全国团体标准信息平台 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国食品科学技术学会提出并归口。 本文件起草单位:南开大学、虹摹生物科技(上海)有限公司、内蒙古伊利实业集团股份有限公司、 菲仕兰乳制品(上海)有限公司、北京三元食品股份有限公司、科汉森(北京)贸易有限公司、内蒙古蒙牛 乳业(集团)股份有限公司、深圳市中科朗健生物技术有限公司、苏州一兮生物技术有限公司、山东恒鲁 生物科技有限公司。 本文件主要起草人:王硕、王津、姚斐、张影、刘丽君、陈静、王文华、陈瑾萱、陈历俊、杨宝雨、马磊、 赵静波、赵艳荣、田芳、卢诗瑶、葛绍勇、刘振云、化宿南、方诩、刘奉鑫、刘爽。 ⅠT/CIFST 025—2024 全国团体标准信息平台 食品中6种母乳低聚糖的测定 离子色谱法 1 范围 本文件规定了食品中6种母乳低聚糖的离子色谱测定方法。 本文件适用于婴儿配方食品、较大婴儿配方食品、幼儿配方食品和特殊医学用途婴儿配方食品中 2'-岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖、乳糖-N-新四糖、3'-唾液酸乳糖和6'-唾液酸乳糖含量 的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样用水稀释,酶解去除低聚果糖,过滤后,用离子色谱-脉冲安培检测法测定,外标法定量。试样 标签中成分无低聚果糖时,试样用水稀释,无需酶解,过滤后,用离子色谱-脉冲安培检测法测定,外标 法定量。 4 试剂与材料 除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 氢氧化钠溶液[50%(质量分数)]:色谱纯。 4.1.2 无水乙酸钠(CH3COONa)。 4.1.3 氮气(N2):纯度≥99.9%。 4.1.4 果聚糖酶(fructanase):≥2 000 U/mL。 4.2 试剂配制 4.2.1 氢氧化钠溶液(0.5 mol/L):称取50%氢氧化钠溶液(见4.1.1)80 g(精确至0.01 g),用水稀释 至2 L,混匀。通入氮气保护,密封保存。室温下可放置1个月。 4.2.2 乙酸钠溶液(0.3 mol/L):称取无水乙酸钠(见4.1.2)49.25 g(精确至0.01 g,用水溶解并稀释 至2 L,混匀,过0.45 μm膜。通入氮气保护,密封保存。室温下可放置1个月。 4.2.3 果聚糖酶溶液(2 000 U/mL):称取适量果聚糖酶溶解于水中,混匀,配制成2 000 U/mL果聚 糖酶溶液。该溶液于-18 ℃可放置3个月。 1T/CIFST 025—2024 全国团体标准信息平台 4.3 标准品 4.3.1 2'-岩藻糖基乳糖(C18H32O15):纯度≥90%,CAS:41263-94-9。 4.3.2 3-岩藻糖基乳糖(C18H32O15):纯度≥95%,CAS:41312-47-4。 4.3.3 乳糖-N-四糖(C26H45NO21)纯度≥90%,CAS:14116-68-8。 4.3.4 乳糖-N-新四糖(C26H45NO21):纯度≥95%,CAS:13007-32-4。 4.3.5 3'-唾液酸乳糖钠盐(C23H38NO19Na):纯度≥98%,CAS:35890-38-1。 4.3.6 6'-唾液酸乳糖钠盐(C23H38NO19Na):纯度≥98%,CAS:35890-39-2。 4.4 标准溶液配制 4.4.1 标准储备溶液:按纯度折算后分别准确称取适量(精确至0.1 mg)标准品(见4.3),用水配制成 浓度为2 500 mg/L的单标准品储备溶液。标准储备溶液于-80 ℃可放置8个月,于-18 ℃可放置 3个月。 4.4.2 混合标准中间溶液:分别准确吸取2'-岩藻糖基乳糖标准储备溶液 5.00 mL、3-岩藻糖基乳糖标 准储备溶液 5.00 mL、乳糖-N-四糖标准储备溶液 2.50 mL、乳糖-N-新四糖标准储备溶液 2.50 mL、 3'-唾液酸乳糖标准储备溶液 2.50 mL和6'-唾液酸乳糖标准储备溶液 2.50 mL于25 mL容量瓶中,用 水定容,混匀。混合标准中间溶液中目标分析物的浓度分别为2'-岩藻糖基乳糖 500 mg/L、3-岩藻糖基 乳糖500 mg/L、乳糖-N-四糖250 mg/L、乳糖-N-新四糖 250 mg/L、3'-唾液酸乳糖250 mg/L和6'-唾 液酸乳糖250 mg/L。临用前配制,室温放置。 