ICS 65.020.20 CCS B 61 团体标 准 T/HBZMXH 00001—2025 白桦组织培养育苗技术规程 Technical procedures and regulations for tissue culture and seedling cultivation of Betula platyphylla 2025 - 06 - 11发布 2025 - 06 - 11实施 河北省林木种苗协会 发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/HBZMXH 00001—2025 目 次 前言 .................................................................................................................................................................... Ⅱ 1 范围 ................................................................................................................................................................ 1 2 规范性引用文件 ............................................................................................................................................ 1 3 术语和定义 .................................................................................................................................................... 1 4 培养基制备 .................................................................................................................................................... 1 5 组培苗生产 .................................................................................................................................................... 2 附录 A（规范性 ） MS基本培养基配方 ......................................................................................................... 5 附录 B（规范性 ） WPM基本培养基配方 ...................................................................................................... 6 I 全国团体标准信息平台 T/HBZMXH 00001—2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由河北省林木种苗协会提出并归口。 本文件起草单位：河北农业大学、河北省林业和草原科学研究院。 本文件主要起草人：樊彦聪、冯树香、陈丽英、刘易超、李泳潭、闫淑芳、李平、刘煜光、代嵩华、 冯君明、周杨、张梦涵、宋佳璇、杜睿哲、齐梓伊、杜豫怡。 II 全国团体标准信息平台 T/HBZMXH 00001—2025 白桦组织培养育苗技术规程 1 范围 本文件规定了白桦（ Betula platyphylla ）组培育苗过程中培养基制备、组培苗生产 等环节的技术要 求。 本文件适用于白桦组培育苗。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用 于本文件。 LY/T 1882—2010 林木组织培养育苗技术规程 3 术语和定义 LY/T 1882—2010界定的植物组织培、外植体、培养基、培养基母液、接种、继代培养的术语和定 义适用于本文件。 4 培养基制备 4.1 基本培养基 基本培养基采用 WPM和MS培养基。 4.2 初代培养基 以白桦叶片为外植体，初代培养选用WPM 培养基（木本植物组织培养基）作 为基本培养基。具体 配方为：WPM+6 -苄氨基嘌呤（ 6-BA）0.5mg/L +吲哚丁酸（IBA ）0.1mg/L +蔗糖 20g/L +琼脂5.5～6.5 g/L。 以白桦茎段为外植体，初代培养选用 MS培养基作为基本培养基。具体配方为： MS+6 -苄氨基嘌呤 （6-BA）1mg/L +吲哚丁酸（ IBA）0.1mg/L +蔗糖30 g/L+琼脂5.5～ 6.5g/L。 4.3 继代培养基 WPM+6 -苄氨基嘌呤（6- BA）1.0mg/L +吲哚丁酸（IBA ）0.1 mg/L +蔗糖20g/L +琼脂5. 0～6.5 g/L。 4.4 生根培养基 1/2MS +吲哚丁酸（ IBA）0.2mg/L +蔗糖20g/L +琼脂5.5～6.5g/L 。 4.5 母液配制与保存 4.5.1 培养基母液配制 浓度 见附录 A、B。 1 全国团体标准信息平台 T/HBZMXH 00001—2025 4.5.2 激素配制浓度 激素浓度 为0.5～1.0mg/m L。 4.5.3 保存 将培养基母液试剂瓶分别贴上标签，标注母液名称、配制倍数和日期，置于冰箱冷藏4 ℃保存。 4.6 培养基配制 4.6.1 母液用量计算 根据培养基配方与培养基配制数量，计算各种母液的用量及配方中其他 成分的用量，并记录在册。 4.6.2 煮制培养基 按照计算结果称量琼脂与蔗糖，加入馏水中，蒸馏水的量以培养基配制体积的 1/2～2/3为宜，加热 溶解，不断搅拌 ，熬至琼脂充分溶解 。 4.6.3 定容 在容器内加入煮制好的培养基，后加入 大量元素母液、钙元素母液、铁元素母液、有机物母液、 微 量元素母液。各母液取用量按照本文件附录 A、B的规定执行。搅拌均匀。根据初代培养、继代培养、 生根培养的要求加入相应种类和用量的生长调节剂。搅拌后加蒸馏水定容。 4.6.4 pH值调节 用0.1mol/L 盐酸或0.1mol/L 氢氧化钠调节pH 值为5.8～6.0。 4.6.5 分装封口 将培养基分装到培养容器中，用封口膜、封口盖封口。 4.6.6 灭菌 将培养基放入高压蒸汽灭菌器内灭菌。灭菌温度121℃，灭菌时间 20min。 4.6.7 保存 灭菌后的培养基 贴上标签，注明名称、配制人、灭菌时间等。放置于 干净、阴凉的室内常温平放保 存，保存时间不宜超过 1周。 5 组培苗生产 5.1 消毒处理 5.1.1 超净工作 台 超净工作台使用前30min 开机并打开紫外灯。接种 时关闭紫外灯，并用75% 酒精擦拭工作台台面 及 内壁。 5.1.2 接种工具 接种用的器皿、接种工具等提前 高压灭菌。 2 全国团体标准信息平台 T/HBZMXH 00001—2025 5.1.3 接种器械 刀、镊子等接种 器械用酒精擦拭或浸泡，再用电热接种工具灭菌器（280 ～320℃）或酒精灯灼烧灭 菌后，置搁置台上冷却至常温使用。 5.2 培养条件 培养室温度控制在（25± 2）℃，空气相对湿度控制在 70%～80%，光照强度 3000～5000 lx，光照时 间14～ 16h，黑暗时间 8～10h。 5.3 外植体初代培养 5.3.1 外植体采集 在生长健壮、无病虫害的母株上采集半木质化枝条，保鲜处理带回实验室备用。 5.3.2 外植体预处理 将半木质化枝条 用洗涤剂清洗干净，后用流水冲洗 1～2h。切取 2cm长度嫩梢与嫩叶 分别放置于烧 杯中，用蒸馏水 冲洗 1～2次。 5.3.3 外植体消毒 在超净工作台上，外植体用75% 酒精消毒30s ，无菌水冲洗3 ～4次，再使用2% 次氯酸钠溶液消毒 10min，无菌水冲洗 3～4次。消毒期间多次晃动容器，以保证外植体与消毒剂充分接 触。 5.3.4 外植体接种 将消毒的嫩梢切成1.0 ～1.5cm茎段，接入初代培养基。叶片切成 0.5～1.0 cm方块，平铺于培养基。 每容器接种1 个外植体，封口后注明品种编号、接种人员、接种日期等，放置于 培养室培养。观察外植 体生长状况，及时挑 除污染外植体；出现褐化及时转接新培养基。