2 0 2 5 0 4 2 7 发 布 － － 2 0 2 5 0 8 0 1 － － 实 施 水 产 养 殖 动 物 源 弧 菌 耐 药 性 调 查 规 范 4 1 中 华 人 民 共 和 国 水 产 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 1 5 0 C C S B 7 0 2 9 — 2 0 2 5 S p e c i f i c a t i o n f o r m o n i t o r i n g a n t i m i c r o b i a l r e s i s t a n c e i n V i b r i o s p e c i e s f r o m a q u a t i c a n i m a l s S C ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布SC/T７０２９—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出. 本文件由全国水产标准化技术委员会水产养殖病害防治分技术委员会(SAC/TC１５６/SC１１)归口. 本文件起草单位:全国水产技术推广总站、中国水产科学研究院东海水产研究所、中国水产科学研究 院珠江水产研究所、上海海洋大学. 本文件主要起草人:冯东岳、房文红、邓玉婷、宋晨光、王浩、胡鲲、赵姝、李阳、王元、李新苍. ⅠSC/T７０２９—２０２５ 水产养殖动物源弧菌耐药性调查规范 １　范围 本文件规定了水产养殖动物源弧菌耐药性调查中样品采集、样品信息采集、样品保存与运输、弧菌分 离与鉴定、菌株保存、药敏试验(肉汤稀释法)、药物敏感性判定的基本要求,描述了结果记录与统计的 方法. 本文件适用于水产养殖动物源弧菌属细菌耐药性调查. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２—２００８　分析实验室用水规格和试验方法 SC/T７０２８—２０２２　水产养殖动物细菌耐药性调查规范　通则 ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 采样点　samplesite 同一水域、同一品种、相同环境及养殖条件的养殖场为一个采样点. [来源:SC/T７０２８—２０２２,３􀆰１] ３􀆰２ 抗菌药敏感性试验　antimicrobialsusceptibilitytesting 用于测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑制或杀灭作用的试验,简称药敏试验. ３􀆰３ 最小抑菌浓度　minimalinhibitoryconcentration,MIC 在采用稀释法测定药物敏感性的试验中,能抑制细菌生长的最低抗菌药物浓度. [来源:SC/T７０２８—２０２２,３􀆰２] ３􀆰４ 折点　breakpoint 用于区分菌株为敏感、中介和耐药的MIC值. [来源:SC/T７０２８—２０２２,３􀆰３] ３􀆰５ 细菌耐药性　bacterialresistance 细菌与抗菌药物多次接触后,对药物的敏感性下降甚至消失;细菌产生耐药性后,药物的抗菌作用明 显下降. ３􀆰６ 敏感　susceptible,S 抗菌药物对菌株的MIC值等于或低于敏感折点,即菌株对该药物表现为敏感. [来源:SC/T７０２８—２０２２,３􀆰４] ３􀆰７ 中介　intermediate,I １SC/T７０２９—２０２５ 抗菌药物对菌株的MIC值在高于敏感折点且低于耐药折点的范围内,即菌株对该药物表现为中介. [来源:SC/T７０２８—２０２２,３􀆰５] ３􀆰８ 耐药　resistant,R 抗菌药物对菌株的MIC值等于或高于耐药折点,即菌株对该药物表现为耐药. [来源:SC/T７０２８—２０２２,３􀆰６] ４　样品采集 ４􀆰１　采样对象 宜采集患病的水产养殖动物,每个动物个体为一个样品. ４􀆰２　采样频次 按SC/T７０２８—２０２２中５􀆰１􀆰２的规定执行. ４􀆰３　采样数量 每个采样点采集３个以上样品,每个样品单独放入无菌密封袋. ５　样品信息采集 ５􀆰１　样品信息 每个样品袋分别贴上标签,注明采样地、样品编号、采样人和采样日期.