4.4.3 混合标准系列工作溶液:分别准确吸取混合标准中间溶液(见4.4.2)0.10 mL、0.20 mL、 1.00 mL、2.00 mL、6.00 mL、10.00 mL于6个50 mL容量瓶,用水定容,混匀,得到2'-岩藻糖基乳糖 浓度为1 mg/L、2 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、60 mg/L、100 mg/L,3-岩藻糖基乳糖浓度为1 mg/L、 2 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、60 mg/L、100 mg/L,乳糖-N-四糖浓度为0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L、 10 mg/L、30 mg/L、50 mg/L,乳糖-N-新四糖浓度为0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、30 mg/L、 50 mg/L,3'-唾液酸乳糖浓度为0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、30 mg/L、50 mg/L和6'-唾液 酸乳糖浓度为0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、30 mg/L、50 mg/L的混合标准系列工作溶液。 混合标准系列工作溶液于-18 ℃可放置3个月,于2 ℃~8 ℃可放置5 d。 注:如果目标分析物的标准品中含有其他目标分析物,则该目标分析物的标准中间溶液和标准系列工作溶液应单 独配制。 4.5 材料 4.5.1 滤膜:0.45 μm。 4.5.2 烧杯:10 mL、500 mL和2 L。 4.5.3 离心管:50 mL。 4.5.4 容量瓶:10 mL、25 mL、50 mL和2 L。 4.5.5 注射型过滤器:尼龙,0.2 μm。 5 仪器和设备 5.1 离子色谱:配有三元及以上梯度泵、脉冲安培检测器。 5.2 分析天平:感量0.01 g、0.001 g和0.1 mg。 5.3 恒温水浴锅:40 ℃±2 ℃。 5.4 磁力搅拌器。 2T/CIFST 025—2024 全国团体标准信息平台 5.5 涡旋混合器。 5.6 氮吹仪。 5.7 超纯水仪。 6 分析步骤 6.1 试样制备 6.1.1 标签中标注添加低聚果糖或未知成分的试样 6.1.1.1 固态试样:准确称取试样25 g(m1,精确至0.01 g),加水200 g(m2,精确至0.01 g),磁力搅 拌15 min。准确称取上述液体1 g(m3,精确至0.001 g)于25 mL(V)容量瓶中,加入果聚糖酶溶液 15 μL(每1 g固态复溶试样至少需要果聚糖酶30 U),用水定容,混匀并转移至50 mL离心管中,加盖, 置于恒温水浴锅中40 ℃酶解30 min,酶解后取出并静置至室温,注射型过滤器过滤后进样分析。 6.1.1.2 液态试样:准确称取试样1 g(m3,精确至0.001 g)于25 mL(V)容量瓶中,加入果聚糖酶溶 液15 μL(每1 g液态试样至少需要果聚糖酶30 U),用水定容,混匀并转移至50 mL离心管中,加盖, 置于恒温水浴锅中40 ℃酶解30 min,酶解后取出并静置至室温,注射型过滤器过滤后进样分析。 6.1.2 标签中标注无低聚果糖的试样 6.1.2.1 固态试样:准确称取试样25 g(m1,精确至0.01 g),加水200 g(m2,精确至0.01 g),磁力搅 拌15 min。准确称取上述液体1 g(m3,精确至0.001 g)于25 mL(V)容量瓶中,用水定容,混匀,注射 型过滤器过滤后进样分析。 6.1.2.2 液态试样:准确称取试样1 g(m3,精确至0.001 g)于25 mL(V)容量瓶中,用水定容,混匀, 注射型过滤器过滤后进样分析。 6.2 仪器参考条件 6.2.1 离子色谱参考条件 6.2.1.1 色谱柱:CarboPacTM PA1预柱或等效柱(4 mm × 50 mm,粒径10.0 μm)、CarboPacTM PA1 分离柱或等效柱(4 mm × 250 mm,粒径10.0 μm)。 6.2.1.2 柱温:20 ℃。 6.2.1.3 流速:1 mL/min。 6.2.1.4 进样量:5 μL。 6.2.1.5 流动相:A相为水,B相为0.5 mol/L氢氧化钠溶液,C相为0.3 mol/L乙酸钠溶液。离子色 谱梯度洗脱条件见表1。 表1 离子色谱梯度洗脱条件 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 流动相C/% 曲线类