团体 标准 T/SHPPA 030—2025 ICS 03.120.01 CCS C 00 生物制品中支原体核酸扩增技术检查法 验证要求 Requirements for validating rapid mycoplasma testing of biologics by nucleic acid amplification techniques 2025 2025 2025-08-05发布 2025-09-05实施 上海医药行业协会 发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/SHPPA 030 —2025 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 引言 ................................ ................................ ................ III 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 总体原则 ................................ ................................ ........... 2 5 技术要求 ................................ ................................ ........... 2 5.1 验证要求 ................................ ................................ ....... 2 5.2 验证参数 ................................ ................................ ....... 3 5.3 干扰物质 试验 ................................ ................................ ... 4 附录A（资料性） 检测原理 ................................ ............................. 7 参考文献 ................................ ................................ .............. 8 全国团体标准信息平台 T/SHPPA 030 —2025 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 上海市生物医药科技产业促进中心、上海医药行业协会提出 。 本文件由上海医药行业协会归口 。 本文件起草单位： 上海市生物医药科技产业促进中心、上海药品审评核查中心、上海农林职业技术 学院、上海医药行业协会 。 本文件主要起草人： 刘厚佳、唐军、陈明伟、郑熊媛、梅妮、张洋、赵思扬、夷征宇、吴耀卫、朱 蓓芬、尉茜、钱洋、徐增辉、韩忠阳、顾莉萍、唐勇、王利俭、杨清、孙晓亮、卢洪秀 徐莉。 本文件首批执行单位： 深圳赛诺菲巴斯德生物制品有限公司、上海细胞治疗集团、上海金检检测有 限公司、北京艺妙神州医药科技有限公司、上海药知科技有限公司 。 全国团体标准信息平台 T/SHPPA 030 —2025 III 引言 支原体是生物制品生产过程中越来越不可忽视的污染源，按照目前的法规和检测方法常指代的是 柔膜菌纲微生物。它们是目前已知的最小最简单的单细胞微生物，具有多形性，生产过程中所使用的除 菌滤膜无法对其有效拦截；对常用抗生素具有一定耐药性；且有黏附性，易污染生产用细胞株 /系且较 难清除。 真核细胞株 /系易受支原体污染，会导致反应系统的效能和产物质量下降，损失成本和生产时间， 对直接用于患者治疗的如细胞治疗产品，其支原体污染的控制尤为重要。 现有支原体检查法检查时间较长，故可通过验证建立快速支原体检查法，用于中间过程控制或产 品放行检查。本文件用于指导生物制品中支原体核酸扩增技术检查法的验证，以确保方法正确性 。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/SHPPA 030 —2025 1 生物制品中支原体核酸扩增技术检查法验证要求 1 范围 本文件给出了生物制品中支原体核酸扩增技术检查法的验证原则及要求。 本文件适用于采用真核细胞株 /系进行生产的生物制品（包括： 重组疫苗、单克隆抗体、偶联抗体、 病毒载体等）及其他生物培养体系生产的疫苗（包括：鸡胚产灭活疫苗等）、细胞治疗产品等支原体核 酸扩增技术检查法的验证管理。 生物制品和细胞治疗产品研发、临床试验，及中间过程控制时采用支原体核酸扩增技术检查法的验 证可参照执行 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 药品生产质量管理规范（ 2010年修订） 药品生产质量管理规范（ 2010年修订）无菌药品附录（征求意见稿）（ 2025年3月14日） 中华人民共和国药典 <9203> 药品微生物实验室质量管理指导原则（ 2025年版） 中华人民共和国药典 <3301> 支原体检查法（ 2025年版） 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 核酸扩增技术 nucleic acid amplification techniques ，NAT 利用引物和聚合酶链式反应（ polymerase chain reaction ）在体外对目标核酸进行特异性扩增的 方法。 3.2 聚合酶链式反应 polymerase chain reaction ，PCR 利用DNA双链复制的原理，在生物体外复制特定 DNA片段的核酸合成技术，通常利用热循环仪完成变 性、退火、延伸三个基本步骤的循环 。 3.3 基因拷贝数 gene copy ，GC 某个基因在生物体基因组中的个数 。 3.4 阳性临界值 positive cut -off point 95%的测试循环中可以检测到的每单位体积样本中的最小目标序列数 。 3.5 全国团体标准信息平台 T/SHPPA 030 —2025 2 专属性 specificity 在预期存在的成分中明确评估目标核酸的能力 。 3.6 检测限 limit of detection ，LOD 样本中可以检测到的目标核酸（或换算成 CFU）的最低量，无需量化为准确数值 。 3.7 耐用性 robustness 当方法测试条件有小的变动时，检验结果不受影响的能力 。 3.8 中间过程控制 in-process control ，IPC 为确保产品符合有关标准，生产中对工艺过程加以监控，必要时进行调节而做的各项检查 。 4 总体原则 4.1 进行支原体检查的实验室，应符合药品生产质量管理规范及无菌药品附录中对质量控制实验室管 理和生物安全的要求，以及中华人民共和国药典 <9203>药品微生物实验室质量管理指导原则的要求。 4.2 在实行支原体 NAT检查法替代药典支原体检查法前，应进行替代方法验证，本文件对验证方法提 供技术指导。 4.3 经评估，企业可参考试剂盒供应商的基本验证报告部分代替验证 。 5 技术要求 5.1 验证要求 5.1.1 取样要求 柔膜菌纲微生物可黏附于真核细胞膜表面，或通过胞吞进入到细胞中，验证时取样应考虑不同类别 样品的代表性，尽可能同时包含细胞组分和上清液。可选择一些无抑制性的样品（如 PBS缓冲液等）来 验证NAT检查法的基准性能，同时可配制一些代表该生物制品实际的样品或类似物（例如 5x106 CHO细胞 /mL的细胞培养基等） 。 5.1.2 菌种 5.1.2.1 可参考各国药典支原体检查法的要求，结合产品原辅料的来源、产品的风险，选择相应的试 验菌株，见表1。 表 1 主要试验菌菌株列表及污染风险 试验菌种 菌种来源举例 污染风险 莱氏无胆甾原体 Acholeplasma Laidlawii 如：ATCC 23206、NCTC 10116 、 CIP 75.27、NBRC 14400 等 在生产过程中使用抗生素的人用和兽用疫苗 及细胞培养