对样品进行编号,样品编号应 包含采样动物种类、采样地、采样时间等信息. ５􀆰２　样品信息表 样品采集时应填写水产养殖动物样品采集信息表,主要包括养殖场信息、样品信息、抗菌药使用和治 疗效果等,见附录A. ６　样品保存与运输 样品采集后及时于０℃~１０℃保存,使用密封保温容器运送;样品采集后应在１２h内进行细菌 分离. ７　弧菌分离与鉴定 ７􀆰１　分离 ７􀆰１􀆰１　体表和鳃组织 用无菌水冲洗体表或鳃组织３遍,用无菌吸水纸吸去水分,用无菌接种环刮取体表或鳃少许组织样品 接种到TCBS(按附录B中的B􀆰１配制或使用商品化培养基)平板,划线法分离弧菌. ７􀆰１􀆰２　内脏组织器官 体表经７５％酒精消毒后,用无菌吸水纸吸去水分,用无菌剪刀打开腹腔(鱼类)、打开甲壳(虾和蟹)或 分开外壳(贝类),无菌操作取内脏组织器官,于无菌均质器中匀浆,用无菌接种环蘸取少许于TCBS平板 上进行划线. ７􀆰２　纯化 将接种后的TCBS平板倒置,于(２８±２)℃培养２４h~２８h.观察培养后TCBS平板上的菌落形态, 挑取平板上疑似弧菌的黄色、绿色、蓝绿色或黄绿色等优势单菌落,接种于TCBS平板上纯化培养.最终, 每个样品分离保存优势菌株１株~２株. ７􀆰３　鉴定 按附录C的规定对分离疑似弧菌菌株进行种的分类鉴定. ８　菌株保存 参考SC/T７０２８—２０２２中的５􀆰４. ２SC/T７０２９—２０２５ ９　弧菌药敏试验(肉汤稀释法) 采用肉汤稀释法对分离菌株进行药物敏感性试验,具体操作方法和步骤按附录D的要求进行. １０　药物敏感性判定 按附录E给出的药敏试验折点值作为判定标准,判定弧菌对抗菌药物是敏感(S)、中介(I)或耐药 (R). １１　结果记录与统计 记录每一受试菌的菌株编号、菌种名称及对各种抗菌药的MIC结果.在汇总统计MIC数据基础上, 计算MIC５０(抑制５０％受试菌株所需的MIC)和MIC９０(抑制９０％受试菌株所需的MIC);同时,按SC/T ７０２８—２０２２中５􀆰７的方法计算分离菌株的敏感率、中介率及耐药率. ３SC/T７０２９—２０２５ 附　录　A (资料性) 采样记录表 　 采集弧菌样品的养殖场基本信息和样品来源信息等参考表A􀆰１. 表A􀆰１　采样记录表 一、养殖场基本信息 养殖场名称 地址 联系人 电话 主要养殖品种 养殖面积 □≤１０亩　□１１~１００亩　□＞１００亩 养殖模式 养殖年限 □１年~２年　□３年~５年　□５年以上 二、样品来源信息 动物品种 养殖密度 平均规格 体长:　　　　体重: 样品数量 采样部位 样品编号a 三、抗菌药使用情况 药物名称 生产企业 使用方式 剂量 用药天 □拌饲□浸泡□注射 □拌饲□浸泡□注射 □拌饲□浸泡□注射 发病情况及发病症状: 治疗效果: 采样人(签名):　　　　　　　　　　 采样时间:　　　年　　　月　　　日 　a　样品编号应包含水产动物种类、采样地、采样时间和样品流水号等信息,水产动物种类和采样地采用字母来表示,采样 时间和样品流水号采用数字来表示. ４SC/T７０２９—２０２５ 附　录　B (规范性) TCBS配方及其配制 　 硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基(ThiosulfateCitrateBileSaltsSucroseAgar,TCBS)成分: 酵母浸膏５􀆰０g/L,蛋白胨１０􀆰０g/L,硫代硫酸钠１０􀆰０g/L,枸橼酸钠１０􀆰０g/L,牛胆粉５􀆰０g/L,蔗糖 ２０􀆰０g/L,氯化钠２５􀆰０g/L,柠檬酸铁１􀆰０g/L,溴麝香草酚蓝０􀆰０４g/L,麝香草酚蓝０􀆰０４g/L,琼脂 １５􀆰０g/L,pH８􀆰５~８􀆰７(２５􀆰０℃).称取８９􀆰０g,于１０００mL水中加热溶解,冷却至４５℃~５０℃时,倾 入无菌平皿,备用. 注:无需高压灭菌. ５