SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3699—2013 出口植物源食品中4种噻唑类杀菌剂残 留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of four thiazole fungicide residues in food of plant origin for export-HPLC-MS/MS method 2013-11-06发布 2014-06-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 刮涂屋查真伪 SN/T 3699—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则编写。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任， 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、中华人民 共和国厦门出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：陈波、靳保辉、肖锋、谢丽琪、陈沛金、徐敦明、周昱 I SN/T3699—2013 出口植物源食品中4种噻唑类杀菌剂残 留量的测定液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了植物源性食品中土菌灵、噻唑菌胺、辛噻酮和苯噻硫氰的液相色谱-质谱/质谱测定和 确证方法。 本标准适用于大豆、玉米、小麦、葡萄、西瓜、菜心、茶叶和洋葱中土菌灵、噻唑菌胺、辛噻酮和苯噻硫 氰的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 采用乙腈提取试样中残留的噻唑类杀菌剂，固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱检测和确证，外 标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的1级水。 4.1甲醇：高效液相色谱级。 4.2 乙睛：高效液相色谱级。 甲苯：高效液相色谱级。 甲酸：高效液相色谱级。 4.5 氯化钠。 4.6 醋酸铵：高纯试剂，99.999%。 4.7 乙腈十水溶液（3+十2，体积比）：量取60mL乙腈（4.2），加人40mL水，混匀。 4.8 乙腈-甲苯溶液（3十1，体积比）：量取150mL乙（4.2），加人50mL甲苯（4.3），混匀。 4.95mmol/L醋酸铵水溶液（含0.05%甲酸）：称取0.385g醋酸铵（4.6），加人0.5mL甲酸（4.4），用 水溶解并定容至1L，混匀。 4.10标准物质：土菌灵、辛噻酮和苯噻硫氰，含量98%以上；噻唑菌胺浓度为10mg/L（相关化学信息 见附录A中表A.1)。 4.11标准储备溶液：分别准确称取适量的土菌灵、辛噻酮和苯噻硫氰标准物质（4.10），用乙腈（4.2）配 制成浓度为1000mg/L的标准储备溶液；噻唑菌胺为甲醇溶液配制的10mg/L的标准溶液，一18℃以 下避光保存。 4.12混合中间标准溶液：吸取适量的各标准储备溶液（4.11），用乙睛（4.2)稀释，配制成5.0mg/L的混 1 SN/T3699—2013 合中间标准溶液，一18℃以下避光保存。 相应基质的空白样品提取液配成合适浓度的基质混合标准工作溶液，使用前配制。 甲苯溶液（4.8)活化，保持柱体湿润。 4.15C18固相萃取柱：6mL，500mg，或相当者。使用前用5mL乙腈（4.2)活化，保持柱体湿润。 4.16 微孔滤膜：0.22um，有机相型 5 仪器和设备 5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI)。 5.2 固相萃取装置。 5.3 氮吹浓缩仪。 5.4均质器：转速不低于10000r/min。 5.5 涡旋混匀器。 5.6 离心机：转速不低于5000r/min。 5.7 分析天平：感量0.1mg和0.001g。 5.8 带刻度聚丙烯离心管：15mL和50mL，具塞。 试样制备与保存 6.1通则 在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 6.2茶叶、小麦、大豆和玉米 取代表性样品约500g，用粉碎机充分粉碎，混匀。试样均分为2份，装人洁净容器，密封，并标明标 记。常温下保存。 6.3西瓜、葡萄、菜心和洋葱 取代表性样品约500g，将其可食用部分（不可用水洗）切碎后，用捣碎机将样品加工成浆状，混匀。 试样均分为2份，装入洁净容器，密封，并标明标记。于一18℃以下冷冻存放。 7分析步骤 7.1提取 7.1.1茶叶、小麦、大豆和玉米 称取约5g（精确至0.001g）样品于50mL具塞离心管中，加入15mL乙（4.2），10000r/min均 质提取1min，于5000r/min离心5min，将乙腈层转移至另一50mL具塞离心管中。