DB1302/T 423—2015 鲜板栗中58 种农药残留量 的测定 液相色谱 -质谱 /质谱法 2015-11-25发布 2015-12-25实施 唐山市质量技术监督局 发布 DB1302 唐 山 市 地 方 标 准 B60 DB1302/T423—2015 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由唐山市质量技术监督局提出。 本标准由唐山出入境检验检疫局归口。 本标准起草单位：中华人民共和国唐山出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：侯霞、赵雁冰、鲁学军、宿雅彬、崔奕杰、杨红、李梅、李帅男。 DB1302/T423—2015 1鲜板栗中58 种农药残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本标准规定了鲜板栗中58种农药残留量液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本标准适用于鲜板栗中58种农药残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡 是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 鲜板栗经乙腈均质提取，经ENVI C18+PSA固相萃取柱净化，用乙腈洗脱，氮吹后液相色谱-质谱/质谱 仪 检测，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 氯化钠。 4.4 无水硫酸钠：用前在650 ℃灼烧4 h，贮于干燥器中，冷却后备用。 4.5 ENVI-18柱：12 mL，2.0 g或相当者，用10 mL乙腈预淋活化。 4.6 PSA柱：6 mL，500 mg或相当者，用10 mL乙腈预淋活化。 4.7 标准物质：纯度≥95%。 4.8 标准贮备溶液：1.0 mg/mL。称取适量的标准物质(4.7)，用甲醇溶解并配制成1.0 mg /mL的标准贮备液。 避光保存于4 ℃冰箱中。 4.9 标准工作溶液：根据农药在仪器上的响应灵敏度确定混合标准溶液中各农药的浓度，避光保存于4 ℃冰 箱中。 4.10 基质混合标准工作溶液：将适量混合标准工作溶液用样品空白基质提取液定容到1.0 mL，混匀，配 成基 质混合标准工作溶液，现用现配。 4.11 有机相微孔滤膜：0.22 µm。 5 仪器 5.1 液相色谱-串联质谱仪: 配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2 分析天平：感量为0.01 g。 5.3 均质器：转速不低于10000 r/min。 5.4 离心机：转速不低于5000 r/min。 5.5 固相萃取装置。 5.6 旋转蒸发仪。 5.7 氮气吹干仪。 DB1302/T423—2015 25.8 鸡心瓶：200 mL。 5.9 聚丙烯具塞离心管：100 mL。 6 试样的制备与保存 6.1 试样的制备 取有代表性鲜板栗样品约0.5 kg，将可食部分用组织捣碎机充分捣碎混匀分成两份，装入洁净容器作为 试样，密封，标明标记。 6.2 试样保存 将试样置于-18 ℃冷冻保存。 7 测定步骤 7.1 待测样品溶液的制备 称取鲜板栗样品5 g（精确至0.01g）于100 mL聚丙烯具塞离心管（5.9）中，加入5 g氯化钠（ 4.3）、20 mL乙腈（4.1），在10000 r/min下均质提取1 min，在4000 r/min下离心5 mi n，将上清液倒入鸡心瓶（5.8） 中，重复提取一次，在45 ℃水浴下旋转蒸发浓缩至约1 mL，待净化。 7.2 净化 在ENVI-18柱（4.5）上加2 cm无水硫酸钠（4.4），用10 mL乙腈（4.1）预淋活化，下接 活化好的PSA柱 （4.6）。将上述浓缩液转移到已活化的 ENVI-18+PSA 串联柱上，控制过柱速度在1 mL/mi n以内。用3 × 2 mL 乙腈（4.1）洗涤鸡心瓶，并将洗涤液移入串联柱中，再用20 mL乙腈洗脱，收集洗脱液。在45 ℃水浴下旋转 蒸发浓缩至约0.5 mL，将浓缩液置于氮气吹干仪上吹干，用1.0 mL甲醇溶液定容，超声溶解，经0.2 2 µm滤膜 过滤后，供液相色谱-质谱/质谱测定。 7.3 测定 7.3.1液相色谱-质谱/质谱参考条件 7.3.1.1 色谱条件 a） 色谱柱：2.1 mm ×100 mm，2.7 µm ，C18或相当者； b） 进样量：5.0 µL； c） 柱温：30 ℃。 流动相及梯度见表1。 