ICS _11.14 YY C 46 中华人民共和国医药行业标准 YY/T 0506.7—2014 病人、医护人员和 器械用手术单、手术衣和洁净服 第7部分：洁净度-微生物试验方法 Surgical drapes, gowns and clean air suits for patients,clinical staff and equipment- Part 7 : Test methods for determination of cleanliness-microbial 2014-06-17发布 2015-07-01实施 国家食品药品监督管理总局 发布 中华人民共和国医药 行业标 准 病人、医护人员和 器械用手术单、手术衣和洁净服 第7部分：洁净度-微生物试验方法 YY/T0506.7—2014 * 中国标准出版社出版发行 北京市朝阳区和平里西街甲2号(100029) 北京市西城区三里河北街16号（100045) 网址www.spc.net.cn 总编室：(010)64275323发行中心：(010)51780235 读者服务部：(010)68523946 中国标准出版杜秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销 * 开本880×1230 01/16印张0.5 字数8千字 2014年11月第一版 2014年11月第一次印刷 书号：155066·2-27562定价16.00元 YY/T0506.7—2014 前言 YY/T0506《病人、医护人员和器械用手术单、手术衣和洁净服》，由以下部分组成： 一第1部分：制造商、处理厂和产品的通用要求； —第2部分：性能要求和性能水平； 一第3部分：试验方法； —第4部分：干态落絮试验方法； 一第5部分：阻干态微生物穿透试验方法； 一第6部分：阻湿态微生物穿透试验方法； 第7部分：洁净度-微生物试验方法。 本部分为YY/T0506的第7部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由国家食品药品监督管理局济南医疗器械质量监督检验中心归口。 本部分主要起草单位：山东省医疗器械产品质量检验中心。 本部分参加起草单位：稳健实业（深圳）有限公司。 本部分主要起草人：王文庆、张步增、郝树彬、宋海波、郑多姿。 I YY/T 0506.7—2014 引言 洁净度-微生物（cleanliness-microbial)，即生物负载，是评价待灭菌的手术单、手术衣和洁净服产品 的微生物污染情况的项目。在对手术单、手术衣和洁净服产品进行灭菌（特别是辐照灭菌)时，生物负载 水平是指导灭菌参数选择的重要指标。同时，手术单，手术衣和洁净服产品需要在净化条件下进行生 产，生物负载水平也是产品生产过程中的环境净化控制、人员净化控制、物料净化控制以及工艺用水控 制等在最终产品上的综合体现。 YY/T0506.2给出了手术单、手术衣和洁净服产品洁净度-微生物的性能要求。YY/T0506的本 部分是YY/T0506.3试验方法的细化，也是GB/T19973.1在手术单，手术衣和洁净服产品生物负载测 定上的应用。 Ⅱ YY/T 0506.7-2014 病人、医护人员和 器械用手术单、手术衣和洁净服 第7部分：洁净度-微生物试验方法 1范围 YY/T0506的本部分给出的方法适用于手术单、手术衣和洁净服产品洁净度-微生物的评价。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T19973.1医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分：产品上微生物总数的测定 YY/T0506.1病人、医护人员和器械用手术单、手术衣和洁净服第1部分：制造商、处理厂和产 品的通用要求 YY/T0506.2 病人、医护人员和器械用手术单、手术衣和洁净服第2部分：性能要求和性能 水平 YY/T0506.3 病人、医护人员和器械用手术单、手术衣和洁净服第3部分：试验方法 3术语和定义 GB/T19973.1、YY/T0506.1、YY/T0506.2和YY/T0506.3界定的术语和定义适用于本文件。 