ICS11.120.01 CCSC27 团 体 标 准 T/TPPA0010-2024 中药注射剂（真溶液型）中高分子杂质的 测定高效分子排阻色谱-蒸发光散射检 测法 DeterminationofmacromolecularimpuritiesintraditionalChinese medicineinjections(water-solubleinjections)highperformance molecularexclusionchromatography-evaporativelight-scattering detector 2024-05-31发布 2024-05-31实施 天津市医药行业协会发布 全国团体标准信息平台 T/TPPA0010-2024 目次 前言.............................................................................I 1范围...............................................................................1 2规范性引用文件.....................................................................1 3术语和定义.........................................................................1 4检测原理...........................................................................2 5材料与设备.........................................................................2 5.1材料...........................................................................2 5.2设备...........................................................................2 6实验方法...........................................................................2 6.1溶液配制.......................................................................2 6.2测定法.........................................................................3 7数据分析及判定.....................................................................4 7.1系统适用性.....................................................................4 7.2专属性.........................................................................4 7.3灵敏度.........................................................................4 7.4数据处理.......................................................................4 7.5判定...........................................................................5 全国团体标准信息平台 T/TPPA0010-2024 I前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本标准的某些内容可能涉及专利。本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由天津天士力之骄药业有限公司提出。 本标准由天津市医药行业协会归口。 本标准起草单位：天津天士力之骄药业有限公司、天津市药品检验研究院、天津市中药注射剂安全 性评价企业重点实验室、现代中药创制全国重点实验室、甘肃之骄制药有限公司、天士力医药集团股份 有限公司、河南天地药业股份有限公司、现代中医药海河实验室、天津市药品检验研究院北辰药品检验 所。 本标准主要起草人：李莉、张磊、岳洪水、鞠爱春、周军、孙伟、林梅、李洪英、胡洪艳、张俊华、 周水平、何毅、白晓丽、张彦明、冯玉波、孙孝梅、郑文科、王杰、李春、贺超凡、王亚虎、苏小琴、 尚献召、李兵、刘朋。 全国团体标准信息平台 T/TPPA0010-2024 1中药注射剂（真溶液型）中高分子杂质的测定 高效分子排阻色谱-蒸发光散射检测法 1范围 本文件规定了高效分子排阻色谱-蒸发光散射检测法（HPMEC-ELSD）测定中药注射剂中高分子杂质 的方法。本文件中的中药注射剂为不含乳状液型、混悬型和非水溶性注射液的中药注射剂。 本文件适用于中药注射剂中高分子杂质的检测。当某些中药注射剂不适于使用高效分子排阻色谱法 蒸发光散射检测法检测高分子杂质，可以采用其他方法测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 标准。 GB/T33087仪器分析用高纯水规格及试验方法 《中华人民共和国药典》（2020年版） 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 分子排阻色谱法molecularexclusionchromatography；MEC 又称尺寸排阻色谱法(sizeexclusionchromatography，SEC)；凝胶色谱法(gelchromatography)。 固定相为多孔性凝胶，根据样品分子体积(即根据分子流体动力学直径或体积)大小进行分离的一种液相 色谱法。体积大的分子先流出，体积小的分子后流出。 3.2 高分子macromolecule 又称大分子。在结构上由许多个实际或概念上的低分子量分子结构作为重复单元组成的高分子量分 子。其分子量通常在10000Da以上。 3.3 截留分子量molecularweightcutoff；MWCO 对有孔材料孔径大小的一种描述。能自由通过某种有孔材料的分子中最大分子的分子量即为该材料 全国团体标准信息平台 T/TPPA0010-2024 2的截留分子量。大于截留分子量的分子，被材料截留；小于截留分子量的分子，则可自由通过。截留分 子量是凝胶过滤介质、半透膜、超滤膜等材料的重要技术参数。 4检测原理 采用超滤离心技术使溶液中的高分子物质和小分子物质进行分离，并使高分子物质得到富集。富集 后的溶液注入液相色谱仪，依据分子排阻色谱法原理，大于所有孔径的分子不能进入填充剂颗粒内部， 在色谱过程中不被保留，最早被流动相洗脱至柱外，表现为保留时间较短；小于所有孔径的分子能自由 进入填充剂表面的所有孔径，在色谱柱中滞留时间较长，表现为保留时间较长；其余分子则按分子大小 依次被洗脱。采用最小二乘法（或者可采用其他数学模型）以对照品峰分子量的对数值（lgMp）与对应 的保留时间（tR）制得标准曲线的回归方程；利用供试品的保留时间和标准曲线的回归方程计算其分子 量，或由标准曲线的回归方程计算分子量为10000Da物质的其保留时间，通过分子量和保留时间的对 比判定是否检出高分子杂质。 5材料与设备 5.1材料 5.1.1耗材 a）超滤离心管（MWCO3000Da）。 b）凝胶色谱柱。 5.1.2试剂试药 a）甲酸：色谱纯。 b）乙酸铵：分析纯。 c）线性结构对照品：如聚乙二醇1000、聚乙二醇4000、聚乙二醇7000、聚乙二醇10000、聚乙二 醇13000、聚乙二醇20000等，其峰分子量范围为1000Da～20000Da。 d）支链结构对照品：如右旋糖酐D1、右旋糖酐D2、右旋糖酐D3、右旋糖酐D4、右旋糖酐D5、右旋 糖酐D6等，其峰分子量范围为2700Da～64650Da。 e）其他类别对照品：至少包含5个分子量水平（核糖核酸酶A、胰岛素、胸腺肽α1、生长抑素、 细胞色素C、溶菌酶、脱辅基肌红蛋白、卵清蛋白、转铁蛋白），其峰分子量范围应涵盖分子量10000Da。 5.2设备 电子分析天平、高效液相色谱仪、蒸发光散射检测器、离心机等。 6实验方法 6.1溶液配制 全国团体标准信息平台 T/TPPA0010-2024 36.1.1流动相的制备 取甲酸适量，加水制成浓度为0.02%的溶液；或取乙酸铵适量，加水制成浓度为0.77%的溶液。 6.1.2对照品线性溶液的制备 分别称取各分子量对照品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1mL中约含1mg的溶液，即得。 6.1.3空白溶液的制备 取水10mL至超滤离心管上管中，离心至超滤离心管上管截留液体体积约为0.75mL，用可调节移液 器转移至2mL量瓶中，再向超滤离心管上管加入适量水，用可调节移液器吹打混匀后转移至量瓶中，加 水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，