ICS 11. 100 YY C 44 中华人民共和国医药行业标准 YY/T 1173—2010 聚合酶链反应分析仪 Polymerase chain reaction analyzer 2010-12-27 发布 2012-06-01实施 国家食品药品监督管理局 发布 YY/T 1173—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准是评价聚合酶链反应分析仪产品质量的依据 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会（SAC/TC136)提出。 本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会（SAC/TC136)归口。 本标准起草单位：北京市医疗器械检验所、罗氏诊断产品（上海)有限公司、中山大学达安基因股份 有限公司、杭州博日科技有限公司、博奥生物有限公司。 本标准主要起草人：王瑞霞、胡翔华、高旭年、杨宗兵、刘志华、刘豫、 I YY/T1173—2010 聚合酶链反应分析仪 1范围 本标准规定了聚合酶链反应分析仪（以下简称PCR仪)的术语和定义、分类和命名、要求、试验方 法、标志和使用说明书、包装、运输和储存等内容。 本标准适用于对核酸样本进行扩增、检测、分析的PCR仪 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T191包装储运图示标志 GB4793.1测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第1部分：通用要求 GB/T14710医用电器环境要求及试验方法 YY/T0466.1一2009医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号 第1部分：通用 要求 YY0648一2008测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第2-101部分：体外诊断（IVD)医 用设备的专用要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 聚合酶链反应polymerasechainreaction，PCR 聚合酶链反应或多聚酶链反应是一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由 变性一退火一延伸三个基本反应步骤构成。 3.2 聚合酶链反应分析仪polymerasechainreactionanalyzer，PCRanalyzer 基于PCR(聚合酶链反应)技术原理，模拟DNA或RNA的复制过程，在模板、引物、聚合酶等存在 的条件下，特异扩增已知序列，对其进行检测分析的仪器设备 3.3 最大升温速率maximumheatingrate 升温过程中模块单位时间上升的最大温度度数 3.4 平均升温速率 mean heating rate 升温过程中模块单位时间内上升的平均温度度数。 3.5 最大降温速率 maximum cooling rate 降温过程中模块单位时间下降的最大温度度数 1 YY/T1173—2010 3.6 平均降温速率meancoolingrate 降温过程中模块单位时间内下降的平均温度度数。 3.7 模块控温精度 consistency of thermo control 同一循环中，恒温计时开始10s内到计时结束之间数据采集仪所记录的最高温度，与数据采集仪 所记录的最低温度差值的一半。 3.8 温度准确度 accuracy of thermo control 同一循环中，恒温计时开始10s内到计时结束之间，每间隔一定的时间数据采集仪所记录温度的 平均值与模块设置温度差值的绝对值。 3.9 模块温度均匀性uniformityofthermocontrol 模块对应的样本孔之间的温度一致性。 3.10 温度持续时间准确度 durationaccuracyof thermocontrol 模块设定恒温时间与数据采集仪所记录恒温（符合温度显示准确度要求时即认为恒温）时间差值的 绝对值。 3.11 实时荧光PCR Rreal-time polymerase chain reactionPCR 在PCR过程中利用荧光染料释放的荧光能量的变化直接反映出PCR扩增产物量的变化，荧光信 号变量与扩增产物变量成正比，并通过对荧光的采集和分析以达到对原始模板量进行分析的PCR 注：在每个循环中监测扩增产物是否可被检测。 3.12 荧光染料fluorochrome 由短波长激发光激发，释放出可见光的试剂。 ［YY/T0639—2008，定义3.8] 示例：常见的荧光染料有FAM、HEX、TexasRed、VIC、Cy3、ROX等。 