ICS 65.020.99 CCS B 04 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 4152—2025 玉米秸秆低温高效降解菌剂制备技术规程 Technical code of practice on preparation of low temperature and high efficiency degradation agent for corn stalk 2025-08-15发布 2025-09-15实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 4152 —2025 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（ SAM/TC 20 ）归口。 本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古自治区农牧业科学院。 本文件主要起草人：高聚林、于晓芳、张赛楠、青格尔、马达灵、屈佳伟、韩升才、胡树平、王志 刚、孙继颖、王富贵、包海柱、苏治军、王振、谢岷、李懿璞、刘剑。 DB15/T 4152 —2025 1 玉米秸秆低温高效降解菌剂制备技术 规程 1 范围 本文件规定了玉米秸秆低温高效降解菌剂制备的菌种选择、菌液发酵、菌剂制备、质量要求等技术 要求。 本文件适用于玉米秸秆低温（ 4 ℃～15 ℃）降解菌剂的制备 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 20287 农用微生物菌剂 DB15/T 2770 玉米秸秆低温高效降解菌筛选技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 CFU（菌落形成单位） colony-forming units 在规定的培养条件下，测定细菌悬液、染菌载体等样本 中含有的活菌数量。通过计算长成的单个菌 落数，而得到单位体积菌悬液中或染菌载体上的存活试验菌菌数（ CFU，colony-forming units ）。 OD值（吸光值） optical density 光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收的能量，特定波长下，同一被检测物的浓度与 被吸收的能量成定量关系。被检测物吸收的光密度，是检测方法里的专有名词，检测单位用 OD值表示， 1OD=log10 （1/trans），其中 trans为检测物的透光率 T值。 4 菌种选择 菌种组成 菌种由6株细菌组成，分别为 蜡样芽孢杆菌（ Bacillus cereus ）、枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis ）、假单孢菌（ Pseudomonas sp. strain SeaQual）、粪产碱杆菌（ Alcaligenes f aecalis）、 恶臭假单胞菌（ Pseudomonas putida ）和洛菲不动杆菌（ Acinetobacter lwoffii ）。 菌种指标 DB15/T 4152 —2025 2 菌种满足表1，按照DB15/T 2770 执行。 表1 秸秆降解能力指标 项目 数值范围 纤维素酶活性（ U/mL） ≥1.5 木聚糖酶活性（ U/mL） ≥2 木质素过氧化物酶活性（ U/L） ≥50 锰过氧化物酶活性（ U/L） ≥200 漆酶活性（ U/L） ≥150 秸秆失重率（ 14天） ≥30% 菌龄 选择处于对数生长期且活菌数最多时期的菌液作为种子液进行扩繁发酵。单菌 OD值≥1.0，单菌 活菌数≥1.0×107 CFU/mL，活菌数和 OD值的测定方法按照 GB 20287 执行。 5 菌液发酵 仪器设备 高压蒸汽灭菌锅、紫外分光光度计、发酵罐（带 pH电极和溶氧电极） 、高速冷冻台式离心机、恒温 培养箱、恒温振荡培养箱等 。 培养基 胰蛋白胨10 g、酵母提取物 5 g、氯化钠 10 g、蒸馏水 1 L，初始pH值为自然值（ 6.65±0.15）。 培养基在使用前于高温灭菌锅中 121 ℃灭菌20 min。 时间 将菌株等体积混合后接种于发酵培养基中， 28 ℃条件下发酵 28 h～32h，菌液OD值、活菌数、溶 氧量、pH值等指标达到表 2要求。 表2 菌液发酵及菌剂制备指标 项目 数值范围 混合菌液 OD值 ≥1.5 混合菌液活菌数 ≥1×1010 CFU/mL 混合菌液溶氧量 ≤20% 混合菌液 pH值 7～8 6 菌剂制备 配方 DB15/T 4152 —2025 3 以玉米秸秆外皮粉为吸附剂，以淀粉和麸皮为保护剂，吸附剂与保护剂的比例为 1:3，两种保护剂 间的比例为 1:3，即玉米秸秆外皮粉：淀粉：麸皮 = 4:3:9。 冷冻干燥 发酵液在 4 ℃、11292×g条件下离心 5 min，获得沉淀物（菌体质量约为 1 g/40 mL ，菌含量 ≥1 ×1010 CFU/g） ，按照菌剂配方进行配制，在冷冻干燥机中冻干，制备成粉状菌剂。冷冻干燥菌剂活菌数 ≥1×1010 CFU/g。 保藏 将菌剂真空密封包装，置于冷藏 （4 ℃）条件下保藏，每隔 1个月测定菌剂活菌数的存活率≥ 90%。 7 质量要求 菌剂质量符合 GB 20287 的规定。