ICS 11.040.20 YY C 31 中华人民共和国医药行业标准 YY/T1286.2—2016 血小板贮存袋性能 第2部分：血小板购存性能评价指南 Performance for platelets storage bag- Part 2:Test guide on evaluation for platelet storability 2017-01-01实施 2016-01-26发布 国家食品药品监督管理总局 发布 YY/T1286.2—2016 前言 YY/T1286《血小板贮存袋性能》分为两个部分： 第1部分：膜材透气性能测定压差法； 一第2部分：血小板贮存性能评价指南。 本部分为YY/T1286的第2部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由国家食品药品监督管理总局提出。 本部分由全国医用输液器具标准化技术委员会（SAC/TC106)归口。 本部分起草单位：中国医学科学院输血研究所、南京双威生物科技有限公司、山东省医疗器械产品 质量检验中心、上海输血技术有限公司。 本部分主要起草人：刘嘉馨、王红、胡政芳、乔春霞、孙晓霞、姜跃琴。 - YY/T1286.2—2016 引言 血小板贮存袋的性能直接影响血小板的贮存质量和贮存期限。影响血小板贮存性能的因素有很 多，除了贮存温度、振荡条件和血小板贮存袋的材料、规格以外，血小板贮存性能还受血小板数量、体积、 变形力等因素的影响。 目前，国内外还没有统一认可的用于评价血小板袋贮存性能的试验方法。本部分通过血小板贮存 袋中保存血小板的功能性试验评价血小板贮存袋的性能，包括血小板的低渗休克反应、PH、目测涡流 （swirling)和聚集反应。同时应注意，用于血小板功能评价的试验还有很多，本部分中只给出了 GB14232.3中推荐的功能评价试验方法指南。血小板贮存评价试验还有葡萄糖浓度、乳酸浓度和P选 择素（CD62p）表达检测等 YY/T1286.2—2016 血小板贮存袋性能 第2部分：血小板存性能评价指南 1范围 本部分给出了血小板袋贮存性能评价试验方法指南，包括血小板低渗休克试验、PH试验、涡流目 测试验和聚集试验。 规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。 GB14232.3人体血液和血液成分袋式塑料容器第3部分：含特殊组件的血袋系统 GB18469全血及成分血质量要求 3 术语和定义 GB14232.3和GB18469界定的术语和定义适用于本文件。 4样品制备与贮存 4.1样品制备 采用特定规格供使用状态的血小板贮存袋，按照血小板袋的实际使用要求保存适宜剂量的新鲜制 备的血小板。 4.2 贮存条件 试验过程中，血小板在20℃～24℃，振荡频率60次/min，振幅5cm的条件下贮存。 贮存期内血小板评价试验项目和时间 按照表1选择试验项目和时间。 表1血小板评价试验项目和时间 血小板低渗休克试验 涡流试验 plI试验 血小板聚集试验 贮存时间 (第6章） (第7章) (第8章) (第9章 采血后1 d 采血后3d N.A 采血后5d 1 YY/T1286.2—2016 表1(续) 血小板低渗休克试验 涡流试验 pII试验" 血小板聚集试验 贮存时间 (第6章) (第7章） (第8章） (第9章) 采血后7 d N.Ab V ，涡流试验观察到没有涡流现象为止。涡流现象消失的当天需进行pII试验。 N.A：不适用。 6血小板低渗休克试验 6.1 试验原理 血小板的低渗休克(HSR)表示血小板在低渗环境中体积膨胀后恢复其正常体积的能力。在富血 小板血浆(PRP)中加入低渗的磷酸盐缓冲液或蒸馏水，使血小板体积膨胀，经历一段时间后血小板细胞 适应低渗环境而体积恢复。采用分光光度计（波长610nm处）检测血小板体积膨胀时导致的透射光增 时间的低渗休克，用以评价待检血小板贮存袋对血小板抗低渗休克能力的影响程度 6.2试验仪器和试剂 6.2.1试验仪器 分光光度计")、血细胞计数仪、尖底试管离心机、可调微量移液器（250μL～1000uL)37℃恒温水 浴、塑料试管、塑料尖底试管。 6.2.2试剂 蒸馏水、磷酸盐缓冲液(PBS)：pH=7.2~7.4。 6.3 样品准备 6.3.1贫血小板血浆 血小板贮存袋保存1d～7d血小板悬液（按照血小板贮存袋的实际使用要求保存适宜剂量的新鲜 制备的血小板),分别于保存的第1d、3d、5d、7d取样。取血小板悬液约10mL于塑料试管中，以 1600g～1650g离心10min，取上清液得贫血小板血浆（PPP）。PPP中血小板浓度低于1×1010/L。 6.3.2富血小板血浆 血小板贮存袋保存1d～7d血小板悬液（按照血小板贮存袋的实际使用要求保存适宜剂量的新鲜 采集的血小板)，分别于保存的第1d、3d、5d、7d取样。用血细胞计数仪计数血小板浓度，取2mL用 6.3.1制备的PPP调节血小板浓度至2X1011/L～4×1011/L，即得富血小板血浆（PRP)。 6.4 试验步骤 6.4.1分光光度计开机预热30min，波长调至610nm。 1）也可使用其他适宜仪器，如血小板聚集仪、生化分析仪等。 2 YY/T1286.2—2016 6.4.2将PPP与PBS以2：1的比例混合，放人分光光度计测试槽，调零点。 6.4.3将PRP与PBS以2：1的比例混合，放入分光光度计测试槽，记录15min内吸光度（OD值）的 变化曲线，此曲线为基线。 6.4.4将PRP与纯化水以2：1的比例混合，放入分光光度计测试槽，记录15min内OD值的变化曲 线，此曲线为测试样品曲线。 6.4.5读取样品曲线中15min时QD值（OD）、样品最小OD值（OD2），以及基线15min时的OD值 (OD,)。 6.5结果计算 按式（1)计算血小板低渗休克： OD, OD2 HSR= X 100% (1) OD. OD2 式中： HSR 血小板低渗休克； OD 样品吸光度值； OD — 样品最小吸光度值； OD。 一对照吸光度值。 7涡流目测法检测血小板形态 7.1试验原理 新鲜的血小板大部分是圆盘碟形，经过长时间保存后的血小板形状可变为圆形。在自然光照射下 碟形血小板会发生光衍射而产生“涡流”现象，而非碟形血小板则不会产生“涡流”现象。本试验通过观 察血小板在不同贮存时间的“涡流”现象，用以评价待检血小板贮存袋对血小板形态的影响程度。 7.2试验步骤 7.2.1准备50W100W的白色光源或其他适宜光源。 7.2.2分别于保存的第1d、3d,5d、7d,将盛有血小板的血小板贮存袋竖直放置，离光源大约20cm~ 50 cm。 7.2.3轻轻晃动血小板贮存袋，使血小板在光源前运动。 7.2.4记录观察到的涡流现象。 7.3试验结果 以“有”或“无”对涡流试验的结果进行判定，评价血小板贮存袋对血小板形态变化的影响。 8pH试验 8.1 试验原理 在血小板的保存过程中，血小板会发生代谢产生乳酸，导致血小板悬液pH发生变化。本试验通过 检测血小板悬液不同保存时间的PH，用以评价待检血小板贮存袋对血小板性能的影响程度。 8.2试验仪器和试剂 8.2.1试验仪器 本部分中推荐使用血气分析仪或pH计。 33