2 0 2 5 0 4 2 7 发 布 － － 2 0 2 5 0 8 0 1 － － 实 施 茄 子 根 结 线 虫 病 抗 性 鉴 定 技 术 规 程 1 6 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 0 1 C C S B 4 7 2 1 — 2 0 2 5 T e c h n i c a l c o d e o f p r a c t i c e f o r e v a l u a t i o n o f e g g p l a n t r e s i s t a n c e a g a i n s t r o o t - k n o t n e m a t o d e d i s e a s e s Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４７２１—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:中国农业科学院蔬菜花卉研究所、河南科技学院、恩施土家族苗族自治州农业科学 院、苏州市知识产权保护中心、天津农学院、青岛农业大学、杭州市农业科学研究院. 本文件主要起草人:茆振川、刘锐、田雪亮、徐东辉、杨宇红、赵建龙、凌键、李彦、谢丙炎、殷红清、李林、 张雅涵、李二峰、史倩倩、王宏. ⅠNY/T４７２１—２０２５ 茄子根结线虫病抗性鉴定技术规程 １　范围 本文件确立了茄子抗根结线虫病的抗性鉴定程序,规定了抗性鉴定方法、抗性评估等阶段的操作指 示,以及上述阶段的转换条件,描述了建立鉴定记录等追溯方法. 本文件适用于茄子品种、资源材料对根结线虫病的抗性鉴定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. NY/T３８６０　芹菜抗根结线虫鉴定技术规程 SN/T４７２３　根结线虫属(中国种类)检疫鉴定方法 ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 茄子根结线虫病　eggplantrootＧknotnematodedisease 由根结线虫(Meloidogynespp􀆰)侵染茄子根系而引起的一种线虫病害(见附录A). ３􀆰２ 抗性　diseaseresistance 植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状. [来源:NY/T３８６０—２０２１,３􀆰２] ３􀆰３ 接种体　inoculum 用于接种以引起病害的病原物. [来源:NY/T３８６０—２０２１,３􀆰４] ３􀆰４ 病情级别　diseasescale 人为定量植物个体病害发生严重程度的数值化描述. [来源:NY/T３８６０—２０２１,３􀆰５] ３􀆰５ 病情指数　diseaseindex(DI) 通过对植物部分个体发病严重程度病情级别(数值)的计算所获得的群体发病严重程度的数值化 描述. [来源:NY/T３８６０—２０２１,３􀆰６,有修改] ４　茄子抗根结线虫病抗性鉴定程序的构成 茄子根结线虫病抗性鉴定程序包括茄子育苗、接种体分离、繁殖及制备、接种时期、接种数量及接种方 法、感病对照选择、接种后管理、病情调查、抗性鉴定方法、抗性鉴定结果有效性判定、抗性鉴定结果１０个 阶段.抗性鉴定程序如图１所示. １NY/T４７２１—２０２５ 图１　茄子根结线虫病抗性鉴定程序 ５　抗性鉴定方法 ５􀆰１　茄子育苗 将壤土和沙土按体积１∶１混合均匀,１２１℃湿热灭菌２h,作为育苗基质.茄子种子用１０％次氯酸钠 (V∶V)消毒１min~２min,用灭菌水冲洗３次,在２５℃下避光催芽,当种子露白时播种,在温度２５℃~ ２８℃、土壤相对湿度７０％~８０％条件下育苗.茄子苗１叶期移栽到直径１０cm~１５cm的苗钵. ５􀆰２　接种体分离、繁殖及制备 ５􀆰２􀆰１　接种体分离 采集感染根结线虫的病株,挑取根结上的卵块,单卵块接种在高感寄主植物根部,在２５℃~２８℃、土 壤相对湿度７０％~８０％条件下培养４０d~６０d,在病根上收集并获得该种根结线虫的单雌卵块,置培养皿 内的湿润吸水纸上保湿备用.利用形态学特征、根结线虫通用与特异性引物扩增相关基因序列确定其种 类,方法引用SN/T４７２３根结线虫属检疫鉴定方法. ５􀆰２􀆰２　接种体繁殖 将根结线虫单雌卵块接种在高感寄主植物的根部,在２５℃~２８℃、土壤相对湿度７０％~８０％条件下 培养,每６０d进行一次线虫卵块的分离和接种,对根结线虫群体进行扩繁. ５􀆰２􀆰３　接种体制备 将根结线虫卵块用０􀆰５％次氯酸钠(V∶V)消毒５min~１０min,然后用灭菌水冲洗３次,卵及卵块转 移至铺有无香精双层面巾纸的筛网上,放入无菌培养皿内,加入５mL~１０mL灭菌水,使卵块与水面接 触.