ICS_11.040.30 YY C 30 中华人民共和国医药行业标准 YY/T15352017 人类体外辅助生殖技术用医疗器械 生物学评价 人精子存活试验 Medical devices for human in vitro assisted reproductive technology- Biological evaluation-Human sperm survival assay 2017-03-28 发布 2018-04-01实施 国家食品药品监督管理总局 发布 YY/T1535—2017 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家食品药品监督管理总局提出。 本标准由中国食品药品检定研究院归口。 本标准起草单位：上海市计划生育科学研究所、中信湘雅生殖与遗传专科医院、中国食品药品检定 研究院。 本标准主要起草人：施惠娟、林戈、孙正怡、顾一骅、章娜、徐丽明、卢光、黄国宁。 I YY/T1535—2017 人类体外辅助生殖技术用医疗器械 生物学评价人精子存活试验 1范围 本标准规定了人类体外辅助生殖技术用医疗器械应用于人精子存活试验的生物学评价的试验 方法。 本标准适用于评价在人类体外辅助生殖技术用医疗器械中与精子直接接触的培养液类及器具/耗 材类产品可能产生的毒性风险，也适用于评价与卵母细胞或胚胎直接接触的培养液类及器具/耗材类产 品可能产生的毒性风险。 本标准不适用于精子制动剂（造成精子运动能力明显下降）、透明质酸酶（影响精子膜，进而影响精 子运动）、配子/胚胎冷冻复苏液（明显不利于精子运动）的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T16886.12医疗器械生物学评价第12部分：样品制备与参照样品（ISO10993-12：2002， IDT) YY/T0995人类辅助生殖技术用医疗器械术语和定义 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 YY/T0995中界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 人精子存活试验humanspermsurvivalassay 利用人类精子与供试品或其浸提液共孵育后精子活力的变化来间接判断受试物对精子、卵子或胚 胎的潜在毒性。 3.1.2 精子活力spermmotility 精液中精子的运动能力，以前向运动精子（progressivemotility，PR）所占全部精子的百分率表示。 3.1.3 精子活力测定testforspermmotility 精子运动能力的测定。 3.1.4 精子活力分级spermmotilitygrading 分为前向运动、非前向运动和不活动。 前向运动（progressivemotility，PR）是指精子主动地呈线性或沿一大圆周运动，不考虑速度。 YY/T15352017 非前向运动（non-progressivemotility，NP）是指所有其他非前向运动方式的精子。如以小圆周泳 动，精子尾部动力不能驱使头部运动，或仅见精子尾部摆动。 不活动（immotility，IM）是指没有运动。 3.1.5 精子活力系数 spermmotilityindex 经过一定培养时间后的精子活力与培养开始时精子活力的比值，反映精子活力的变化情况。 3.1.6 相对精子活力系数relativespermmotilityindex 相同培养时间，试验样品组精子活力系数与阴性对照组精子活力系数的比值，反映供试品对精子活 力的影响程度。 3.2缩略语 下列缩略语适用于本文件。 ART：辅助生殖技术(AssistedReproductiveTechnology) CASA：计算机辅助精子分析(Computer-AidedSpermAnalysis) HSA：人血清白蛋白（HumanSerumAlbumin） HSSA：人精子存活试验（HumanSpermSurvivalAssay） IM：不活动（Immotility） NP：非前向运动（Non-progressiveMotility） PR：前向运动（ProgressiveMotility） SMI：精子活力系数（SpermMotilityIndex） 4试验方法 4.1概述 本试验是采用优化处理后活力保持在90%以上的人类精子，根据待测产品的功能和特性，在相应 培养环节使用待测液体类产品或者与器具/耗材类产品浸提液接触后，37℃继续培养24h，与对照组相 比，精子活力未见显著下降，作为可以接受的指标。通过观察精子活力情况来评价待测产品的质量和潜 在毒性。 4.2主要仪器、器具及耗材 精子计数板、恒温台、光学显微镜、计数器、计时器、温度计、水平式离心机、超净工作台、CO2培养 箱和恒温培养箱。 可以选择经校准的CASA系统作为精子计数和运动分析用仪器。 除供试品外，试验的耗材和试剂需无菌并通过胚胎毒性测试，包括取精杯、移液管、微量移液吸头、 培养血、圆底培养试管、锥底离心管和孵育液。 4.3材料 来源于健康人类精液，精液应采自22岁～35岁健康男性。选用精液的标准是，外观呈现均质性、 2 YY/T1535—2017 4.4方法 4.4.1精子计数和活力测定 4.4.1.1人工计数法 吸取少量精液，置于计数板上，盖上盖玻片，显微镜下检查。将前向运动、非前向运动和不活动的精 子分别计数，至少总计数200个精子，并重复计数一次。精子活力为前向运动精子除以精子总数的百分 数，见式(1)： PR .......(1) 式中： PR—前向运动的精子数目； NP一非前向运动的精子数目； IM—不活动的精子数目。 4.4.1.2计算机辅助精子分析法 根据CASA系统仪器制造商提供的使用指南进行精子计数和活力测定。 4.4.2精子制备 采用上游法制备供试精子样品：取37℃C预热的含5mg/mLHSA的有缓冲体系的人类精子孵育液 置于试管中，取0.5mL新鲜精液插人管底缓慢地加在培养液液面以下。盖紧试管，倾斜45°角置于 37℃恒温培养箱中培养1h。 竖直试管，取上层溶液约0.6mL溶液，计数，并测定精子活力，记录。使用精子活力≥90%的样品 进行下一步试验。 取一份供试精子样品，300g离心5min，弃上清，用含5mg/mLHSA的人类精子孵育液重新悬浮 精子，计数，调整精子浓度为（5士2)×10°精子/mL，并等量分成3组。 4.4.3供试品制备和加样 4.4.3.1液体类供试品 阴性对照组：使用已通过毒性测试的人类精子孵育液。 阳性对照品：在阴性对照样品中添加64μmmol/L的甲醛 供试品组：具体的操作根据供试品产品特性参照附录A进行加样。 4.4.3.2器具类供试品 阴性对照组：使用已通过毒性测试的有缓冲体系的人类精子孵育液。 阳性对照品：在阴性对照组样品中添加64μmmol/L的甲醛。 供试品组：参照GB/T16886.12的要求进行制备。使用通过毒性测试的有缓冲体系的人类精子孵 育液作为浸提液。具体的操作根据供试品产品特性参照附录A进行加样。 4.4.4精子活力测定 将精子和供试品在37℃继续培养24h后，再次测定精子活力。 3