ICS 11. 040. 70 YY C 40 中华人民共和国医药行业标准 YY0719.7-—2011 眼科光学 接触镜护理产品 第7部分：生物学评价试验方法 Ophthalmic opticsContact lenscareproducts- Part 7:Biological evaluation test methods 2011-12-31发布 2013-06-01实施 国家食品药品监督管理局 发布 YY0719.7-2011 前 言 YY0719《眼科光学接触镜护理产品》标准分为7个部分： 第1部分：术语； 第2部分：基本要求； 第3部分：微生物要求和试验方法及接触镜护理系统； 第4部分：抗微生物防腐有效性试验及测定抛弃日期指南； 第5部分：接触镜和接触镜护理产品物理相容性的测定； 第6部分：有效期测定指南； 第7部分：生物学评价试验方法。 本部分为YY0719的第7部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分给出的生物学试验方法是根据GB/T16886.1《医疗器械生物学评价第1部分：评价与试 验》的基本原则以及接触镜护理产品的特性，针对接触镜护理产品的生物学评价需求制定而成。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由全国医用光学和仪器标准化分技术委员会（SAC/TC103/SC1)提出并归口。 本部分起草单位：国家食品药品监督管理局杭州医疗器械质量监督检验中心、浙江省医疗器械检 验所。 本部分主要起草人：陈献花、姜晓路、方丽、李雪来。 YY 0719.7—2011 眼科光学手 接触镜护理产品 第7部分：生物学评价试验方法 1范围 YY0719的本部分规定了接触镜护理产品的生物学试验方法。 本部分适用于接触镜护理产品。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T16886.1 医疗器械生物学评价 第1部分：评价与试验 GB/T16886.5医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验 GB/T16886.10 医疗器械生物学评价第10部分：刺激与迟发型超敏反应试验 GB/T16886.11 医疗器械生物学评价第11部分：全身毒性试验 GB/T16886.12 医疗器械生物学评价第12部分：样品制备与参照样品 GB/T28538 眼科光学 接触镜和接触镜护理产品兔眼相容性研究试验 GB/T28539 眼科光学 接触镜和接触镜护理产品防腐剂的摄人和释放的测定指南 YY0719.1 眼科光学 接触镜护理产品 第1部分：术语 YY0719.2 眼科光学 接触镜护理产品 第2部分：基本要求 3细胞毒性试验 3.1目的 本试验是评价接触镜护理产品，和（或)其附着于接触镜或渗人到接触镜中的残留物的潜在毒性。 3.2试剂 小牛血清（胎牛血清）、细胞培养液（细胞生长液、细胞维持液、不含牛血清的细胞培养液）、胰酶溶 液、苯酚、无Ca2+、Mg2+的磷酸盐缓冲液、青霉素、硫酸链霉素、组织培养用琼脂、双倍细胞培养液。 所有试剂经过适宜的方法进行灭菌。 3.3主要设备和器具 超净工作台、二氧化碳培养箱、压力蒸汽灭菌器、电热干燥箱、恒温水浴箱、冰箱、倒置显微镜、光学 显微镜、移液管、细胞培养板（皿）、细胞培养瓶、一次性细菌过滤器等。 所有器皿经过适宜的方法进行灭菌。 所有器血要符合组织培养级别的要求，并适用于哺乳动物细胞培养。 3.4细胞株 可采用ATCCCCL1[NCTCclone929（小鼠成纤维细胞)]或其他适宜的细胞株，试验采用传代 48h～72h，形态良好，生长旺盛的细胞。 YY0719.7—2011 3.5对照样品 3.5.1 阴性对照：无Ca2+、Mg?+的磷酸盐缓冲液。 3.5.2阳性对照：5%的苯酚溶液或其他具有细胞毒性的物质。 3.6供试液制备 3.6.1直接接触人眼的接触镜护理产品（如润眼液、多功能护理液），直接取样品作为供试液。 3.6.2间接接触人眼的接触镜护理产品（如双氧水护理液）按产品说明书模拟实际使用操作，取其最终 接触人体的产物作为供试液。 3.7试验前准备 将已培养48h～72h，形态良好，生长旺盛的细胞制成细胞悬液（可利用胰酶、乙二胺四乙酸二钠或 胰酶十乙二胺四乙酸二钠的消化液），细胞计数测得细胞悬液浓度，并按试验方法要求配制成一定浓度 的细胞悬液。 3.8试验方法—琼脂扩散法 3.8.1制备1×105个/mL的细胞悬液。 3.8.2将细胞悬液加到g60mm培养皿中，每个培养血4.5mL,共6个培养Ⅲ。 3.8.3将所有培养血放人5%CO，培养箱（含体积分数5%二氧化碳气体，下同)（37士1）℃饱和湿度 培养24h，细胞长成单层。 