ICS 65.100.30 CCS HBSF B 65 林业 团体 标准 T/HBSF 002—2025 球孢白僵菌粉剂生产技术规程 Code of practice for production of Beauveria bassiana powder formulation 2025 - 08 - 05发布 2025 - 08 - 11实施 湖 北 省 林 学 会 发布 全国团体标准信息平台 T/HBSF 002 —2025 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 一级菌种培养 ................................ ................................ ....... 1 培养基制备 ................................ ................................ ..... 1 分装灭菌 ................................ ................................ ....... 1 菌种复壮 ................................ ................................ ....... 1 接种培养 ................................ ................................ ....... 1 5 二级液体菌种培养 ................................ ................................ ... 1 培养基制备 ................................ ................................ ..... 1 种子罐灭菌 ................................ ................................ ..... 2 种子罐接种培养 ................................ ................................ . 2 发酵罐灭菌 ................................ ................................ ..... 2 发酵罐接种培养 ................................ ................................ . 2 6 三级固体发酵 ................................ ................................ ....... 2 培养基灭菌 ................................ ................................ ..... 2 接种 ................................ ................................ ........... 2 装盘培养 ................................ ................................ ....... 2 干燥 ................................ ................................ ........... 3 7 粉碎提纯 ................................ ................................ ........... 3 粉碎 ................................ ................................ ........... 3 提纯 ................................ ................................ ........... 3 8 质量检验 ................................ ................................ ........... 3 抽样 ................................ ................................ ........... 3 含孢量测定 ................................ ................................ ..... 3 活孢率测定 ................................ ................................ ..... 3 含水率测定 ................................ ................................ ..... 3 杂菌率测定 ................................ ................................ ..... 3 全国团体标准信息平台 T/HBSF 002 —2025 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖北省林业标准化技术委员会提出、归口并宣贯。 本文件起草单位：湖北省林业科学研究院、宜昌兴林生物科技有限公司。 本文件主要起草人：查玉平、赵东容、张文颖、蔡三山、徐小文、张子一、刘印茹、夏永刚、洪承 昊、徐红梅、夏剑萍。 本文件实施应用中存在疑问或 修改意见， 可咨询或反馈至湖北省林学会， 联系电话： 027-87698180 ， 邮箱： [email protected] 。 全国团体标准信息平台 T/HBSF 002 —2025 1 球孢白僵菌粉剂生产技术规程 1 范围 本文件确立了球孢 白僵菌粉剂生产流程， 并规定了球孢白僵菌的一级菌种培养、 二级液体菌种培养、 三级固体发酵、粉碎提纯以及质量检验方法。 本文件适用于湖北省球孢白僵菌粉剂生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 25864 球孢白僵菌粉剂 NY/T 883 农用微生物菌剂生产技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 种子罐 seeding tank 生产中用于菌种扩大培养的小型发酵罐。 发酵罐 fermentation tank 生产中用于菌液扩大生产的大型发酵罐。 4 一级菌种培养 培养基制备 去皮马铃薯 200 g切块（ 1 cm×1 cm×1 cm），加适量去离子水煮沸 30 min，过滤，取滤液，定容到 1000 ml，加入琼脂 20 g，全部溶解后加蔗糖 20 g、牛肉膏 1 g、蛋白胨 1 g、磷酸二氢钾 0.2 g，加热至完 全溶化，用盐酸或者氢氧化钠调 pH值至7。 分装灭菌 按照每支试管（ 20 mm×200 mm）10 m l培养基分装。 121℃， 1.5 MPa灭菌 40 min，放置成斜面。 菌种复壮 菌种复壮按照 NY/T 883 的方法进行。 接种培养 在无菌条件下， 用无菌接种针挑取 25 mm2～50 mm2原种菌块， 接种到斜面培养基上。 于 24 ℃～ 28 ℃ 恒温箱中培养 7 d，进行菌丝形态一致性检验，包括镜检菌丝粗细、分支均匀度，剔除污染和生长不健 康菌株，其余斜面于 4 ℃～ 5 ℃保存备用。 5 二级液体菌种培养 培养基制备 大豆 1%（w/v）熬制豆汁 4 h，过滤，加白糖 1%（w/v），搅拌均匀。 全国团体标