ICS 65.020.30 CCS B 40 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 4169—2025 奶绵羊常规及性控冷冻精液生产技术规程 Code of practice for production of dairy sheep frozen conventional semen and sexed -semen 2025-08-15发布 2025-09-15实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 4169 —2025 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由内蒙古大学、内蒙古自治区农牧业技术推广中心提出。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（ SAM/TC 19）归口。 本文件起草单位：内蒙古大学、内蒙古自治区农牧业技术推广中心、内蒙古农业大学、内蒙古乌兰 察布市畜牧工作站、呼和浩特市农牧技术推广中心、内蒙古乐科生物技术有限公司、河套学院、内蒙古 丰东知盈牧业科技有限公司、内蒙古赛科星家畜种业与繁育生物技术研究院有限公司、内蒙古自治区农 牧业科学院、蒙天然牧业科技发展有限公司。 本文件主要起草人：王申元、武志红、张立、刘永斌、李喜和、张立果、武霞霞、董志岷、寇慧娟、 苏小虎、宋永利、张滕、赵高平、朱怡静、张功、包花拉、刘光男、刘建宁、莫德日乐吐、刘权、刘信、 阿仑、丁瑞、周扬、杨燕燕 、萨仁格勒。 DB15/T 4169 —2025 1 奶绵羊常规及性控冷冻精液生产技术 规程 1 范围 本文件规定了奶绵羊常规及性控冷冻精液生产的器具准备与消毒、 溶液配制、 精液采集、 精液处理、 精液冷冻、冷冻精液质量检验、贮存和运输要求。 本文件适用于奶绵羊常规及性控冷冻精液的生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 20557 山羊冷冻精液 GB/T 31581 牛性控冷冻精液生产技术规程 NY/T 3186 羊冷冻精液生产技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 奶绵羊 dairy sheep 以产奶为主要生产方向的绵羊品种。 顶体完整率 acrosome integrity rate 顶体完整的精子数量占所观察精子数量的百分比。 质膜完整率 plasma membrane integrity 质膜完整的精子数量占所观察精子数量的百分比。 冷冻精液 frozen semen 经特殊方法处理并超低温冷冻后在液氮中（ -196 ℃）长期保存的精液。 4 器具准备与消毒 DB15/T 4169 —2025 2 按照NY/T 3186 要求执行。 5 溶液配制 精子稀释液 按照附录 A执行。 其它溶液 精子分离缓冲液、 精子荧光染色液、食品红染色液、 精子染色原液和精子收集液 按照GB/T 31581 要 求配制。 6 精液采集 按照NY/T 3186 要求执行。 7 精液处理 精液品质检查 7.1.1 鲜精外观 正常的精液色泽为乳白色或淡黄色，质地均匀、无异物。 7.1.2 鲜精密度 精子密度测定仪检测鲜精密度，合格鲜精精子密度≥ 8×108个/mL。 7.1.3 鲜精活力 活力检查按照 GB 20557 要求执行，合格精子活力≥ 70%。 常规精液稀释 7.2.1 稀释密度 精液稀释解冻后每支 0.25 mL细管中前进运动精子数≥ 1.5×107个。 7.2.2 稀释步骤 评估合格的精液依据最终精子密度为每毫升不小于 2×108个计算出稀释后总体积。选用合适体积的 器皿加1倍体积37 ℃预热的 TrisA液稀释； 37 ℃水浴10 min后加2倍体积的 TrisA液稀释；再水浴 10 min 后加TrisA至总体积的一半稀释，水浴 10 min。TrisA稀释后的精液封口后置于含 37 ℃水的250 mL烧杯 中，在4 ℃低温柜中平衡 2 h，加冷藏的 TrisB液至总体积，再在 4 ℃低温柜中平衡 1 h，待分装。 性控精液分离、稀释 7.3.1 精子分离 DB15/T 4169 —2025 3 评估合格的精液使用 TrisA液按体积1:1等温稀释后，置于 18 ℃～20 ℃的环境下保存、待用。精子 分离步骤按照 GB/T 31581 要求执行。分离精子收集液中每毫升添加 0.01 mg～0.05 mg的过氧化氢酶和 0.2 mg～0.5 mg的谷胱甘肽还原酶。 7.3.2 分离精子稀释 分离后的精子收集液在 4 ℃条件下平衡 90 min，然后4 ℃、850 g离心20 min，去除上清液，用含 20%卵黄的TrisA液稀释精子， 之后添加等体积的 TrisB液， 平衡20 min； 然后用等体积的 TrisA液和TrisB 液将最终精子密度调整为每毫升 ≥1×107个。 7.3.3 稀释密度 精液稀释解冻后每支 0.25 mL细管中前进运动精子数≥ 1×106个。 精液分装与标识 平衡后的精液在 4 ℃条件下用无菌 0.25 mL细管灌装、 封口、 印字， 细管上横向打印生产单位代号、 品种、种公羊号、生产日期或批号、是否性控等标识信息（按照附录 B执行）。 8 精液冷冻 在4 ℃条件下将分装后的细管按照棉塞同一方向码放在冷冻架上，然后放入程序控制冷冻仪中。 冷 冻程序设置为： 4 ℃～-10 ℃时降温速率 5 ℃/min；-10 ℃～-100 ℃时降温速率 60 ℃/min；-100 ℃～ -140 ℃时降温速率为 20 ℃/min。其他操作按照程序控制冷冻仪操作规程执行，冷冻结束后进行置液氮 中包装、保存。 9 冷冻精液质量检验 精液解冻 水浴37 ℃恒温后，迅速从贮存罐中取出预留冻精， 37 ℃水浴中 45 s；取出细管用无菌吸水纸擦拭 干净，剪掉没有海绵塞一端封口，用推针推动海绵塞，将精液推入 1.5 mL离心管中，待检。 解冻后合格标准 9.2.1 细管外观 细管无裂痕，封口严密，标识清晰。 9.2.2 活力 解冻后精子活力≥ 30%。 9.2.3 精子畸形率 精子畸形率≤ 20%。检测方法按照 GB 20557 要求执行 。 9.2.4 细菌数 细菌数≤ 800个/剂。检测方法按照 GB 20557 要求执行。 DB15/T 4169 —2025 4 9.2.5 顶体完整率 顶体完整 率≥45%。检测方法按照附录 C执行。 9.2.6 质膜完整率 质膜完整 率≥35%。检测方法按照附录 D执行。 10 贮存和运输 按照GB 20557 要求执行。