ICS11.120 CCSC27 T/LNBA001—2025 脐带间充质干细胞制剂放行技术规范 Technicalspecificationforreleaseofumbilicalcordmesenchymalstemcell preparation 2025-08-20发布 2025-09-20实施 辽宁省生物技术协会  发布团体标准 全国团体标准信息平台 T/LNBA001—2025 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由辽宁省生物技术协会提出并归口。 本文件起草单位：辽宁省生物技术协会、辽宁医学诊疗科技研发中心有限公司、拜澳泰克（沈阳） 生物医学集团有限公司、辽宁盛京干细胞技术有限公司、沈阳盛京生物细胞研发中心有限公司、沈阳中 安再生医学研发中心有限公司、中嘉康源（辽宁）生物技术有限公司、辽宁省标准化研究院。 本文件主要起草人：鞠险峰、魏敏杰、常方照、常月红、樊淼、郭川、宫世强、金大棋、焦雪、康 悦、刘明妍、李文良、梁玉、马世良、单国峰、孙婷、隋欣、孙璇、王建华、王暘、夏远博、尹瀛浩、 赵峰、张佳鹏、张学敏、肇宇、刘晓硕、于钟怡、薛志文、姚月、阎雪姣。 全国团体标准信息平台 T/LNBA001—2025 1脐带间充质干细胞制剂放行技术规范 1范围 本文件规定了脐带间充质干细胞制剂放行的术语和定义、要求、检验方法、检验规则和包装、贮存、 运输。 本文件适用于脐带间充质干细胞制剂的放行、检验。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T39729细胞纯度测定通用要求流式细胞测定法 GB/T39730细胞计数通用要求流式细胞测定法 WS273―2018梅毒诊断 WS293―2019艾滋病和艾滋病病毒感染诊断 《中华人民共和国药典》 《全国临床检验操作规程》 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 脐带间充质干细胞umbilicalcordmesenchymalstemcells 从人类脐带结缔组织中分离得到的，具有多向分化潜力，非造血干细胞的成体干细胞。 [来源：《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则（试行）》，有修改] 3.2 干细胞制剂stemcell-basedmedicinalproducts 用于治疗疾病或改善健康状况的、以不同类型干细胞为主要成分、符合相应质量及安全标准，且具 有明确生物学效应的细胞制剂。 [来源：《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则（试行）》] 4缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CD：细胞膜表面分化抗原簇（ClusterofDifferentiation） HBV：乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus） HCV：丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus） HIV：人类免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus） HLA-DR：人类白细胞抗原DR等位基因（HumanLeukocyteAntigenDR） TP：梅毒螺旋体（TreponemaPallidum） 5要求 5.1干细胞质量属性 5.1.1基本生物学属性 全国团体标准信息平台 T/LNBA001—2025 2干细胞基本生物学属性要求见表 1 。 表1干细胞基本生物学属性 项目 要求 细胞形态 细胞贴壁生长，亮度高，伸展呈长梭形，形态均一 细胞计数/（个/kga） ≥1×106 细胞活率/（%） ＞95 a受体体重。 5.1.2微生物安全性 干细胞微生物安全性要求见表 2 。 表2干细胞微生物安全性 项目 要求 细菌 阴性 真菌 阴性 支原体 阴性 内毒素/（EU/mL） ≤0.5 病毒 （TP、HCV、HBV、HIV、新冠病毒）阴性 5.1.3生物学有效性 干细胞生物学有效性要求见表 3 。 表3干细胞生物学有效性 项目 要求 细胞表型干性标志物（CD73、CD90和CD105） 阳性率/（%）＞95 分化标志物（CD14、CD19、CD34、CD45 和HLA-DR）阳性率/（%）＜2 三系分化能力第十代的脐带间充质干细胞，在体外条件培养基诱导培养下，具备分 化成脂肪、骨和软骨细胞的能力。 