B40 唐山市地方标准DB1302 DB1302/T448—2016 鸡蛋中金刚烷胺的测定液相色谱串联质谱法 2016-12-01发布 2017-01-01实施 唐山市质量技术监督局发布DB1302/T448—2016 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由唐山市质量技术监督局提出。 本标准由唐山市农牧局归口。 本标准由唐山市畜牧水产品质量监测中心起草。 本标准起草人：周鑫、孙淑玲、张鑫、肖琎、齐彪、刘洋、杜瑞焕、张谊、项爱丽、郑百芹、臧 素敏。DB1302/T448—2016 1鸡蛋中金刚烷胺的测定液相色谱串联质谱法 1范围 本标准规定了鸡蛋中主要违禁物质金刚烷胺高效液相色谱串联质谱测定方法。 本标准适用于鸡蛋中金刚烷胺药物残留量的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单或修订版）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法 3制样 将现场采集的样品放入小型冷冻箱中运输到实验室，在4℃以下保存，一周内进行处理。取适量新鲜 的样品，去壳后混合均匀。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为优级纯，实验用水为GB/T6682规定的一级水。 4.1实验用水：GB/T6682，一级。 4.2甲醇，色谱纯。 4.3正己烷，色谱纯。 4.4乙腈，色谱纯。 4.5甲酸，色谱纯。 4.6甲醇（80%，V/V）：80mL甲醇和20mL水混匀后备用。 4.7三氯乙酸。 4.8三氯乙酸溶液（1%，质量分数）：准确称取1g三氯乙酸于100mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度， 混匀后备用。 4.9甲醇-三氯乙酸溶液（1:1，V/V）：100mL甲醇和100mL三氯乙酸溶液（1%）混匀后备用。 4.10甲酸（2%，V/V）：98mL水和2mL甲酸混匀后备用。 4.11氨化甲醇溶液（5%，V/V）：5mL氨水和95mL甲醇混匀后备用。 4.12金刚烷胺标准品，纯度≥99% 4.13金刚烷胺标准储备液：称取金刚烷胺约10mg，精确至0.01mg，置于10mL容量瓶中，80%甲醇定容 至刻度，配置成1mg/mL浓度的储备液，-18℃保存。 4.14金刚烷胺标准工作液：用金刚烷胺标准储备液稀释成100ng/mL的标准工作液，4℃保存。 4.15苯磺酸型固相萃取柱（150mg，6mL）或相当者。DB1302/T448—2016 24.16滤膜：0.22μm。 5仪器和设备 5.1液相色谱-质谱/质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源。 5.2分析天平：感量为0.00001g和0.01g。 5.3离心机：转速不低于6000r/min。 5.4固相萃取装置。 5.5氮气吹干仪。 5.6涡旋混合器。 5.7具塞塑料离心管：50mL。 6测定步骤 6.1提取 准确称取2g均匀试样，精确至0.01g，置于50mL聚丙烯具塞离心管中，加入10mL甲醇-1%三氯乙酸 溶液(1:1，V/V)，涡旋振荡混匀20min。于6000r/min离心10min。上清液转移至另一50mL离心管中，重 复提取1次，合并2次提取溶液，待净化。 6.2净化 依次用5mL甲醇、5mL水和5mL2%甲酸溶液活化固相萃取柱，将提取液过柱，控制流速。用5mL2% 甲酸溶液、5mL甲醇淋洗固相萃取柱，抽干。5mL5%氨水甲醇溶液洗脱固相萃取柱，收集洗脱液，40℃ 下氮气吹干，1.00mL流动相定容，涡旋溶解，过0.22μm滤膜，待上机。 6.3基质标准溶液的制备 取阴性鸡蛋样品按照6.1、6.2的操作步骤进行，用所得的复溶液配制标准溶液。 6.4测定条件 6.4.1液相色谱参考条件 ⑴色谱柱：HypersilGOLDSilica，100mm×2.1mm，1.9μm； ⑵柱温：40℃； ⑶进样量：5μL； ⑷流动相：A，0.1%甲酸水溶液；B，乙腈； ⑸流速：0.25mL/min，A:B=2:3。 6.4.2质谱参考条件 ⑴离子源：电喷雾离子源（ESI）； ⑵扫描方式：正离子扫描；DB1302/T448—2016 3⑶检测方式：多反应监测（MRM）； ⑷电喷雾电压（IS）：5000v； ⑸气帘气：10L/min； ⑹辅助气1：40psi； ⑺辅助气2：15psi； ⑻雾化器温度：400℃； ⑼金刚烷胺的质谱参数见表1。 表1金刚烷胺质谱参数 化合物名称母离子 （m/z）子离子 （m/z）去簇电压 （DP）/V采集时间 /ms碰撞能量 （CE）/V入口电位 （CE）/V出口电位 （CE）/V 金刚烷胺amantadine152.1135.5* 107.1120 120150 15028 3610 108 12 注：*表示定量离子 6.5液相色谱—串联质谱测定 6.5.1定性确证 被测侧分选择一个母离子，2个子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与混合基质 标准校准溶液中对应组分的保留时间偏差在±2.5%之内；且样品谱图中组分的相对离子丰度与浓度接近的 混合基质标准校正溶液谱图中对应的相对离子丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品 中存在对应的待测物。 表2定性确证是相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度K K>50 20<K<50 10<K<20 K<10 允许最大偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 6.5.2定量测定 外标法定量：在一起最佳工作条件下，对金刚烷胺基质标准校正溶液进行测定，以基质标准校正溶液 浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对待测样品进行定量，样品溶液 中待测物的响应值应在一起测定的线性范围内。 金刚烷胺的多反应监测（MRM）色谱图见附录A，金刚烷胺的添加浓度及平均回收率试验数据见附录 B。 6.6平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。DB1302/T448—2016 46.7空白试验 不称取样品，其余均按照试样步骤进行。 6.8回收率试验 阴性样品中添加标准溶液，按照6.1和6.2操作，测定后计算样品添加的回收率。 7结果计算 金刚烷胺的测定按式（1）计算： 1000 1000VXcm ……………………………………………（1） 式中： X——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg）； c——从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）; V——样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）； m——样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）。 计算结果应扣除空白值。 8检测方法灵敏度、准确度和精密度 8.1灵敏度 金刚烷胺在鸡蛋中的检测限为0.5μg/kg，定量限为1.0μg/kg。 8.2回收率和精密度 见附录B。DB1302/T448—2016 5附录A （规范性附录） 金刚烷胺液相色谱—质谱/质谱多反应监测色谱图 A.1金刚烷胺液相色谱—质谱/质谱多反应监测色谱图 见图A.1、A.2、A.3。 图A.1金刚烷胺总离子流色谱图 图A.2金刚烷胺定量离子色谱图 图A.3金刚烷胺定性离子色谱图152.1>135.5 152.1>107.1DB1302/T448—2016 6附录B （规范性附录） 金刚烷胺在鸡蛋中的平均回收率和精密度（LC-MS/MS法） B.1金刚烷胺在鸡蛋中的平均回收率和精密度 见表B.1。 表B.1金刚烷胺在鸡蛋中的平均回收率和精密度 化合物名称 添加浓度/（μg/kg）鸡蛋 回收率/% 精密度/% 金刚烷胺amantadine2 10 5088.2 92.5 93.07.13 2.24 6.64