SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2910.2—2011 出口辐照食品的鉴别方法 第2部分：单细胞凝胶电泳法 Identification method of irradiated food for export- Part 2:Single cell gel electrophoresis 行业标准信息服务平台 2011-09-09发布 2012-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2910.2—2011 前言 SN/T2910《出口辐照食品的鉴别方法》分为2部分： 一 第1部分：电子自旋共振波谱法； 一 第2部分：单细胞凝胶电泳法。 本部分为SN/T2910的第2部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、上海市质量监督检验技术研究院。 本部分主要起草人：杨捷琳、张慧、巢强国、韩丽、刘俊平、王敏、王传现。 行业标准信息服务平台 SN/T2910.2—2011 出口辐照食品的鉴别方法 第2部分：单细胞凝胶电泳法 1范围 SN/T2910的本部分规定了含有DNA辐照食品的鉴定方法。 本部分适用于含有DNA的动物源食品（鸡肉、猪肉等）、植物源食品（种籽、干水果制品和调味品 等的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语及定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 星实验DNAcometassay 又称为单细胞凝胶电泳实验，是一种单细胞DNA链断裂检测技术。各种因子诱发的细胞DNA受 损，会引起DNA的高级结构变化，DNA片断将会迁移形成“彗星”状尾部，故称为彗星实验。 标准信息服 3.2 彗星尾长DNAtailing 彗星头部中心到尾部最远端的距离。 3.3 DNA百分含量percentageDNAintail 3. 4 Olive尾矩Olivetailmoment 尾部DNA占总DNA的百分比（3.3）与头、尾部中心间距的乘积。 4原理 分离单个细胞后，将细胞固定在琼脂糖薄层中，使用去垢剂使细胞膜破裂，然后在一定电压下电泳， 含有DNA的细胞经过电离辐射的处理，核酸大分子发生单链断裂或双链断裂，DNA片断将会迁移形 成“彗星”状尾部。辐照过的细胞比未辐照的细胞DNA断裂更剧烈，形成更多DNA碎片，从细胞核向 电泳槽的阳极方向延伸，因此形成的“彗星”会更长、更宽（更多断裂）。未受辐照的细胞会显现出近似环 形或者仅仅只有一个很小的尾巴。 1 SN/T 2910.2—2011 5试剂 所有试剂除特殊注明外，均为分析纯，水参照GB/T6822。 5.1 盐酸：1mol/L 5.2 二甲亚：DMSO。 5.3 磷酸盐缓冲生理盐水(PBSpH7.4)：见A,1。 琼脂糖包被溶液：见A.2 5. 5 制胶溶液：见A.3。 5. 6 EDTA储存溶液0.5mol/L:见A.4。 5.7 TBE储存溶液：见A.5。 5. 8 电泳缓冲溶液：见A.6。 5. 9 裂解缓冲溶液：见A.7。 5. 10 固定液：甲醇。 5. 11 染色液A:90mmol/LNaOH60mL+25%NH,H，O6mL。 5. 12 染色液B：40%（质量浓度）AgNO：。 5.13 染色液C:B液2mL加入A液，振荡至沉淀消失，定容至100mL。 5. 14 显色液：1%（质量浓度）柠檬酸0.5mL+37%（质量浓度）甲醛0.5mL，定容至100mL。 5.15 脱色液：甲醇。 5.16 终止液：将10mL冰醋酸用水稀释至1000mL。 6仪器 6.1 DNA水平电泳槽。 6. 2 6.3秒表。 6.4天平：感量0.001g。 6.5水浴锅。 6.6 加热磁力搅拌器。 6.7 微波炉。 6.8 筛布，孔径为100μm，200μm和500μm，例如尼龙。 6.9 载玻片：（76mmX26mm）单面磨砂。 6. 10 盖玻片：（24mmX60mm）。 6.11 染色缸。 6. 12 显微镜：普通光学显微镜，放大倍数可达100X到400X。 7步骤 7.1单细胞悬浮物的制备 7.1.1概述 制备的琼脂糖凝胶中分布的细胞应不相互重叠。制备细胞悬液时应保持低温，当加人终浓度为 5%～10%的DMSO作为冷冻保护剂时，细胞悬液可在一18℃下保存更长的时间。 2