3.8.4弃去原培养液，在每个培养皿中加入4.5mL的“琼脂媒质”。在CO2培养箱中培养约30min， 使其凝固。琼脂媒质为双倍细胞培养基与0.5%组织培养用琼脂等量混合。 注：在混合后和加入到培养血中不得凝固，同时避免高温使培养基中的蛋白质变性或氨氮基酸降解等问题发生。 3.8.5在凝固的琼脂表面加入4.5mL新配制的中性红活性染色液（或其他细胞活性染色液）， （37土1）℃下在暗处培养0.5h，吸出多余的染色液。 3.8.6用直径0.9cm的滤膜吸取试验液100uL，轻轻将滤膜放在琼脂表面，阳性对照组、阴性对照组 和供试液组各平行操作2皿。 3.8.7在5%CO2培养箱中（37±1）℃饱和湿度培养24h～48h。 3.8.8结果分析：在倒置显微镜下观察阳性对照组、阴性对照组和供试液组滤膜正下方和周围细胞的 生长状况以及染料脱色情况。用表1～表3评分系统表进行评分。 表1评分系统(区域指数) 区域指数(Z) 区域描述 在样品的周围和下面没有能观察的区域 1 区域限定在样品正下方 2 样品周围区域≤5mm 3 样品周围区域>5mm，≤10mm 4 样品周围区域>10mm，但没有覆盖整个平板 5 区域覆盖整个平板 脱色区域中细胞溶解（如果有）的程度可用表2来评价： 2 YY0719.7—2011 表2 评分系统（溶解指数） 溶解指数(L) 溶解程度描述 0 没有观察到溶解 1 达到20%的细胞溶解 2 细胞溶解在20%40%之间（含40%） 细胞溶解在40%~60%之间（含60%） 细胞溶解在60%~80%之间（含80%） 5 超过80%的细胞溶解 表3评分系统(反应程度） 评价 反应程度 反应指数R(Z/L) 0 无细胞毒性 0/0~0.5/0.5* 1 轻微细胞毒性 1/1~1.5/1.5 2 中度细胞毒性 2/2~3/3 3 重度细胞毒性 4/4~5/5 *如果反应系数0.5/0.5是从两个1/1和0/0的结果平均获得，则试验需重做。 注：其他可参照的试验方法见附录A。 3.9 结果评价 接触镜护理产品按其预期用途选择不同试验方法并进行相应的结果评价。 3.10 试验报告 试验报告应给出下列信息： a) 供试品名称； b) 生产批号或生产日期； c) 供试液制备方法； (P 试验用培养基、细胞株和阴性、阳性及其他对照品； e) 试验步骤； f) 细胞形态描述、测定数据和其他情况。 4 皮肤刺激试验 4. 1 目的 本试验是对接触镜护理产品在试验条件下产生皮肤刺激反应的潜在性做出评价。 注1：基于动物福利要求，依据GB/T16886.2，供试品若存在皮肤刺激性，则不再进行眼刺激试验。 注2：如制造商使用了与目前市售等同或相类似的接触镜护理产品，可直接进行眼刺激试验。 4.2主要设备和器具 动物天平、注射器。 3 YY 0719.7—2011 4.3试验动物准备 按GB/T16886.10的规定。 4.41 供试液制备 4.4.1直接接触人眼的接触镜护理产品（如润眼液、多功能护理液），直接取样品作为供试液。 4.4.21 间接接触眼睛的接触镜护理产品（如双氧水护理液）按产品说明书模拟实际使用操作，取其最 终接触人体的产物作为供试液。 4.5试验步骤和结果评价 按GB/T16886.10中的单次接触试验方法进行操作和评价。 4.6试验报告 试验报告中应给出下列信息： a） 试验样品名称； b) 生产批号或生产日期； c) 试验动物的描述； (P 供试液制备； e) 试验步骤； f) 观察记录； 结果评价。 g) 急性眼刺激试验 5 5.1 目的 本试验是评价接触镜护理产品引起眼部刺激的潜在性。 注1：如配方中含有已知的眼刺激成分，可不进行本试验。在这种情况下，可在产品标识中对眼刺激性进行适当的 警告，以替代本试验的实施。 注2：如制造商使用了目前市售的接触镜护理产品中未使用过的新防腐剂或活性成分及化学成分，则需依据GB/T 28538进行免眼相容性研究试验。 5.2’试验动物准备 按GB/T16886.10的规定。 5.3供试液制备 5.3.1直接接触人眼的接触镜护理产品（如润眼液、多功能护理液），直接取样品作为供试液。 5.3.2间接接触眼晴的接触镜护理产品（如双氧水护理液）按产品说明书模拟实际使用操作，取其最终 接触人体的产物作为供试液。 5.4试验步骤和结果评价 按GB/T16886.10中的急性接触试验方法进行操作和评价。 5.5试验报告 试验报告中应给出下列信息： 4 YY0719.7—2011 a) 试验样品名称； b) 生产批号或生产日期； c) 试验动物的描述； d) 供试液制备； e) 试验步骤； f) 观察记录； g) 结果评价。 6 急性经口毒性 6.1 目的 本试验