ICS 65.020.01 CCS B 21 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 4148—2025 马铃薯大茎尖快速脱毒技术 规程 Code of practice for rapid detoxification of potato bigger stem tips 2025-08-15发布 2025-09-15实施 内蒙古自治区市场监督 管理局 发布 DB15/T 4148 —2025 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（ SAM/TC 20 ）归口。 本文件起草单位： 内蒙古自治区农牧业技术推广中心、内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古农业大 学。 本文件主要起草人： 梁东超、苏敏莉、郝文胜、赵远征、王东、李倩、孙宇燕、张龙梅、李树生、 邓澍、薛凯、郭琳、梁炳鲲、孟怀德、慕安琪、张素青、多利娜、林艺馨、张润茗、白玉婷、李燕敏、 张鹏宇、赵倩、王静、刘羽、昊翔 。 DB15/T 4148 —2025 1 马铃薯大茎尖快速脱毒技术 规程 1 范围 本文件规定了马铃薯大茎尖快速脱毒技术的术语和定义、材料选择、催芽处理、材料消毒、材料 扩繁、病毒钝化的技术和方法。 本文件适用于马铃薯生产材料的高效快速脱毒。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 18133 马铃薯种薯 NY/T 1212 马铃薯脱毒种薯繁育技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 大茎尖 bigger stem tip 区别于常规 0.1 mm～0.3 mm茎尖分生组织，切取的 0.5 mm以上植株茎顶端生长区段。 病毒钝化 virus inactivation 带病毒植株体经过特定条件处理后，其体内病毒丧失或侵染速度变慢的现象。 4 材料选择 选择具有本品种 /品系典型特性、生长健壮，按照 GB 18133 要求无类病毒的块茎作为脱毒基础材 料。 5 催芽处理 将入选材料通过自然发芽，待顶芽生长至 2 cm～3 cm时待用。 6 材料消毒 DB15/T 4148 —2025 2 取5～10个1 cm顶芽放入烧杯中，用 2层纱布封口，在自来水下冲洗 20 min～30 min；然后用 75%酒精浸泡 10 s，无菌水冲洗 3次；最后用 5%次氯酸钠溶液浸泡 15 min，无菌水冲洗 3次。经消毒 的顶芽材料放入已灭菌的培养皿中待用。 7 材料扩繁 在超净工作台上，将消毒处理过的顶芽接入 MS培养基中，在 25 ℃条件下，光照 3000 Lx12 h 、 黑暗12 h交替培养，剔除污染苗，扩繁 30株以上保存待用。 8 病毒钝化 钝化培养基配制 配制MS+30 mg/L 病毒唑的钝化培养基，培养基 pH为 5.8。 钝化培养 取步骤7中保存的无菌株 30株，分别切取 1 cm顶端部分组织，接入钝化培养基中进行常规培 养。 高温、弱光辅助培养 钝化培养基中的顶端组织生根后，剔除污染苗，在 37 ℃、弱光 2000 Lx条件下培养 7 d。 大茎尖脱毒 经钝化处理后的材料，全部取其顶芽 0.5 mm接入MS培养基中，分品种 /品系做好编号。在 25 ℃ 条件下，光照 3000 Lx12 h 、黑暗12 h交替培养。 病毒检测 待苗长出 4～5个叶片时，将无污染苗每株按单节切段，扩繁 4～5株，保存 2株，其余株用于病 毒检测。扩繁按照 NY/T 1212 进行。 病毒检测采用酶联免疫吸附法 （ ELISA） ， 无毒材料进行扩繁并保存， 用于原原种生产。 按照 GB 18133 规程确定无毒苗。