表1 流动相及梯度 时间/min 流速/ （μL/min） 流动相 A （0.1%甲酸、2mmol/L 乙酸铵水)/% 流动相 B （甲醇）/% 0.0 300 98 2 1.0 300 30 70 8.0 300 30 70 20.0 300 2 98 25.0 300 2 98 25.5 300 98 2 30.0 300 98 2 7.3.1.2 质谱条件 a) 电离源及电压：A组：ESI+源，5500V；B组：ESI-源，-4500V； DB1302/T423—2015 3b) 离子源温度（TEM）：550 ℃； c) 扫描方式：A组：正离子扫描；B组：负离子扫描； d) 检测方式：多反应监测； e) 雾化气：氮气； f) 喷雾气流速（GAS1）：45 psi； g) 辅助加热气流速（GAS2）：55 psi； h) 气帘气流速（CUR）：35 psi； i) 测定农药的参考保留时间和参考质谱条件见附录A。 7.3.2液相色谱-质谱/质谱测定 7.3.2.1 定性确证 在相同实验条件下， 样品中待测物质的保留时间与混合基质标准校准溶液中对应组分的保留时间相一致。 且样品谱图中各组分的相对离子丰度与浓度接近的混合基质标准校准溶液谱图中对应的相对离子丰度进行比 较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中存在对应的待测物。 表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 K K＞50% 20%< K< 50% 10%< K< 20% K≤10% 允许的最大偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 7.3.2.2 定量测定 外标法定量：在仪器最佳工作条件下，混合基质标准溶液进样测定，以混合基质标准溶液浓度为横坐标， 以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对待测样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值 均应在仪器测定的线性范围内。标准物质多反应监测(MRM)色谱图见附录B。 7.4 平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。 7.5 空白实验 除不称取试样外，其余均按上述步骤进行。 8 结果计算 结果按（ 1）式计算： V 1000 X=C × m × 1000 …………………………（ 1） 式中： X 试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（ µg /kg ） ； C 从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ ng/mL ） ； V 样品溶液最终定容体积，单位为毫升（ mL ） ； m 样品溶液所代表的试样质量，单位为克（ g） 。 注：计算结果应扣除空白值。 9 线性、测定低限和回收率 9.1 线性、测定低限 DB1302/T423—2015 4本方法的线性和测定低限见附表C。 9.2 回收率 本方法在阴性样品中添加标准溶液，进行添加回收率试验，各农药的回收率为60.0%～108.5%。 DB1302/T423—2015 5附录 A （资料性附录） 测定农药的参考保留时间和参考质谱条件 A.1 农药的参考保留时间和参考质谱条件 见表 A.1。 表 A.1 农药的参考保留时间和参考质谱条件 序号 农药名称 参考保 留时间 /(min) 定量离子对 定性离子对 DP/（V） CE/(V) CXP/(V) A 组 1 甲氰菊酯 17.8 367∕125.2 367∕125.2;367∕181 60:60 25:40 12:12 2 氯氰菊酯 18.8 433.3∕191.1 433.3∕191.1;433.3∕416.3 50:5 0 23:16 10:10 3 多菌灵 4.71 192.4∕160 192.4∕160;192.4∕131.9 40:40 25: 40 12:12 4 阿维菌素 20.0 895.4∕751.6 895.4∕751.6;895.4∕449.3 50:5 0 57:63 28:28 5 吡虫啉 5.42 256∕209.1 256∕209.1;256∕175.1 90:90 25:28 13:13 6 辛硫磷 11.6 299∕129.1 299∕129.1;299∕115 80:80 30:30 1 2:12 7 涕灭威 5.99 213∕89 213∕89;213∕116 30:30 24:17 12:12 8 三唑磷 8.60 314.1∕162 314.1∕162;314.1∕119 50:50 28:50 12:12 9 异