2 0 2 5 0 4 2 7 发 布 － － 2 0 2 5 0 8 0 1 － － 实 施 生 姜 茎 基 腐 病 抗 性 鉴 定 技 术 规 程 1 6 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 2 0 C C S B 4 7 1 9 — 2 0 2 5 T e c h n i c a l c o d e o f p r a c t i c e f o r r e s i s t a n c e e v a l u a t i o n o f g i n g e r a g a i n s t p y t h i u m s o f t r o t d i s e a s e Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４７１９—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:江苏省农业科学院、全国农业技术推广服务中心、安丘市农业技术推广中心、江苏省 农垦农业发展股份有限公司、江苏省植物病理学会、济南市农业科学研究院、湖北省农业科学院经济作物 研究所、河北省唐山市农业科学研究院、山东省寿光蔬菜产业集团有限公司. 本文件主要起草人:魏利辉、周阳、张传伟、周冬梅、李艳朋、李承永、郭凤领、孙逊、史秀娟、王晓宇、 邓晟、冯辉、季英华、张金凤、赵敏、陈虞雯、田素波. ⅠNY/T４７１９—２０２５ 生姜茎基腐病抗性鉴定技术规程 １　范围 本文件确立了生姜茎基腐病抗性鉴定程序,规定了材料准备、接种及抗性鉴定阶段操作,描述了标记 方法和过程记录等证实方法. 本文件适用于生姜(ZingiberofficinaleRosc)品种及种质资源材料对茎基腐病(pythiumsoftrotdisＧ ease)的抗性鉴定及评价. ２　规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件. ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 生姜茎基腐病　gingerpythiumsoftrotdisease 由群结腐霉(Pythiummyriotylum)侵染生姜而引起的一种卵菌病害.茎基腐病病原菌及发病症状 见附录A. ４　鉴定程序 生姜茎基腐病抗性鉴定程序包括材料准备、接种和抗性评价３个阶段.鉴定流程如图１所示. 图１　鉴定流程 ５　材料准备 ５􀆰１　培养基准备 ５􀆰１􀆰１　１０％V８培养基 按照１００∶１(V/w)的比例在V８复合果蔬汁中加入碳酸钙,然后以５０００r/min转速离心１０min,取 上清液,弃下部沉淀物.在上清液中加入９倍体积的蒸馏水,配制成１０％的V８培养基,固体培养基按照 １􀆰５％的比例加入琼脂.在(１２１±１)℃条件下灭菌２０min. ５􀆰１􀆰２　组培诱导、继代培养基 MS培养基中加入６Ｇ糠氨基嘌呤(１􀆰０mg/L~１􀆰５mg/L)、萘乙酸(０􀆰５mg/L~０􀆰６mg/L)、琼脂 (４０００mg/L~６０００mg/L)和蔗糖(２００００mg/L~３００００mg/L),利用氢氧化钾将pH调到５􀆰８,分装入 １NY/T４７１９—２０２５ 管(瓶),在(１２１±１)℃条件下灭菌２０min,冷却备用. ５􀆰１􀆰３　生根培养基 １/２MS培养基,利用氢氧化钾将pH调到５􀆰８,分装入管(瓶)在(１２１±１)℃条件下灭菌２０min,冷却 备用. ５􀆰２　基质准备 将草炭、蛭石和细沙按体积２∶１∶１混合均匀,于(１２１±１)℃湿热条件下灭菌３０min. ６　接种 ６􀆰１　生姜材料准备 ６􀆰１􀆰１　姜丛芽 选取无病健壮饱满的姜块,冲洗干净后,埋于洗净的沙床中,在２０℃~２５℃条件下催芽.用刀片切 取１cm~２cm的嫩芽,清洗后,在无菌条件下,用７５％酒精浸泡１０s~３０s,后用无菌水冲洗３次~５次. 吸水纸吸干后,切取分生组织０􀆰１mm~０􀆰３mm生长点,迅速接入有诱导培养基的试管或培养瓶中,每瓶 接种１个生长点,注明品种、编号和接种日期.在温度２５℃~２８℃,光照时数１０h/d~１６h/d,光照度 １５００lx~３０００lx条件下培养３０d~６０d,诱导微型姜丛芽.可选取“莱芜大姜”作为感病对照. ６􀆰１􀆰２　生姜组培苗 将姜丛芽切成０􀆰４cm~０􀆰６cm大小,转入继代组培培养基进行增殖培养,以后每隔２５d~３５d继代 培养.