SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3524--2013 化学品 鱼类生殖毒性试验方法 Chemicals-Fish assay for the reproduction toxicology 2013-03-01发布 2013-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3524—2013 目 次 前言 引言 IV 1 范围 2 术语和定义 3 方法局限性说明 测试原理 4 测试可接受性标准 5 6 方法描述 6.1 仪器 6. 2 水 6.3 测试溶液 6. 4 鱼的饲养 6. 5 预暴露和鱼的选择 测试设计 7 7. 1 般说明 7. 2 测试浓度的选择 8试验过程 8.1 受试鱼的选择与称量 8.2 暴露条件 8.2.1 时间 8.2.2 饲养 8.2.3 灯光和温度 8.3 分析检测和测量的频率 8. 4 观察 8.4.1 一般说明 8.4.2 存活率 8.4.3 行为和表观 8. 4. 4 繁殖力 8.4.5 鱼的人道处死 8.4.6 第二性特征的观察 8.4.7 卵黄蛋白原（VTG） 8.4.8 性腺组织病理学评价 数据和报告 9 9.1 采用方差分析（ANOVA)对生物标志物响应进行评价 9.2 测试结果报告 10对于测试结果的解释和接受 SN/T3524—2013 附录A（资料性附录） 卵黄蛋白原分析的样品收集的推荐程序 10 19 附录B（资料性附录） 检测特定内分泌活性物质对黑头呆鱼和青鳍的第二 性特征的评估 附录C（资料性附录） 鱼类内分泌筛选测试实验条件 24 附录D（资料性附录） 斑马鱼和黑头呆鱼的产卵基板· 26 附录E（资料性附录） 可接受的稀释水的一些化学特性 28 附录F（资料性附录） 卵黄蛋白原加强样品和分析方法间参比标准 附录G（资料性附录） 统计分析流程 30 31 参考文献 SN/T 3524—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准参考了经济合作与发展组织（OrganizationforEconomicCooperationandDevelopment， OECD)TG229：《鱼类短期生殖毒性测试》（FishShortTermReproductionAssay）（英文版）。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：程艳、崔媛、陈会明、谢文平、马萍。 SN/T3524—2013 引 創言 环境水平的化学物质与内分泌系统相互作用，危害人类和野生动物，故需要发展和验证鱼类检测内 分泌干扰活性物质的技术和方法。 以筛选和检测潜在的内分泌干扰物。 鱼类短期生殖毒性测试经过 本测试指南 蛋白原和 家组完成[6]，其他的 协调机构（the 的特定机制，因 的反应 为受试动物拥 在其生命 本测试方法描 周期中暴露于化： 和雌性鱼 上对一种或两种生物标志 黄蛋白原和第二性特征 二性特征只能在 天都要监测定量繁殖力；性腺需要保留，可能通 黑头呆鱼和日本青上测试。 过病理组织学来评估测试动物的生殖健康，也为其他测试终点提供更有力的证据 此生物测试作为特定内分泌干扰模式的体内筛选测试，其应用可在“OECD内分泌干扰化学物质 测试和评价框架”中看到。在这个框架内，鱼类短期生殖测试提议为等级4，作为体内试验提供有关多 种内分泌干扰机制的数据。 SN/T3524—2013 化学品鱼类生殖毒性试验方法 1范围 本标准规定了化学品对鱼类生殖毒性试验方法的方法局限性说明、测试原理、测试可接受性标准、 方法描述、测试设计、试验过程、数据和报告、对于测试结果的解释和接受。 本标准适用于化学品鱼类生殖毒性测试。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 承载率loadingrate 单位体积水的鱼的湿重。 2.2 承载密度stockingdensity 单位体积水的鱼的数目。 2. 3 卵黄蛋白原vitellogenin，VTG 卵黄蛋白原是一种蛋黄蛋白的磷脂糖蛋申前体 一般产生于所有卵生动物的性成熟雌体中。 2. 4 最大耐受浓度 maximumtolerated concentrafion,MTc 最大耐受浓度，代表大约LCso的10%。 2.5 HPG轴hypothalamic-pituitary-gonadal axis 下丘脑-垂体-性腺轴。 3方法局限性说明 3.1卵黄蛋白原（Vitellogenin，VTG)通常受循环的内源性雌激素的刺激，由雌性卵生脊椎动物的肝脏 产生。卵黄蛋白原是卵黄蛋白的前提，一旦在肝脏中产生，由血流进入卵巢，并被发育中的雌性配子吸 收并改变。卵黄蛋白原在未成熟的雌性和雄性鱼的血浆中几乎检测不到，因为它们缺乏足够的循环雌 激素，但是在受外源性的雌激素的刺激下，肝脏能够合成并分泌VTG。 3.2VTG的测量能够检测不同雌激素作用模式的化学物质，对雌激素类化学物质的检测，有可能通过 测量雄性鱼的卵黄蛋白原的产生，并已在科学同行文献中有大量报道[8]。也有证明表示卵黄蛋白原的 抑制转化内源性雄激素为天然雌激素17β-雌二醇的芳香酶，会引起卵黄蛋白原水平的降低，这一点被用 来检测具有芳香酶抑制性质的化学物质([11]和[12])。已经建立了卵黄蛋白原与雌激素/芳香酶抑制 的响应的生物相关性，并已被大量文献所报道。然而，在雌性体内VTG的产生有可能也会被系统毒性 和非内分泌干扰毒性作用模型所影响，例如肝毒性。 1