2 0 2 5 0 4 2 7 发 布 － － 2 0 2 5 0 8 0 1 － － 实 施 水 产 养 殖 环 境 （ 水 体 、 底 泥 ） 中 地 西 泮 及 其 代 谢 物 的 测 定 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 法 5 0 中 华 人 民 共 和 国 水 产 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 1 5 0 C C S B 9 4 5 3 — 2 0 2 5 D e t e r m i n a t i o n o f d i a z e p a m a n d i t s m e t e b o l i t i e s i n w a t e r a n d s e d i m e n t f r o m a q u a c u l t u r e e n v i r o n m e n t s b y l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y - t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y m e t h o d S C ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布SC/T９４５３—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出. 本文件由全国水产标准化技术委员会渔业资源分技术委员会(SAC/TC１５６/SC１０)归口. 本文件起草单位:中国水产科学研究院南海水产研究所、浙江省水产技术推广总站、广东中检达元检 测技术有限公司、中国水产科学研究院黄海水产研究所、广东达元绿洲食品安全科技股份有限公司. 本文件主要起草人:王旭峰、黄珂、柯常亮、肖雅元、李纯厚、王强、王扬、王鼎南、李诗言、梁科、朱文亮、 虞为、谭志军、孙晓杰、方武龙、周凡. ⅠSC/T９４５３—２０２５ 水产养殖环境(水体、底泥)中地西泮及其代谢物的测定 液相色谱串联质谱法 １　范围 本文件描述了液相色谱串联质谱法测定水产养殖环境(水体、底泥)中地西泮及其代谢物的原理、试 剂和材料、仪器设备、样品、试验步骤、试验数据处理和检测方法灵敏度、准确度、精密度. 本文件适用于水产养殖环境(水体、底泥)中地西泮、去甲西泮、奥沙西泮、替马西泮残留量的测定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 SC/T９１０２􀆰２　渔业生态环境监测规范　第２部分:海洋 SC/T９１０２􀆰３　渔业生态环境监测规范　第３部分:淡水 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 水样经二氯甲烷提取,NＧ丙基乙二胺净化;底泥样品冷冻干燥,经１％氨水乙酸乙酯提取,采用混合 型强阳离子交换固相萃取小柱富集与净化,液相色谱串联质谱仪测定,内标法定量. ５　试剂和材料 实验用水为符合GB/T６６８２规定的一级水. ５􀆰１　试剂 ５􀆰１􀆰１　乙腈(CH３CN):色谱纯. ５􀆰１􀆰２　二氯甲烷(CH２Cl２):分析纯. ５􀆰１􀆰３　乙酸乙酯(CH３COOC２H５):分析纯. ５􀆰１􀆰４　甲酸(HCOOH):色谱纯. ５􀆰１􀆰５　氨水(NH３􀅰H２O):分析纯,浓度＞２５％. ５􀆰１􀆰６　碳酸钠(Na２CO３):分析纯. ５􀆰２　溶液配制 ５􀆰２􀆰１　１０％Na２CO３溶液:称取１０g碳酸钠(５􀆰１􀆰６),加入实验用水溶解,稀释至１００mL,混匀. ５􀆰２􀆰２　１％氨水乙酸乙酯溶液:移取１０mL氨水(５􀆰１􀆰５),加入９９０mL乙酸乙酯(５􀆰１􀆰３)中,混匀. ５􀆰２􀆰３　１％甲酸溶液:移取１０mL甲酸(５􀆰１􀆰４),加入９９０mL实验用水中,混匀. ５􀆰２􀆰４　５％氨水乙腈溶液:移取２５mL氨水(５􀆰１􀆰５),加入４７５mL乙腈(５􀆰１􀆰１)中,混匀. ５􀆰２􀆰５　８０％乙腈溶液:移取８０mL乙腈(５􀆰１􀆰１),加入２０mL实验用水,混匀. ５􀆰２􀆰６　０􀆰１％甲酸溶液:移取１mL甲酸(５􀆰１􀆰４),加入实验用水,定容至１０００mL,混匀. ５􀆰３　标准品 １SC/T９４５３—２０２５ ５􀆰３􀆰１　地西泮、去甲西泮、奥沙西泮、替马西泮标准品,标准物质信息详见附录A. ５􀆰３􀆰２　地西泮ＧD５、去甲西泮ＧD５、奥沙西泮ＧD５、替马西泮ＧD５标准品,内标物信息详见附录A. ５􀆰４　标准溶液配制 ５􀆰４􀆰１　