ICS 73.080 Q64 备案号：30024-2011 JC 中华人民共和国建材行业标准 JC/T542—2010 代替JC/T542—1994 滑石粉微生物学检验方法 Method of microbiology examination for talc powder 2010-11-22发布 2011-03-01实施 中华人民共和国工业和信息化部发布 JC/T542-2010 前言 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。 本标准代替JC/T542—1994《滑石粉微生物学检验方法》，与JC/T542—1994相比，主要技术变化 如下： 在3.3供试液的制备方法中，将“生理盐水”修改为“pH7.0无菌氯化钠-蛋白陈缓冲液”； 将“霉菌和酵母菌数测定方法”修改为“真菌总数测定方法”（见第5章，1994年版的第5章）； 将“绿脓杆菌检验方法”修改为“铜绿假单胞菌检验方法"（见第7章，1994年版的第7章）； 将“绿脓杆菌试验”修改为“铜绿假单胞菌素试验”（见7.5.6，1994年版的7.5.6)； 将附录中“虎红琼脂培养基的成分和制备方法”修改为“沙保罗琼脂培养基的成分和制备方法” （见附录A.2，1994年版的附录A.2）； 将附录中甘露醇发酵培养基成分中的“甘露醇”修改为“D-甘露醇”（见附录A.16，1994年版的 A.16); 将附录中多个培养基制法中的pH值，由单一定值修改为有偏差范围的取值（见附录A.3、 A.9、A.10、A.11、A.12、A.13、A.16,1994年版的附录A中）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中国建筑材料联合会提出。 本标准由全国非金属矿产品及制品标准化技术委员会（SAC/TC406)归口。 本标准起草单位：威阳非金属矿研究设计院。 本标准主要起草人：潘宇清、潘昱成。 本标准1994年首次发布，本版是第一次修订。 JC/T542—2010 滑石粉微生物学检验方法 1范围 本标准规定了滑石粉微生物学检验中的术语和定义、检验通则、细菌总数测定方法、真菌总数测定 方法、大肠菌群和粪大肠菌群检验方法、铜绿假单胞菌检验方法、金黄色葡萄球菌检验方法。 本标准适用于医药、食品及化妆品用滑石粉中的微生物学检验。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 菌落总数aerobicbacterialcount 指样品经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等）， 所得1g或1mL检样中所含菌落总数。所得结果，只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需 氧性菌落总数。 [《化妆品卫生规范》（2002版）中化妆品微生物检验方法，菌落总数定义2］ 3检验通则 3.1取样及注意事项 3.1.1每批滑石粉应随机抽两个或两个以上包装完好的单位，试样量不少于10g，以使检验结果具有 代表性。 3.1.2凡异常的供试品，则选取有疑问的样品进行检验。凡包装开启即可见霉变的；无需检验则可判 为不合格。 3.1.3在检验前，应严格保持包装的原有状态，并放在阴凉干燥处，防止因微生物再度繁殖而影响检验 结果。凡原包装已启开，则不在其中取样。 3.1.4样品的稀释，须在1h2h内完成，以防止微生物繁殖或死亡。 3.1.5微生物检验全过程，必须在无菌操作条件下进行。凡直接与样品接触的用具，均应事先灭菌并 保持无菌。 3.1.6从样品检出致病菌的报告发出之日起，该菌菌种需保存个月备查，阴性样品可及时处理。 3.2供试液制备的材料和仪器 3.2.1 天平：感量不大于0.1g。 3.2.2. 三角烧瓶：300mL或500mL。 3.2.33 玻璃珠：05mm。 3.2.4 量筒：100mL。 3.2.5 电炉。 3.2.6高压消毒锅。 3.2.7滤纸。 3.3供试液的制备方法 准确称取10.0g试样，放人装有90mL稀释剂（pH7.0无菌氯化钠-蛋白陈缓冲液）和十几个玻璃 珠的三角烧瓶中，经振摇制成1：10的试液备用。取用时必须混匀。 3.4阳性菌株对照试验 1 JC/T542—2010 3.4.1每次检验，应同时进行阳性对照生长试验。 3.4.2对照试验加人的已知活菌量，每批样品应控制在50个～100个范围之内。 3.4.3常用的阳性对照菌株，卫生部检定所编号：大肠杆菌44102、绿脓杆菌10104、金黄色葡萄球菌 26003等。 3.4.4做阳性菌株对照试验时，应注意安全，严格防止对照菌污染样品和环境。 4细菌总数测定方法 4.1.方法原理 每种细菌有其一定的生理特性，生长时对营养、温度、时间、pH值、需氧性等的要求均不相同。