在２５℃~２８℃下避光孵化,收集２龄幼虫,每２d收集一次线虫,将收集的线虫置于５℃~１０℃备 用,收集时间不超过１周,制备１５００条/mL的线虫悬浮液用于接种鉴定. ５􀆰３　接种时期 ２NY/T４７２１—２０２５ 茄子苗２叶~３叶期接种. ５􀆰４　接种数量 每株接种根结线虫２龄幼虫１mL(１５００条). ５􀆰５　接种方法 接种时,在苗钵中距茄子苗主根２􀆰０cm处,在３个不同方向各打１个小孔,深度为１cm,分别接种制 备好的线虫悬浮液,合计接种线虫１５００条/株.每份鉴定材料接种应不少于１０株苗,并重复３次. ５􀆰６　感病对照选择 选择根结线虫病病情指数大于６０的茄子品种或是育种材料作为感病对照,如圆茄４６０. ５􀆰７　接种后管理 接种根结线虫后,植株在温室中正常管理,温度２５℃~２８℃、土壤相对湿度７０％~８０％. ５􀆰８　病情调查 ５􀆰８􀆰１　调查时间 接种后４０d~４５d调查. ５􀆰８􀆰２　病情级别调查方法 翻扣苗钵将茄子根系完整取出,用自来水将根系冲洗干净,检查发病情况.按照表１的规定判断单株 病情级别. 表１　单株病情严重度病情分级 病情级别 根部症状描述 ０ 所有根系上没有根结　 １ 有根结的根系比例为０％~１０％ ２ 有根结的根系比例为１１％~２５％ ３ 有根结的根系比例为２６％~５０％ ４ 有根结的根系比例为５１％~７５％ ５ 有根结的根系比例为７６％~１００％ ５􀆰８􀆰３　病情指数计算方法 病情指数(DI)按公式(１)计算. DI＝∑(s×n) N×S×１００ (１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: s———各病情级别数值; n———各病情级别病株数; N———调查总株数; S———最高病情级别数值. ５􀆰９　茄子根结线虫病抗性鉴定后材料处理 鉴定完毕后将茄子植株、残体及培养基质集中进行灭菌处理或是焚烧等无害化处理. ６　抗性评估 ６􀆰１　抗性鉴定方法 抗性水平评价分为５个级别,按照表２的要求评价其抗病性. 表２　茄子对根结线虫病抗性水平划分 病情指数(DI) 抗性水平 DI＝０ 免疫(IM) ０＜DI≤１０ 高抗(HR) ３NY/T４７２１—２０２５ 表２(续) 病情指数(DI) 抗性水平 １０＜DI≤３０ 抗病(R) ３０＜DI≤６０ 感病(S) DI＞６０ 高感(HS) ６􀆰２　抗性鉴定结果有效性判定 当感病对照的平均病情指数大于６０时,该次抗病性鉴定结果判定为有效. ６􀆰３　抗病性鉴定结果 计算病情指数(DI),按照抗病性评价水平划分确定该鉴定材料对根结线虫病的抗性水平,见附录B. ４NY/T４７２１—２０２５ 附　录　A (资料性) 根　结　线　虫 A􀆰１　学名和形态描述 A􀆰１􀆰１　学名 根结线虫(Meloidogynespp􀆰). A􀆰１􀆰２　形态描述 根结线虫雌雄异形,雌成虫梨形,埋藏于寄主组织内,大小(４４０~１３００)μm×(３２５~７００)μm.食道 垫刃形,中食道球发达.雄成虫线状,尾端稍圆,大小(７００~１９００)μm×(３０~３６)μm;２龄幼虫呈细长蠕 虫状,体长３４０μm~４６０μm,体宽１３μm~１５μm.卵为长椭圆形,大小约８３μm×３８μm.会阴花纹因 线虫种类不同呈现出不同特征(见图A􀆰１).南方根结线虫背弓高,呈方形,平滑至波浪状,在侧面一些线 纹具有分支,但无明显的侧线.爪哇根结线虫的会阴花纹背弓近圆形而扁平,且背面线纹和腹面线纹形成 侧沟,很少有线纹穿过.花生根结线虫的会阴花纹背弓扁平至圆形,背面线纹在侧线出有分叉,腹面线纹 形成肩状突起.北方根结线虫的会阴花纹为近圆形至扁平的卵圆形,背弓不高侧线不明显,线纹平滑或呈 波浪形,在尾端具有刻点.象耳豆根结线虫会阴花纹特征主要表现在整体呈卵圆形到椭圆形,背弓较高, 线纹较细由平滑到波浪状,尾尖区环纹不规则,侧线不明显(见图A􀆰１). 　　注:A为南方根结线虫(Meloidogyneincognita)、B为北方根结线虫(M􀆰hapla)、C为爪哇 根结线虫(M􀆰javanica)、D为花生根结线虫(M􀆰arenaria)、E为象耳豆根结线虫 (M􀆰enterolobii). 图A􀆰１　主要根结线虫的会阴花纹描线图(参考SN/T４７２３) ５