下，二硝基苯胺类农药的保留时间分刷为：氨磺乐灵（3.21min）、磺乐灵（3.41min）、氨基 乙氟灵（4.06min）、氨基丙氟灵(5.20