残渣再用15mL 乙腈（4.2)重复均质提取1次，合并提取液，定容至30mL。转移10mL乙睛提取液至15mL离心管 中，45℃吹氮至约2mL，再转移5mL乙腈提取液至同一离心管中，45℃吹氮至约2mL，待净化。 2 SN/T3699—2013 7.1.2西瓜、葡萄、菜心和洋葱 10000r/min均质提取1min，加人3g氯化钠（4.5），涡旋混匀，使氯化钠充分溶解，于5000r/min离 心5min。转移上层乙睛提取液10mL至15mL离心管中，45℃吹氮至约2mL，待净化。 7.2净化 7.2.1大豆 将待净化液全部转入C18固相萃取柱（4.15），以约1.5mL/min的流速使样液通过固相萃取柱，再 用3mL乙腈（4.2)洗脱并抽干固相萃取柱，收集全部流出液于15mL离心管中，45℃吹氮至近干，用乙 睛溶液（4.7）定容至2mL，过微孔滤膜（4.16），供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.2.2玉米 将待净化液全部转入C18固相萃取柱（4.15），以约1.5mL/min的流速使样液通过固相萃取柱，再 用3mL乙睛（4.2)洗脱并抽干固相萃取柱，收集全部流出液于15mL离心管中，45℃吹氮至近干，用乙 腈溶液（4.7）定容至2mL，4℃冷藏保存1h后，过微孔滤膜（4.16），供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.2.3西瓜、葡萄、菜心、小麦、茶叶和洋葱 将待净化液全部转人复合固相萃取柱（4.14)，以约1.5mL/min的流速使样液通过固相萃取柱，再 用5mL乙腈-甲苯溶液（4.8）洗脱并抽干固相萃取柱，收集全部流出液于15mL离心管中，45℃吹氮至 近干，加人2mL乙（4.2），涡旋混匀后再吹氮至近干，用乙腈溶液（4.7）定容至2mL，过微孔滤膜 （4.16），供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.3测定 7.3.1 液相色谱条件 液相色谱条件如下： a)1 色谱柱：Cis色谱柱，100mmX2.0mm（内径），3μm，或相当者； b) 柱温：30℃； c) 进样量：10μL； d) 流动相、流速及梯度洗脱条件见表1。 表1液相色谱梯度洗脱条件 时间 流速 5mmol/L醋酸铵水溶液（含0.05%甲酸） 甲醇 min mL/min % % 0 40 60 3.0 40 60 5.0 5 S6 0.30 9.0 5 95 9.1 40 60 16.0 40 60 3 SN/T3699—2013 7.3.2质谱条件 质谱条件如下： a）离子化模式：电喷雾离子源； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测（MRM）； d）分辨率：单位分辨率； 其他参考质谱条件参见附录B中表B.1。 7.3.3液相色谱-串联质谱测定 7.3.3.1定性测定 质标准溶液的保留时间偏差在士2.5%之内；样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合 标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中 存在对应的待测物。 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% ≤10% 允许的最大偏差 ±20% ±25% ±30% %0S干 7.3.3.2定量测定 在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样，以峰面积为纵坐标、基质混合标准工作溶 液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线计算进样溶液中待测组分浓度。样品溶液中待测 物的响应值均应在测定方法的线性范围内，如果超出线性响应范围，应用空白基质溶液进行适当稀释。 在上述液相色谱-质谱条件下，噻唑类杀菌剂的保留时间分别为：噻唑菌胺3.1min、苯噻硫氰5.0min、 辛噻酮8.1min和土菌灵8.4min。标准品的液相色谱-质谱/质谱多反应监测色谱图参见附录C中的 图C.1。 7.3.4空白实验 除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。 8结果计算和表述 按式(1)计算试样中各噻唑类杀菌剂的残留量，计算结果应扣除空白值： (1) X1000 m 式中： X 样品中噻唑类杀菌剂残留，单位为微克每千克（ug/kg）； 通过标准工作曲线计算所得进样溶液中噻唑类杀菌剂浓度，单位为微克每升（ug/L）； Ci V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； 稀释倍数； n 4 SN/T3699—2013 最终样液代表的试样质量，单位为克（g）。 m 方法的测定低限和回收率 9 9.1 测定低限 本方法的测定低限均为10.0μg/kg。 9.2 回收率 样品的添加浓度及回收率的数据参见附录D中表D.1。 5