在实 际培养中，不可能同时满足所有细菌的要求，因此只能测定在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧及兼性厌 氧的细菌菌落总数。 4.2材料和仪器 4.2.1恒温培养箱。 4.2.2电热恒温水锅。 4.2.3移液管：1mL及10mL。 4.2.4平：@90mm。 4.2.5试管：18mmX200mm。 4.2.6试管架。 4.2.7放大镜。 4.3培养基和试剂 4.3.1 营养琼脂培养基。 4.3.2生理盐水：定量分装于试管（每支试管内9mL）。 4.4试验程序 1：10试液 做几个连续倍数的稀释液 选择2个～3个连续稀释度，各加1mL于相应平皿 平皿加人12mL~15mL营养琼脂 36℃±1℃￥48h±2h 菌落计数 4.5试验步骤 4.5.1试液稀释及培养 4.5.1.1用1mL移液管取1：10试液1mL，沿管壁加入盛有9mL盐水的试管（管的尖端不要触及液 面），振摇试管，做成1：100均匀稀释液。 4.5.1.2另取1mL移液管，按4.5.1.1操作制10倍递增稀释液，每次更换一支移液管，稀释至103~ 10-5倍。 4.5.1.3选择2个3个连续稀释度，用吸取该稀释度的移液管，移1mL试液于平Ⅲ内，每个稀释度 做2个～3个平皿。 4.5.1.4将预先放在45℃土1℃恒温水浴中的营养琼脂培养基，加入平血约15mL，并转动平血混合均 匀。同时再将营养琼脂15mL倾斜加入装有1mL不含试样的稀释剂平皿中，作为空白对照。 4.5.1.5琼脂凝固后，翻转平皿，置36℃士1℃培养箱内，保持48h土2h后取出，进行菌落计数。平皿 2 JC/T542—2010 菌落数乘以稀释倍数，即为每克样品所含菌落总数。 4.5.2计数方法 4.5.2.1用肉眼观察，必要时用放大镜。 4.5.2.2求出同一稀释度各平血的菌落平均值。若平Ⅲ中有连成大片的菌落生长，该平血不宜计数。 若片状菌落不到平皿的一半，其余一半的分布又很均匀，可将此半个计数后乘以.2，代表全皿。 4.5.2.3选择平均菌落数在30～300之间的平皿，作为菌落总数的测定范围。当只有一个稀释度符合 此范围，即以该平血菌落数乘以稀释倍数（见表1中例1)。 4.5.2.4有两个稀释度，平均菌落数均在30～300之间，则应求出两者菌落总数之比值决定。小于或 等于2，报告其平均数；大于2，则报告其中较小的菌落数（见表1中例2、例3)。 4.5.2.5所有稀释度，其平均菌落数均大于300个，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数（见表 1中例4)。 4.5.2.6所有稀释度的平均菌落数均小于30个，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数（见表1 中例5)。 4.5.2.7所有稀释度的平均菌数落均不在30个～300个之间，则以最接近30或300的乘以稀释倍数 （见表1中例6）。 4.5.2.8所有稀释度均无菌落生长，为每克小于10CFU。 4.5.3报告 菌落数在100以内，按实数值报告；大于100，采用二位有效数字乘以10的指数来表示，有效数字后 面的数值用修约法处理。以CFU/g为计量单位。（CFU：菌落形成单位） 表1菌落计数结果及报告方法 不同稀释度的平均菌落数 两稀释度 菌落总数 报告方式 例次 10-1 10-2 10-3 菌数之比 CFU/g CFU/g 1 365 164 20 16 400 1. 6×104 2.760 2 295. 46 1. 6 38 000 3.8X104 3 2890 270 60 2. 2 27 100 2.7X104 4 不可计 4 650 513 513000 5.1X105 5 27 11 5 270 2.7X102 6 不可计 305 12 30 500 3.1X104 5真菌总数测定方法 5.1方法原理 真菌具有明显的细胞核，多数需氧，在偏酸含糖的培养基中，在较高湿度25℃～28℃的温度条件下 生产良好。本方法根据这些生物特性，进行培养和菌落计数。 5.2材料和仪器 5.2.1恒温培养箱。 5.2.2振荡器。 5.2.3电热恒温水浴锅。 5.2.4试管：15mmX150mm。 5.2.5 移液管：1mL和10mL。 5.2.6 平皿：90mm。 3 JC/T542-—2010 5.2.7生物显微镜。 5.2.8载玻片、盖玻片。 5.3培养基和试剂 5.3.1 沙保罗琼脂培养基。 5.3.2 蒸馏水：定量分装于试管（每支试管9mL）。 5.4试验程序 1：10试液 ★振荡30min 做几个连续倍数的稀释液 个 选择3个连续稀释度，各加1mL于相应平Ⅲ 每皿加入12mL~15mL培养基 25℃~28℃￥72h 菌落计数 5.5试验步骤 5.5.1试液稀释及培养 5.5.1.1将1：10试液置振荡器中，振荡30min，使真菌孢子充分散开。 5.5.1.2按4.5.1.1、4.5.1.2中规定的稀释方法，将试液稀释至10-1～10-4 5.5.1.3根