4原理 设定适宜的洗脱程序，采用袋螨动法对试样上自然污染的微生物进行洗脱，对洗脱液进行薄膜过 滤，并对滤膜进行培养计数，得到试样上洗脱的微生物总数。再以产品接种的方式将一定数量的需氧芽 孢接种到无菌的相同试样上，用相同程序进行操作，得到洗脱芽孢总数，用接种芽孢总数和洗脱芽孢总 数求得修正系数。最后，通过修正系数对试样上洗脱的微生物总数进行修正，从而确定试样的生物负载 水平。 5仪器及试剂 5.11dm模板。 5.2勾浆器，配套无菌匀浆袋。 5.3过滤装置，配套无菌滤杯。 5.4无菌微孔滤膜，标称孔径0.45μm。 5.5洁净工作台。 5.6生物安全柜。 YY/T0506.7—2014 5.7恒温培养箱。 5.8压力蒸汽灭菌器。 5.9萎缩芽孢杆菌ATCC9372。 5.10营养琼脂培养基平板。 5.11攻瑰红钠琼脂培养基平板。 5.12 氯化钠注射液。 6试验方法 6.1洗脱菌落数的测定 6.1.1试样制备 在洁净工作台中，以无菌操作的方式将供试产品折叠成五层，用无菌的1dm"模板裁取试样。以最 上层和最下层作为保护层，取中间三层作为试样，分别记为1号、2号和3号试样。 6.1.2试样洗脱 化钠注射液，然后将每个匀浆袋分别放人匀浆器中，设定匀浆器的洗脱参数，推荐将洗脱参数设定为运 行频率2001/min，运行时间1min。启动匀浆器，对试样分别进行洗脱。 6.1.3移入培养基 将过滤装置置于洁净工作台中，以无菌操作的方式将滤膜和滤杯装载于过滤装置上。将每份体积 玫瑰红钠琼脂培养基平板上。 6.1.4培养和计数 28℃恒温培养箱中培养5d。逐日观察菌落生长情况，点计菌落数。 6.1.5结果计算 按式（1)计算每个试样洗脱的菌落总数。 Y,=2(A; +B.) ·(1 ) 式中： Y，一一第i个试样洗脱的菌落总数，CFU； A第i个试样营养琼脂培养基平板菌落数，CFU； B：一一第i个试样攻瑰红钠琼脂培养基平板菌落数，CFU。 i=1,2,3; 按式(2)计算3个试样洗脱的平均菌落数。 -(YI+Y,+Y) ·( 2 ) 式中： Y—3个试样洗脱的平均菌落数，CFU。 2 YY/T0506.7-2014 6.2修正系数的测定 6.2.1制备接种悬液 用适宜的方法制备萎缩芽孢杆菌ATCC9372芽孢悬液保藏备用。临用前用氯化钠注射液对保藏 的芽孢悬液进行梯度稀释以测定其存活芽孢浓度，然后用氯化钠注射液制备接种悬液，使每0.1mL接 种悬液中含有约100CFU萎缩芽孢杆菌芽孢，并精确测定0.1mL接种悬液中的芽孢数。 6.2.2无菌试样制备 用1dm模板裁取3块试样，分别记为a号、b号和c号试样。用制造商推荐的灭菌方式对试样进 行灭菌，备用。 6.2.3试样接种 （约100CFU），涂布均勾，置于洁净工作台中使其干燥。 6.2.4产品洗脱 按照6.1.2进行操作。 6.2.5移入培养基 将过滤装置置于洁净工作台中，以无菌操作的方式将滤膜和滤杯装载于过滤装置上。将3份体积 为200mL的洗脱液分别进行薄膜过滤，将滤膜菌面朝上分别贴于营养琼脂培养基平板上。 6.2.6培养和计数 将三个贴有滤膜的平板置于35℃恒温培养箱中培养3d，逐日观察菌落生长情况，点计菌落数。 6.2.7结果计算 按式（3)计算3个试样洗脱的平均菌落数。 1 X : (X.+X,+X,) ·(3) 式中： X3个试样洗脱平均菌落数，CFU； X。—试样a洗脱菌落数,CFU； X，试样b洗脱菌落数，CFU； X。—一试样c洗脱菌落数,CFU。 按式(4)计算回收率。 R- ×100% ·(4 ) 式中 R——回收率； X——3个试样洗脱平均菌落数，CFU； Z一一接种芽孢数,CFU。 按式(5)计算修正系数。