3.13 荧光强度检测重复性 repeatibility of fluorescent intensity 对同一检测孔在同一荧光条件下重复荧光强度检测，其检测值的一致性。 3.14 荧光强度检测精密度 precision offluorescent intensity 对多个检测孔在同一荧光条件下重复荧光强度检测，其检测值的一致性。 3.15 阅值循环数Ct(Cp）cyclethreshold，crossingpoint 实时监测扩增过程中，反应管内的荧光信号到达指数扩增时经历的循环周期数。主要的计算方式 是以扩增过程前3～15个循环的荧光值的10倍标准差为阈值，当荧光值超过阈值时的循环数则为值 循环数（Ct）。 4 分类和命名 4.1分类 PCR仪主要由控制系统、电源系统、温控系统、检测系统、外壳部件等部件组成。 2 YY/T1173—2010 根据控温方式可分为空气驱动循环PCR仪、变温金属块PCR仪等；根据是否对核酸定量分为普通 PCR仪和实时荧光PCR仪，普通PCR仪可分为非梯度PCR仪和梯度PCR仪，实时荧光PCR仪根据 采用荧光通道的多少可分为单通道荧光PCR仪和多通道荧光PCR仪。 4.2命名 PCR仪可根据分类不同命名为核酸扩增实时荧光检测系统、实时荧光PCR仪、梯度PCR仪等。 5要求 5.1温度控制 5.1.1升温速率 应符合a)和(或)b)的要求： a）平均升温速率：从50℃～90℃，应不小于1.5℃/s； b）最大升温速率：从50℃~90℃，应不小于2.5℃/s。 5.1.2 2降温速率 应符合a)和(或)b)的要求： a）平均降温速率：从90℃～50℃，应不小于1.5℃/s； b）最大降温速率：从90℃~50℃，应不小于2.0℃/s。 5.1.3 3模块控温精度 应不大于0.5℃。 5.1.4 温度准确度 测定值与设置温度差值绝对值应不大于0.5℃。 5.1.5 5模块温度均匀性 温度差值应在士1℃范围内。 5.1.6 5温度持续时间准确度 温度持续时间与编制温度时间的相对偏差在土5%范围内 5.2荧光强度检测 5.2.1荧光强度检测重复性 用高、中、低浓度每种校准染料重复检测，其变异系数（CV，%)应不大于3%。 5.2.2 2荧光强度检测精密度 在仪器测定范围内，随机选取m（m≥10)个检测孔，用高、中、低浓度每种校准染料进行检测，其变 异系数(CV，%）应不大于5%。 5.3 3不同通道荧光干扰 其他通道荧光检测强度不高于目标通道荧光阈值。 3 YY/T1173—2010 4样本检测重复性 5.4 对高、中、低浓度核酸样本进行检测，Ct值（或浓度对数值)的CV应不大于3%。 5.5线性 5.5.1样本线性 对系列稀释梯度浓度的样本（至少5个梯度)进行检测，各浓度Ct值与浓度对数值的线性回归系数 r绝对值应不低于0.980。 5.5.2荧光线性 对系列稀释荧光染料物质的样本（至少5个梯度）进行检测，各浓度荧光测定值与稀释比例的线性 回归系数r应不低于0.990。 5.6外观 外观应满足以下要求： a) 面板上图形符号和文字应准确、清晰、均匀、不得有划痕； b) 紧固件连接应牢固可靠，不得有松动； 运动部件应平稳，不应卡住、突跳及显著空回，键组回跳应灵活。 电气安全试验 5.7 应符合GB4793.1及YY0648一2008中适用章条的要求， 5.8 环境试验 应符合GB/T14710中适用章条的要求。 6 试验方法 6.1正常工作条件 6.1.1电源电压：220V±22V,50Hz±1Hz。 6.1.2环境温度：15℃~30℃。 6.1.3相对湿度：20%~85%。 6.1.4大气压力：85.0kPa~106.0kPa。 6.1.5 5使用PCR仪适用的试剂盒、校准品及质控物质。 6.1.6 5试验之前应按照生产企业的建议对仪器进行校准。 6.1.7 PCR仪开机后调整，预热30min后进行试验。 6.1.8使用的测温工具精度不低于0.01℃。 注：6.1.1～6.1.4与生产企业标称的产品规格不一致时，以产品规格为准。 6.2 温度控制 6.2.1升温速率 6.2.1.1 测温程序编辑 根据生产企业提供的操作方法，编辑并运行一个在45℃（恒温2min）和95℃（恒温2min）之间循 4 YY/T1173—2010 环的文件。将温度传感器的感温头外涂上适量导热介质（例：矿物油或导热硅脂等），放入模块的测试孔 （该孔应尽量靠近仪器内部传感器）中，另一端连接数据采集仪。开启数据采集仪，确认仪器工作正常， 运行编辑的文件，用数据采集仪记录仪器显示温度到达设定温度，恒温10s后至恒温结束这段时间内 的温度变化。 6.2.1.2平均升温速率 取50℃士0.5℃范围内一温度点，温度记为T^，取90℃士0.5℃范围内一温度点，温度记为TB， 从TA到达T的时间记为t，按照公式（1)计算平均升温速率，结果应符合5.1.1a)的要求。 TB -