当小苗长至２cm~３cm高时,转入１/２MS生根培养基进行生根培养. ６􀆰１􀆰３　炼苗和移栽 组培苗长至４片~６片叶子、株高６cm~８cm时,打开组培瓶盖,自然环境条件下放置２d~３d;将苗 取出,用清水小心洗净根上的培养基,移栽至装有５􀆰２所准备基质的一次性塑料杯中,每个塑料杯子１株 苗,置于温度(２５±１)℃、湿度７０％~８０％条件下培养生长. ６􀆰２　接种体准备 在超净工作台中,将群结腐霉菌接种于V８固体培养基上,恒温培养箱２５℃条件下生长至覆盖满平 板.茎基腐病菌的保存方法按附录B的规定执行. 将小麦粒用水浸泡１２h~１４h,取适量分装于可灭菌的容器内,并在(１２１±１)℃条件下高压灭菌 ９０min.在超净工作台中将灭菌后的小麦种子平铺在培养好的群结腐霉平板中,恒温培养箱２５℃条件下 继续培养７d,待灭菌小麦粒长满病原菌后用于接种. ６􀆰３　接种时期 移栽１４d~２１d,组培苗长出２片~３片新叶,可用于病原菌的接种. ６􀆰４　接种方法 接种时在离姜苗茎基部２cm处,４个不同方向打孔,每孔接种１粒带群结腐霉菌的小麦粒,每个待测 品种接种１０株,重复３次. ６􀆰５　接种后管理 生姜苗在温度(２５±１)℃、相对湿度７０％~８０％,自然光照条件下进行正常管理. ６􀆰６　鉴定后材料处置 鉴定完毕后将生姜植株、残体及土壤基质集中进行无害化处理,以防止病害从实验室传播出去. ７　抗性评价 ７􀆰１　病情调查 接种后７d~１０d调查.调查时检查每株生姜苗发病症状,根据具有典型症状的叶片比例确定病情 级别,病情级别的划分见表１. ２NY/T４７１９—２０２５ 表１　病情级别的划分 病情级别 地上部症状 ０ 姜苗叶片绿色,正常生长 １ 叶鞘和１/３叶片变黄 ２ 姜苗存活,但整株叶片全部变黄 ３ 整株死亡 病情指数(DI)按公式(１)计算. DI＝∑(s×n) N×S×１００ (１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: s———各病情级别数值; n———各病情级别病株数; N———调查总株数; S———最高病情级别数值. ７􀆰２　有效性判别 当感病对照材料的病情指数大于７０􀆰０(DI＞７０􀆰０)时,该批次抗性鉴定判定为有效. ７􀆰３　抗性评价标准 抗性评价标准划分为７个级别,见表２. 表２　生姜对茎基腐病抗性评价标准 病情指数(DI) 抗性水平 DI＝０ 免疫(IM) ０＜DI≤１０􀆰０ 高抗(HR) １０􀆰０＜DI≤３０􀆰０ 抗病(R) ３０􀆰０＜DI≤５０􀆰０ 中抗(MR) ５０􀆰０＜DI≤７０􀆰０ 中感(MS) ７０􀆰０＜DI≤９０􀆰０ 感病(S) DI＞９０􀆰０ 高感(HS) ７􀆰４　抗性鉴定报告 依据生姜鉴定材料３次重复鉴定的病情指数(DI),确定生姜材料抗性水平.按照附录C填写鉴定记 载表格,编写正式鉴定报告. ８　证实方法 ８􀆰１　标记方法 在生姜茎基腐病抗性鉴定材料准备阶段需要对所用的生姜品种进行标记,标记的内容包括: a)　品种名称; b)标记的编号; c)做标记的试验人员姓名; d)标记的时间; e)其他. ８􀆰２　过程记录 在执行第６章和第７章所规定的各个阶段的程序指示过程中,记录并保留以下内容: a)　执行各个阶段程序指示的人员姓名; b)时间; c)地点; ３NY/T４７１９—２０２５ d)具体操作内容; e)操作的结果; f)其他. ４NY/T４７１９—２０２５ 附　录　A (资料性) 茎基腐病病原菌及发病症状 A􀆰１　学名和形态描述 A􀆰１􀆰１　学名 病原为群结腐霉(PythiummyriotylumDrechsler),病原为群结腐霉,属藻物界卵菌门卵菌纲霜霉目 腐霉科腐霉属. A􀆰１􀆰２　形态描述 茎基腐病菌菌落在V８培养基上无特定形态.菌丝发达,分枝,３􀆰６μm~９􀆰２μm.孢子囊由膨大与不膨 大菌丝共同组成,膨大部分指状或裂瓣状,顶生或间生,(２３~６５９)μm×(１１~１７)μm,平均２２８􀆰４μm× １３􀆰３μm;每个孢子囊内可产生４０个左右游动孢子,游动孢子肾形,双鞭毛,(１１􀆰６~１６􀆰９)μm×(９􀆰２~ １１􀆰６)μm,平均１３􀆰７３μm×１０􀆰４２μm;休止孢子直径约１２μm,萌发产生芽管.藏卵器球形或近球形,平滑, 顶生或间生,偶有２个串生,直径２６μm~３４μm,平均３０􀆰８μm.雄器棒状或钩状,(７􀆰７~１５􀆰４)μm×(４􀆰２~ ８􀆰５)μm,平均１０􀆰９μm×５􀆰６５μm,着生于分枝的雄器柄顶端,与藏卵器异丝生,以顶端与藏卵器接触,每个 藏卵器与(１个~)４个~５个雄器交配.卵孢子球形、平滑,不满器,偶尔满器,２３μm~３０μm(平均 ２７􀆰５μm),壁厚１􀆰５μm~２􀆰０μm(~２􀆰４μm),平均１􀆰８１μm,内含储物球和折光体各１个. A􀆰２　生姜茎基腐病症状 发病初期,茎基部出现大小不等的水渍状斑,逐渐扩大,植株下部叶片沿叶尖及边缘向下、向内变黄, 并逐渐向上部叶片扩展,发病后期病斑环绕茎基部一周,导致茎