5.2干细胞制剂配制 干细胞制剂配制应符合附录A的规定。 6检验方法 6.1基本生物学属性 6.1.1细胞形态 贴壁培养条件下，使用倒置显微镜，在物镜 10 倍或 20 倍下观察。 6.1.2细胞计数 按照GB/T39730规定的方法检测。 6.1.3细胞活率 按照《全国临床检验操作规程》白细胞计数的方法检测。 6.2微生物安全性 6.2.1细菌 全国团体标准信息平台 T/LNBA001—2025 3按照《中华人民共和国药典》四部，通则 1101 无菌检测法检测。 6.2.2真菌 按照《中华人民共和国药典》四部，通则 1101 无菌检测法检测。 6.2.3支原体 按照《中华人民共和国药典》四部，通则 3301 支原体检查法检测。 6.2.4内毒素 按照《中华人民共和国药典》四部，通则 1143 细菌内毒素检查法检测。 6.2.5病毒 6.2.5.1TP 按照 WS 273-2018 附录A.3检测。 6.2.5.2HCV 按照《全国临床检验操作规程》核酸法检测。 6.2.5.3HBV 按照《全国临床检验操作规程》核酸法检测。 6.2.5.4HIV 按照 WS 293-2019 附录B.3检测。 6.2.5.5新冠病毒 参照《全国临床检验操作规程》病毒核酸法检测。 6.3生物学有效性 6.3.1细胞表型 参照GB/T39729规定的方法检测。 6.3.2三系分化能力 参照附录 B 的方法检测。 7检验规则 7.1放行检验 7.1.1产品出厂前，应由制备机构的质量检验部门按本标准规定对每个干细胞制剂产品进行检验，检 验合格，方可出厂。 7.1.2检验项目：干细胞基本生物学属性、微生物安全性和细胞表型。 7.2型式检验 7.2.1检验项目：5.1全部要求。 7.2.2型式检验至少每年进行一次。有下列情况之一者，亦应进行： ——原辅材料有较大变化时； ——更换设备或停产后，重新恢复生产时； ——出厂检验与上次型式检验结果有较大差异时； ——国家市场监督检验机构提出抽检要求时。 全国团体标准信息平台 T/LNBA001—2025 47.3判定规则 任何一项指标检验不合格时，判该产品为不合格。 8包装、贮存、运输 8.1应选择对干细胞制剂质量属性无影响的包装材料和容器。 8.2干细胞制剂应贮存于 -150 ℃及以下的气相或液相液氮中。 8.3干细胞制剂运输和转运容器的材质应防漏、抗震、抗压力变化。 8.4运输和转运容器应定期进行验证，并保持其处于有效运行状态。 8.5干细胞制剂在不同运输时间条件下应符合以下要求： ——2 h内常温运输； ——2 h以上冷藏（2 ℃～8 ℃）运输； ——最长运输时间不得超过24 h。 全国团体标准信息平台 T/LNBA001—2025 5AABB 附录A （规范性） 干细胞制剂配制要求 A.1用于配制干细胞制剂的中间细胞产品，应以每平方厘米接种 3×104个细胞为基础核算代数，代数 不少于四代，不超过六代。 A.2干细胞制剂重悬液应严格按照经批准的配方进行配制和灌装，其中白蛋白含量不得低于2 %。 全国团体标准信息平台 T/LNBA001—2025 6C 附录B （资料性） 三系分化能力检验方法 B.1成脂分化检验（油红O染色法） B.1.1仪器和设备 B.1.1.1二氧化碳培养箱。 B.1.1.2显微镜。 B.1.1.3血球计数板。 B.1.1.4离心机。 B.1.2试剂 B.1.2.1磷酸盐缓冲液：pH 7.4。 B.1.2.2消化酶。 B.1.2.3间质干细胞完全培养基。 B.1.2.4成脂诱导培养基。 B.1.2.5油红O染色液试剂盒。 B.1.3检测步骤 B.1.3.1细胞消化 将干细胞置于37 ℃，5 %CO2培养箱中培养，至细胞融合度达到 80 % ～ 90 %。采用消化酶，根 据消化酶说明书消化细胞。收集消化后的干细胞使用血球计数板及显微镜进行细胞计数，按照 1×104个 /cm2的细胞密度接种在事先包被基质胶的 T 25 培养瓶中，加入适量完全培养基，继续培养至细胞融合 度 100 %。 B.1.3.2细胞诱导 吸除培养瓶中的干细胞完全培养基，按照成脂诱导培养基说明书的使用方法及诱导时间，诱导分化 干细胞。 B.1.3.3脂滴染色 根据油红O染色液试剂盒说明书进行脂滴染色。 B.1.4结果分析 显微镜下可见橙红色的大小不等的脂滴。 B.2成骨分化检验（茜素红S染色法） B.2.1仪器和设备 B.2.1.1二氧化碳培养箱。 B.2.1.2血球计数板。 B.2.1.3显微镜。 B.2.1.4离心机 B.2.2试剂 B.2.2.1磷酸盐缓冲液：pH 7.4。 B.2.2.2消化酶。 全国团体标准信息平台