SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2916—2011 出口食品中桔霉素的测定方法 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 Determination of citrinin in food for export- Immunoaffinity column clean-up and HPLC method 行业标准信息服务平台 2011-05-31发布 2011-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2916—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国山东出入境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人：鲍蕾、许艳丽、张艺兵、吕宁、吴振兴、石媛。 行业标准信息服务平台 I SN/T 2916—2011 出口食品中桔霉素的测定方法 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 1范围 本标准规定了使用免疫亲和柱净化结合高效液相色谱测定出口食品中桔霉素的方法。 本标准适用于大米、玉米、辣椒、红曲制品中桔霉素的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样中的桔霉素用甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释后，用免疫亲和柱净化，采用液相色谱结合荧 光检测器测定桔霉素的含量，外标法定量。 4试剂和材料 除特殊规定外，所用化学试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 甲醇:HPLC级 4.2乙腈:HPLC级。 4. 3 三氟乙酸：HPLC级。 4.4氢氧化钠。 4.5 2mol/L的氢氧化钠溶液：称取80.0g固体氢氧化钠（4.4），溶于1000mL水中。 4.6 桔霉素（citrinin）标准品：1mg，纯度≥99.0% 储备液，浓度为100μg/mL，于4℃下保存 4.8标准中间储备液：准确移取1.0mL上述桔霉素标准储备液（4.7）于10mL容量瓶中，用甲醇定 容，浓度为10μg/mL，于4℃下保存。 4.9标准工作液：用上述标准中间储备液（4.8），根据需要配制成适当浓度的标准工作液。 4.10免疫亲和柱：CitriTestTMHPLC柱（非商业性声明），或者相当。 4.11三氟乙酸水溶液：1000mL超纯水中加入0.5mL三氟乙酸（4.3），氢氧化钠溶液（4.5）调节 pH2.5。 4.12稀释液：用氢氧化钠溶液（4.5)将三氟乙酸水溶液（4.11)的pH调节至7.5。 4.13 3洗脱液：甲醇-三氟乙酸水溶液（4.11）（70十30，体积比）。 1 SN/T2916—2011 5仪器与设备 5.1分析天平：感量0.001g。 5.2高速均质器：12000r/min。 5.3高效液相色谱仪配荧光检测器。 5.4混匀器。 5.5 纯水系统。 5.6 玻璃纤维滤纸。 6 操作方法 6.1提取 称取粉碎样品10.0g（精确至0.1g）于250mL具塞锥形瓶中，加入50mL甲醇-水（70十30，体积比） 提取液，以均质器高速搅拌提取2min，过滤，得滤液。移取1.0mL上步的滤液，置于另一干净的容器 中，加入49mL稀释液（4.12)稀释、混匀。以玻璃纤维滤纸过滤几次，直至滤液澄清，随即进行免疫亲 和柱净化。 6.2免疫亲和柱净化 将免疫亲和柱连接于10mL玻璃针筒下，准确移取10.0mL（相当于0.04g试样）上述澄清滤液过 免疫亲和柱，以1滴/s～2滴/s的流速全部通过亲和柱：加入5mL稀释液（4.12）以1滴/s～2滴/s的 流速淋洗柱子，直至空气进人到亲和柱中，弃去全部流出液；准确加人1.0mL洗脱液（4.13）进行洗脱， 洗脱流速为1滴/s～2滴/s。收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。 6.3测定 6.3.1色谱条件 6. 3. 1. 1 色谱柱：ZORBAXSB-C1s柱长150mm，内径4.6mm，粒度5um，或相当者。 6.3.1.2流动相：乙腈三氟乙酸水溶液（60十40，体积比）。 6.3.1.3流速：1.0mL/mim 6.3.1.4检测条件：激发波长331mm，发射波长500nm。 6.3.2 色谱测定 移取适量的标准工作液，以甲醇稀释成5个不同浓度的标准工作液，以其保留时间进行定性，以化 学工作站建立标准工作液中桔霉素的响应值与桔霉素含量的线形方程，并对样液的色谱数据进行处理， 6.3.3空白实验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 7结果计算和表述 用色谱处理器或按式（1)计算试样中的桔霉素含量，计算结果应将空白值扣除。 2