混合标准储备液(１００μg/mL):称取地西泮、去甲西泮、奥沙西泮和替马西泮标准品(５􀆰３􀆰１)各 １０mg,精密称定,用乙腈(５􀆰１􀆰１)溶解并定容于１００mL棕色容量瓶,配制成浓度为１００μg/mL的标准储 备液,于－２０℃以下避光保存,有效期１２个月. ５􀆰４􀆰２　混合内标储备液(１００μg/mL):称取地西泮ＧD５、去甲西泮ＧD５、奥沙西泮ＧD５、替马西泮ＧD５标准品 (５􀆰３􀆰２)各１０mg,精密称定,用乙腈(５􀆰１􀆰１)溶解并定容于１００mL棕色容量瓶,配制成浓度为１００μg/mL 的内标储备液,于－２０℃以下避光保存,有效期１２个月. ５􀆰４􀆰３　混合标准中间液(１０􀆰０μg/mL):准确移取１mL混合标准储备液(５􀆰４􀆰１),于１０mL棕色容量瓶 中,用乙腈(５􀆰１􀆰１)定容,混匀,于－２０℃以下避光保存,有效期６个月. ５􀆰４􀆰４　混合内标中间液(１０􀆰０μg/mL):准确移取１mL混合内标储备液(５􀆰４􀆰２),于１０mL棕色容量瓶 中,用乙腈(５􀆰１􀆰１)定容,混匀,于－２０℃以下避光保存,有效期６个月. ５􀆰４􀆰５　混合标准使用液(０􀆰１０μg/mL):准确移取１mL标准中间液(５􀆰４􀆰３)于１００mL棕色容量瓶中,用 乙腈(５􀆰１􀆰１)定容,混匀,于４℃以下避光保存,现用现配. ５􀆰４􀆰６　混合内标使用液(０􀆰１０μg/mL):准确移取１mL内标中间液(５􀆰４􀆰４)于１００mL棕色容量瓶中,用 乙腈(５􀆰１􀆰１)定容,混匀,于４℃以下避光保存,现用现配. ５􀆰５　材料 ５􀆰５􀆰１　玻璃纤维滤膜:孔径０􀆰４５μm. ５􀆰５􀆰２　NＧ丙基乙二胺:４０μm~６０μm粒径范围,１００̊A平均孔径. ５􀆰５􀆰３　混合型强阳离子交换固相萃取小柱:１５０mg/６mL,或者相当者. ５􀆰５􀆰４　微孔滤膜:０􀆰２２μm,有机相. ６　仪器设备 ６􀆰１　液相色谱串联质谱仪:配电喷雾离子源. ６􀆰２　冷冻干燥机. ６􀆰３　旋转蒸发仪. ６􀆰４　氮吹仪. ６􀆰５　分液漏斗. ６􀆰６　鸡心瓶. ６􀆰７　天平:感量０􀆰０１g和０􀆰０００１g. ６􀆰８　涡旋混合器. ６􀆰９　玻璃砂芯过滤装置. ６􀆰１０　低速离心机:转速≥４０００r/min. ６􀆰１１　筛网:孔径１００目. ６􀆰１２　高速离心机:转速≥１００００r/min. ６􀆰１３　固相萃取装置,带真空泵. ６􀆰１４　超声波振荡器,频率４０kHz. ７　样品 ７􀆰１　样品采集与保存 ７􀆰１􀆰１　海水样品和淡水样品分别按照SC/T９１０２􀆰２和SC/T９１０２􀆰３的要求采集和保存.水样采样量应 ２SC/T９４５３—２０２５ 不少于１L,经０􀆰４５μm玻璃纤维滤膜(５􀆰５􀆰１)过滤,置于棕色玻璃瓶中０℃~４℃密封避光保存,一周 内完成分析. ７􀆰１􀆰２　底泥样品按照SC/T９１０２􀆰２和SC/T９１０２􀆰３的要求采集和保存.样品采样量应不少于５００g,于 －２０℃以下预冷冻２４h,经冷冻干燥机(－５０℃以下,真空度＜２０Pa,冷冻干燥２４h~４８h)冻干,研磨 过１００目筛网(６􀆰１１),置于棕色广口玻璃瓶中０℃~４℃密封避光保存,一个月内完成分析. ７􀆰２　样品处理 ７􀆰２􀆰１　水样 准确移取１００mL水样(７􀆰１􀆰１),置于分液漏斗中,加入２０mL二氯甲烷(５􀆰１􀆰２)和１０mL１０％ Na２CO３溶液(５􀆰２􀆰１),再加入１００μL混合内标使用液(５􀆰４􀆰６),振荡提取５min,静置分层,收集下层清液 于鸡心瓶中.加入２０mL二氯甲烷(５􀆰１􀆰２),重复提取一次.合并提取液,４５℃旋蒸至近干,加入１mL ８０％乙腈溶液(５􀆰２􀆰５)溶解,溶液转移至２mL离心管,加入１００mgNＧ丙基乙二胺(５􀆰５􀆰２),涡旋混合 １min,于４℃１００００r/min离心１０min,取上清液过０􀆰２２μm有机相微孔滤膜(５􀆰５􀆰４),供液相色谱串联 质谱仪(６􀆰１)测定. ７􀆰２􀆰２　底泥 准确称取制备的底泥样品(７􀆰１􀆰２)２g(精确至０􀆰０１g),置于５０mL离心管中,加入１００μL混合内标 使用液(５􀆰４􀆰６)和５mL水,涡旋混合１min,静置３０min,然后加入１５mL１％氨水Ｇ乙酸乙酯溶液(５􀆰２􀆰２) 涡旋混合２min,超声提取１０min,于４℃４０００r/min离心５min,取上清液.残渣加入１０mL１％氨水Ｇ 乙酸乙酯溶液(５􀆰２􀆰２),重复提取一次.合并提取液,４５℃氮气吹干,加入５mL乙腈(５􀆰１􀆰１)和２５０μL甲 酸(５􀆰１􀆰４),涡旋混合２min,得到溶液A,备用. 用５mL乙腈(５􀆰１􀆰１)和５mL１％甲酸溶液(５􀆰２􀆰３)预活化固相萃取小柱(５􀆰５􀆰３).取溶液A过柱, 保持柱流速小于１􀆰５mL/min,再用５mL１％甲酸溶液(５􀆰２􀆰３)